啮齿类螺杆菌的分离鉴定

目的对分离自啮齿类实验动物的17株螺杆菌进行鉴定,以期获得生物学、遗传学特性典型的菌株作为模式菌株。方法通过生物学特性、16S rRNA序列测定、系统发育树及超微结构分析,对螺杆菌进行种的鉴定。结果确定所分离的17株菌株分为两大类,其中一类为胆汁螺杆菌(H.bilis);另外一类属于螺杆菌属成员。结论所分离到的菌株分别是胆汁螺杆菌和未鉴定到种的螺杆菌,其中胆汁螺杆菌与ATCC51630模式菌株16SrRNA序列比较,相似性达99.6%,可作为检测用的模式菌株。     

幽门螺杆菌临床分离株的REP-PCR分析

应用REP-PCR对来自20例单纯性胃炎和20例消化性溃疡病人的幽门螺杆菌菌株进行基因分型,并运用SAS软件进行聚类分析。结果显示这些菌株按照基因型被分为两大类,但两种来源的菌株在两大类中的比例无明显差异(P＞0.1),提示幽门螺杆菌临床分离株REP-PCR基因型与致病性之间不存在明显相关性。 REP-PCR Analysis of Helicobacter pylori Clinical Strains PENG Ying1,LU Jian-xin1,YE Si-ying2,HUANG Qing-hua2 1.Institute of Cellular and Molecular Medicine,Wenzhou Medical College,Wenzhou,Zhejiang 325027,China; 2.Department of Microbiology,Tongji Medical College,Wuhan 430030,China Abstract:Helicobacter pylori strains isolated from 20 gastritis patients and 20 peptic ulcer patients was genotyped by REP-PCR and was clustered with SAS software.These strains are devided into two categories according to their genotype.But the rate of the two sources of strain in the two categories shows no apparent difference(P＞0.1),indicating that there is no significant close relationship between the genotype and the pathogenicity. Key words：Helicobacter pylori;REP-PCR;genotype     

从猩猩肠道中分离的一株毛滴虫

1984年1月10日从上海动物园的猩猩(Ponge pygmaeus)粪便中检获一种鞭毛虫,即取其新鲜粪便接种于洛克液琼脂血清培养基中,共接种两管,每一培养管各加入青霉素2500单位,链霉素2.5mg;培养于35℃±0.5℃,三天后第一次移种时,培养管不加抗菌素,此后每周转种二次,至10月份连续培养80余代,该虫生长良好,说明这种鞭毛虫可适应于体外培养,所用的这种培养基也较合适。     

一株从高粱蚜分离的镰刀菌的鉴定

一株被误认为是蚜霉(Entomophthora aphidisHoffm)的菌株经鉴定是串珠镰刀菌(Fusariummoniliforme Sheldon)。 “昆虫学报”Vol.9 No 1 刊出“蚜霉菌剂的简易制备及其田间防治棉蚜实验初报”一文,目前该菌已在全国各地推广应用,井已收到防治棉蚜的初步效果。我们对此菌株的分类地位提出异议,经原作者的支持进行了重新鉴定。本文仅记载该菌的形态和培养特性以及学名的鉴定。     

首次从啮齿类和食虫类动物中分离到森林脑炎病毒

1988年,我们从采自云南高黎贡山的卵形硬蜱及患者血液中分离到森林脑炎病毒。1990年,又从该地区10种95只啮齿类中查到森林脑炎病毒抗体;并从社鼠(R.confucianus)、小林姬鼠(A.sylvaticus)和灰腹鼠(R.eha ninus)等8种啮齿类及食虫类中分离到15株病毒,选三株用单克隆抗体进行免疫荧光试验、理化特性、生物学特性及中和试验研究。结果表明,其病毒的抗原性、生物学特性及理化特性与东北株及从卵形硬蜱、患者分离的森林脑炎病毒一致。从啮齿类及食虫类分离到森林脑炎病毒在国内属首次报道。这项研究结果进一步证明,啮食类和食虫类在森林脑炎自然疫源地的保存方面起重要作用。     

从茶尺蠖中分离到一株微小RNA病毒

从核型多角体病毒(PV)感染致死的茶尺蠖幼虫尸体中分离到一株微小RNA病毒(oPV)透射电镜观察纯化的病毒粒子为无囊膜、无表面特征、直径约26nm的球状颗粒.16%的SDS-PAGE显示它有两个分子量为31.5 kDa和28.8 kDa的衣壳蛋白,后者的含量是前者的2.5倍.3′端克隆序列分析表明EoPV基因组3′有poly(A)尾,编码RNA聚合酶(dRp)含有微小RNA病毒RNA聚合酶的八个保守基序,同源性分析表明它与榕透翅毒蛾微小RNA病毒(nPV)亲缘关系最近.这些特点表明该病毒为一株新的微小RNA病毒.     

从茶尺蠖中分离到一株微小RNA病毒

从核型多角体病毒(NPV)感染致死的茶尺蠖幼虫尸体中分离到一株微小RNA病毒(EoPV)透射电镜观察纯化的病毒粒子为无囊膜、无表面特征、直径约26nm的球状颗粒。16％的SDS-PAGE显示它有两个分子量为31．5kDa和28．8kDa的衣壳蛋白，后者的含量是前者的2、5倍。3′端克隆序列分析表明EoPV基因组3′有poly(A)尾，编码RNA聚合酶(RdRp)，含有微小RNA病毒RNA聚合酶的八个保守基序，同源性分析表明它与榕透翅毒蛾微小RNA病毒(PnPV)亲缘关系最近。这些特点表明该病毒为一株新的微小RNA病毒。     

从胃活检组织中分离幽门螺杆菌

比较了不同培养条件和方法对胃活检组织中幽门螺杆菌检出率的影响,从而建立了一种有效的分离培养方法。临床２０例胃活检组织,１４例组织学检查阳性,１０例快速尿素酶和常规尿素酶试验阳性,８例细菌培养阳性,显示此培养方法敏感性５７．１％。     

兰州地区幽门螺杆菌分离株主要毒力基因的研究

本文首次报道了兰州地区胃病患者幽门螺杆菌分离株主要毒力基因ｕｒｅＡ ｖａｃＡ 和ｃａｇＡ的 ＰＣＲ 检测情况。共获 ４１ 株Ｈｐ 分离株,分别来自于慢性胃炎病人（３２ 株）、胃－十二指肠溃疡病人（７株）和胃癌病人（２ 株）。检测结果表明,４１ 株Ｈｐ 分离株的ｕｒｅＡ,ｖａｃＡ 及ｃａｇＡ 的阳性率分别为１００％ ,１００％ 和９７．６％ ;含有ｕｒｅＡ,ｖａｃＡ 和ｃａｇＡ 基因的Ｈｐ 与人类胃部疾患密切相关,而ｃａｇＡ 基因的存在可能与更加严重的胃部疾病有关。Ｈｐ 毒力基因的检测结果与其它地区Ｈｐ 分离株的检测结果相似。作者建议,对ｕｒｅＡ 基因的ＰＣＲ 检测可以作为鉴定Ｈｐ 的一个指标。     

417株临床胆汁分离细菌培养与药物敏感试验结果分析

目的 通过胆汁培养了解胆道感染病原菌分布和病原菌的药敏情况,为抗生素的合理使用提供参考依据.方法 选取2010年1月至2011年12月西安交通大学医学院第一附属医院从临床患者胆汁标本中分离培养出的细菌,所有菌株均采用全自动微生物鉴定/药敏分析仪进行检测,世界卫生组织细菌耐药性监测网提供的WHONET 5.4软件进行数据统计分析.结果 共分离出417株病原菌,其中革兰阴性菌占65.95％,革兰阳性菌占32.37％,真菌占1.68％.药敏结果显示革兰阴性杆菌中肠杆菌科细菌耐药率较低,铜绿假单胞菌与鲍曼不动杆菌耐药率均较高.革兰阳性球菌中葡萄球菌对利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁均敏感,而肠球菌存在万古霉素耐药株.真菌未检出耐药菌.胆道感染病例中,仅分离出1种病原菌的病例比例为76.47％,2种细菌混合感染为22.94％,3种细菌混合感染为0.59％.结论 胆道感染病原菌分布仍然以革兰阴性菌为主,但耐药严重.虽然单独感染仍为主要感染类型,但是重叠感染的病例需要得到重视.     

北京地区实验动物绿脓杆菌分离株MLVA分型

目的通过多位点可变数目串联重复序列分析（multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis,MLVA）分型方法,研究北京地区实验动物绿脓杆菌分离株基因型和分布情况。方法选择13个可变数目重复序列（variable-number tandem-repeat,VNTR）位点,对实验动物及设施中检测出的141株绿脓杆菌的基因组DNA进行重复序列扩增,所得指纹图谱使用BioNumerics软件进行聚类分析,绘制系统发育树和最小生成树（minimum spanning tree,MST）。结果所采用的13个VNTR位点能够对全部分离株进行有效分型。141株绿脓杆菌主要被分为了3个基因群,56个基因型。各群所占比例分别为A群82.3%,B群占12.8%,C群占5.0%,辛普森多样性指数为0.763。同一区域内相邻实验动物单位的绿脓杆菌分离株同源关系较远。结论 MLVA方法对绿脓杆菌具有很好的分型能力,能够有效的追踪绿脓杆菌的来源。北京地区实验动物中绿脓杆菌分离株基因型多态性丰富,但无地域性同源关系。     

从豆制品废水厌氧发酵液分离的一株新的产甲烷球菌

用Hungate厌氧技术,从豆制品废水厌氧发酵液中分离到一株细胞直径为0.5--1.2μm的球形产甲烷细菌,编号8508。该菌株利用H2／CO2和甲酸盐生长产甲烷。生长要求乙酸盐、酵母膏和酪素水解物。最佳生长要求0．5--1．0％的NaCl或MgCl20生长的最适温度为35℃,最适pH 7．0--7．3。DNA的G+C含量为41mol％。菌株8508可能是甲烷球菌属(Metha-nococcus)中的一个新种,但还要通过DNA杂交、荧光抗体等测定证实。     

从霍乱样腹泻患者分离出一株霍乱弧菌不凝集变异株及其鉴定

本文报道从一霍乱样腹泻患者粪便中分离出一株不凝集弧菌。该分离菌株的形态及生化反应等均与霍乱弧菌流行株相似,但与霍乱弧菌“Ｏ”多价血清不凝集。采用限制性核酸内切酶谱分析发现其染色质ＤＮＡ酶切图谱与霍乱弧菌流行株很相似,呈高度同源,认为该不凝集株可能是由霍乱弧菌变异形成,这在震乱流行病学上具有重要的意义。     

两株乳酸菌在小鼠体内对幽门螺杆菌抑制作用的初探

成功地建立了小鼠幽门螺杆菌感染模型,并对两株在体外对幽门螺杆菌有显著抑制作用的乳酸菌,进行了体内预防与治疗作用的初步验证。通过尿素酶反应、细菌培养、病理组织切片检验三种指标测试,证明J16发酵乳能够有效预防幽门螺杆菌感染;小鼠胃中乳酸菌数量和幽门螺杆菌数量相反。     

一株风疹病毒的分离和鉴定

自1962年Weller及Neva和Parkman分别用原代人羊膜细胞和原代绿猴肾细胞分离风疹病毒获得成功后,于1963年McCarthy首次在兔肾传代细胞(RK 13细胞)上观察到风疹病毒的规律性病变,并用于风疹病毒的鉴定。     

一株产紫杉醇真菌的分离

从四川省阿坝地区生长的红豆杉树中,分离到一株内生丝状真菌.在液体培养基中, 该真菌于25℃经过3周发酵,其发酵液经HPLC和MALDI-TOF分析,结果表明,发酵液中含有紫杉醇.因此,这是一株产紫杉醇真菌, 暂定名为Taxomyces sp.     

口服幽门螺杆菌疫苗候选株对小鼠肠道菌群的影响

目的:考察口服幽门螺杆菌疫苗候选株SH02对小鼠肠道菌群的影响。方法:采用PCR扩增的方法检测疫苗用载体菌侵袭性相关基因缺失状况,用豚鼠角结膜侵袭试验进一步确证其是否具有上皮细胞侵袭能力;用小鼠口服灌胃的方式检测SH02在小鼠体内的组织分布,在肠道的存留时间与活菌数;取小鼠灌胃前(0 d)和灌胃后(2、8 d)的粪便样本,提取基因组DNA,用细菌16S r RNA基因高通量测序的方式,分析评价口服幽门螺杆菌疫苗候选株SH02对小鼠肠道正常菌群的影响。结果:载体菌FWL01侵袭性相关基因缺失,不具有对上皮细胞的侵袭能力;SH02经口服灌胃小鼠后不能侵入机体组织内部,仅在小鼠肠道可以检测到疫苗株活菌,灌胃后24、48 h肠道粪便中活菌数分别为1.19×10~5和2.42×10~3CFU/g,72和96 h在小鼠肠道粪便中没有检测到SH02活菌存在;细菌16S r RNA基因高通量测序与分析结果表明,口服幽门螺杆菌疫苗候选株SH02对小鼠肠道菌群不会产生明显的影响。结论:口服幽门螺杆菌疫苗候选株SH02对小鼠肠道正常菌群没有明显影响。