骨髓基质干细胞诱导分化为神经元过程中miR-124和miR-128的表达

目的探讨骨髓基质干细胞诱导分化为神经元过程中miR-124和miR-128的表达变化及作用。方法采用全骨髓培养法体外分离培养获得骨髓基质干细胞,取传代培养至第3代的骨髓基质干细胞,在神经干细胞培养液及细胞因子等条件下诱导其分化为神经元,倒置显微镜下观察其形态变化,应用ABI公司的TaqManMicroRNAAssaysreal-timePCR技术,检测miR-124和miR-128在诱导分化过程中的表达。结果 miR-124分化后神经元的表达是未分化BMSCs的0.051倍(P0.05);miR-128分化后神经元的表达是未分化BMSCs的0.070倍(P0.05)。结论 miR-124和miR-128在骨髓基质干细胞诱导分化为神经元过程中可能起重要作用。     

幽门螺杆菌相关性胃疾病中miR-551b和miR-124a的表达及意义CSCD

目的 检测miR-551b、miR-124a在慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)及胃癌(GC)患者胃黏膜组织中表达水平,探讨miR-551b、miR-124a与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系及在胃癌发生、发展中的作用。方法 选择2018年7月-2019年8月在本院肿瘤科与消化科住院的患者120例,其中CSG患者40例,CAG患者40例,GC患者40例。采用qRT-PCR法检测各研究对象胃黏膜组织中miR-551b、miR-124a表达水平,分析miR-551b、miR-124a水平与H.pylori感染及GC患者临床病理特征的关系。结果 GC组患者胃黏膜组织中miR-551b、miR-124a表达水平低于CSG组、CAG组(P<0.05),CSG、CAG组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);H.pylori阳性感染GC患者胃黏膜组织中miR-551b、miR-124a表达水平低于H.pylori阴性感染患者,差异有统计学意义(P<0.05);中低分化、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ、浸润深度为T3-T4、有淋巴结转移的GC患者胃黏膜组织中miR-551b、miR-124a表达量低于高分化、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ、浸润深度为T1-T2、无淋巴结转移的GC患者(P<0.05)。miR-551b、miR-124a表达与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)。结论 miR-551b、miR-124a在GC患者胃黏膜组织中低表达,且在H.pylori阳性感染患者中低表达,检测miR-551b、miR-124a表达水平可能在H.pylori感染所致胃黏膜组织癌变过程中具有一定预测作用。     

番茄DEAD-box RNA解旋酶基因SlDEAH1的克隆及表达分析

DEAD-box RNA解旋酶是一种特殊的RNA分子伴侣,参与了RNA代谢,包括前体RNA剪接、核糖体合成、RNA降解以及基因表达,并对植物的发育和抗性等也具有重要作用。根据已报道的拟南芥DEAD-box蛋白,通过同源比对,在NCBI据库中筛选得到一个DEAD-box RNA解旋酶同源蛋白,命名为SlDEAH1,并根据其基因序列设计特异引物,应用RT-PCR方法从野生型番茄(Solanum lycopersicum)AC++中克隆得到了该基因的全长编码区序列。利用生物学网站、软件及实时荧光定量PCR方法,对其进行生物信息学、表达模式、胁迫及激素处理分析。结果表明:SlDEAH1包括2 073 bp的开放阅读框,编码690个氨基酸残基,其编码蛋白有9个保守结构基序,其所涉及到的ATP结合、ATP水解及RNA结合等功能对于解旋酶活性是至关重要的;表达模式分析表明SlDEAH1基因可能在野生型番茄萼片、叶片发育及果实成熟方面起到重要作用;高温、低温、脱水、伤害、盐胁迫不同程度的诱导了SlDEAH1的表达,但在根中该基因的表达受盐胁迫抑制;ABA、ACC、IAA、GA3、MeJA和ZT均不同程度诱导了SlDEAH1的表达,其中ABA诱导效应最为明显。这些结果为进一步研究SlDEAH1在番茄发育和胁迫响应中的功能奠定了基础。     

miR-124与MAPK/ERK通路对调节脑梗死大鼠神经细胞凋亡的影响

摘要 目的：研究miR-124和MAPK/ERK途径对脑梗死大鼠神经细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法：本研究将SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型组（CI组）、miR-124组（miR组）、脑梗死+miR-124组（CI+miR组）和脑梗死+MEK/ERK阻滞剂组（CI+U0126组）,采用mNSS评分法评估大鼠神经功能损伤程度,采用TTC染色检测脑梗死体积,采用尼式染色检查脑组织的病理情况,采用TUNEL染色法检测大鼠脑神经细胞凋亡,TRIzol法提取总RNA,RT-PCR检测miR-124、ERK1和ERK2基因表达,蛋白质免疫印迹法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2、MEK2和ERK1蛋白表达水平。结果：与Sham组和miR组相比,CI组、CI+miR组和CI+U0126组大鼠的脑梗死体积、mNSS评分和脑含水量均显著增加（P<0.01）。Sham组、miR组、CI+miR组和CI+U0126组大鼠的脑组织中尼式体的数量显著高于CI组,模型组大鼠的脑神经元结构被破坏且出现核移位和细胞坏死等病理变化;与Sham组和miR组相比,CI组大鼠中miR-124的表达水平显著降低（P<0.01）,CI+miR组和CI+U0126组大鼠中miR-124的表达水平显著上调（P<0.01）。TUNEL染色结果显示,与模型组相比,CI+miR组和CI+U0126组大鼠中凋亡数量显著减少（P<0.01）,ERK1和ERK2的mRNA相对表达水平均显著下调（P<0.01）。与模型组相比,CI+miR组和CI+U0126组大鼠脑组织中Caspase-3和Bax蛋白表达水平显著下调,Bcl-2蛋白的表达水平显著上调（P<0.01）。与模型组相比,CI+miR组和CI+U0126组大鼠脑组织中磷酸化的p-MEK-2和p-ERK1/2蛋白表达水平均显著下调（P<0.01）。结论：miR-124可能通过抑制MAPK/ERK信号通路的激活,减少脑梗死大鼠的神经细胞的凋亡,最终发挥保护作用。     

急性缺血性脑卒中患者血清miR-124、 miR-134表达与病情严重程度及炎症反应的关系研究

摘要 目的：探讨急性缺血性脑卒中（AIS）患者血清微小RNA-124（miR-124）、微小RNA-134（miR-134）表达与病情严重程度及炎症反应的关系。方法：选择我院2018年10月~2019年10月进行治疗的90例AIS患者作为观察组,另选取同时期来我院进行健康体检的志愿者90例作为对照组。观察组患者根据梗死体积的大小分为大梗死体积组（梗死体积＞3 cm3）和小梗死体积组（梗死体积≤3 cm3）,根据美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS评分）分为中重度卒中组（NIHSS评分＞5分）和轻度卒中组（NIHSS评分≤5分）。比较观察组与对照组血清miR-124、miR-134及膜辅蛋白（MCP）、C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-12（IL-12）、白细胞介素-35（IL-35）水平,比较不同梗死体积和不同NIHSS评分AIS患者血清miR-124、miR-134、MCP、CRP、TNF-α、IL-12、IL-35水平,分析观察组血清miR-124、miR-134与梗死体积、NIHSS评分及上述血清炎症因子的相关性。结果：观察组患者的血清miR-124、miR-134、MCP、CRP、TNF-α、IL-12、IL-35水平均高于对照组（P＜0.05）;大体积梗死组血清miR-124、miR-134水平高于小体积梗死组（P＜0.05）。中重度卒中组患者血清miR-124、miR-134水平高于轻度卒中组（P＜0.05）。经Pearson相关性分析显示,观察组患者血清miR-124、miR-134水平与梗死体积、NIHSS评分及MCP、CRP、TNF-α、IL-12、IL-35均呈正相关（P＜0.05）。结论：AIS患者血清miR-124、miR-134水平异常升高,且与梗死体积、病情严重程度及炎症反应程度呈正相关,检测血清miR-124、 miR-134有助于评估AIS患者病情。     

番茄 DEAD-box RNA 解旋酶基因 SlDEAH1 的克隆及表达分析简

DEAD-box RNA解旋酶是一种特殊的RNA分子伴侣,参与了RNA代谢,包括前体RNA剪接、核糖体合成、RNA降解以及基因表达,并对植物的发育和抗性等也具有重要作用。根据已报道的拟南芥DEAD-box蛋白,通过同源比对,在NCBI据库中筛选得到一个DEAD-box RNA解旋酶同源蛋白,命名为SlDEAH1,并根据其基因序列设计特异引物,应用RT-PCR方法从野生型番茄（Solanum lycopersicum）AC⁺⁺中克隆得到了该基因的全长编码区序列。利用生物学网站、软件及实时荧光定量PCR方法,对其进行生物信息学、表达模式、胁迫及激素处理分析。结果表明：SlDEAH1包括2 073 bp的开放阅读框,编码690个氨基酸残基,其编码蛋白有9个保守结构基序,其所涉及到的ATP结合、ATP水解及RNA结合等功能对于解旋酶活性是至关重要的;表达模式分析表明SlDEAH1基因可能在野生型番茄萼片、叶片发育及果实成熟方面起到重要作用;高温、低温、脱水、伤害、盐胁迫不同程度的诱导了SlDEAH1的表达,但在根中该基因的表达受盐胁迫抑制;ABA、ACC、IAA、GA₃、MeJA和ZT均不同程度诱导了SlDEAH1的表达,其中ABA诱导效应最为明显。这些结果为进一步研究SlDEAH1在番茄发育和胁迫响应中的功能奠定了基础。     

人DC体外分化成熟特性及抗P-选择素功能域单抗对其干预调节

结合树突状细胞(DC)生物学特性, 探讨抗P-选择素lectin-EGF功能域单抗(PsL-EGFmAb)对体外培养人DC成熟和功能干预调节的作用. 通过SCF, GM-CSF, TGF-β₁, Flt-3L及TNF-α体外培养体系, 从脐血CD34⁺造血干细胞中诱导扩增获得DC, 并于细胞成熟过程中用PsL-EGFmAb及辅以IL-10作为对照进行干预. 分别观察和检测DC形态学及细胞活力, 细胞表面分子HLA-DR, CD1a, CD11c, CD54, CD83, CD80, CD86, CD209(DC-SIGN)及CD62P, E, L(P-、E-、L-选择素)表达, 细胞内活性氧(ROS)水平, 及IL-12p35, p40 mRNA与NF-κBP50, P65 mRNA表达, 培养上清液中IL-12p70分泌含量, 以及DC体外对T淋巴细胞刺激能力, 以此分析PsL-EGFmAb 对DC成熟与功能的干预状况. 结果显示, 未成熟DC高表达属模式识别受体的C型凝集素DC-SIGN外, 且胞内蓄积适量ROS, 具备了细胞吞噬能力. 成熟DC除仍高表达DC-SIGN, 伴随细胞内NF-κB基因明显表达, 其表面黏附共刺激分子CD11c, CD83, CD80, CD86表达上调, 且细胞因子IL-12合成分泌增加, 并具明显的体外刺激T淋巴细胞增殖能力, 符合于抗原提呈细胞特征. 此外, 未成熟和成熟DC基本不表达P-, E-选择素, 而分别高表达和低表达L-选择素. 进一步发现, PsL-EGFmAb较对照IL-10对DC表面DC-SIGN表达有抑制作用; 也能抑制细胞内NF-κB基因表达, 并相应抑制或下调DC黏附共刺激分子CD11c, CD83, CD80, CD86及HLA-DR表达, 抑制IL-12基因转录及其合成分泌, 以及抑制DC体外刺激T细胞增殖的能力. 上述结果表明, PsL-EGFmAb对DC分化成熟及功能具有抑制作用, 提示此作用与其抑制作为DC模式识别受体及功能分子DC-SIGN有关, 并可能是通过影响NF-κB信号途径起作用.     

人RNA甲基转移酶BCDIN3D调节小RNA的加工北大核心CSCD

小RNA（miRNAs）在很多关键的生物过程中都起调节作用,它们的异常表达可能导致癌症。经典的小RNA初级转录本依次由RNaseⅢ,Drosha和Dicer剪切,同时让小RNA产生5＇单磷酸末端,这对于随后小RNA的功能是必需的。     

豌豆蚜翅分化相关miRNA及其预测靶基因对蜕皮激素的应答及miR-92a-1-p5靶基因的验证

[目的]蜕皮激素对孤雌蚜翅两型性分化具有重要调控作用.在前期研究中我们发现5个微小RNA(microRNA,miRNA)在豌豆蚜Acyrthosiphon pisum翅两型性分化中也发挥关键作用,但蜕皮激素是否与miRNA互作参与蚜虫翅型分化未知.本研究旨在探索蜕皮激素对5个miRNA及其预测靶基因表达的影响,揭示蜕皮...     

LncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-124-3p/HMGB1轴对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖、凋亡及纤维化的影响

摘要 目的：探讨长链非编码核糖核酸（LncRNA）KCNQ1OT1靶向调控miR-124-3p/高迁移率族蛋白B1（HMGB1）轴对高糖诱导肾小球系膜细胞（HMC）增殖、凋亡及纤维化的影响。方法：将人HMC分为对照组（NC组）、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）、阴性序列（si-NC）组、KCNQ1OT1小干扰核糖核酸（RNA）（si-KCNQ1OT1）组、si-KCNQ1OT1+模拟对照序列（miR-NC）组、si-KCNQ1OT1+miR-124-3p抑制剂（miR-124-3p inhibitor）组,各组在转染后进行高糖处理。实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测LncRNA KCNQ1OT1信使核糖核酸（mRNA）、miR-124-3p mRNA、HMGB1 mRNA表达;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白印迹法（Western blot）检测HMGB1蛋白、增殖相关蛋白[细胞周期蛋白1（CyclinD1）]、细胞凋亡蛋白[半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶蛋白9（caspase-9）]、细胞纤维化蛋白[纤维连接蛋白（FN）、细胞黏附分子-1（ICAM-1）]表达;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA KCNQ1OT1与miR-124-3p与HMGB1之间的靶向关系。结果：与NC组比较,高糖组KCNQ1OT1 mRNA、HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白、CyclinD1蛋白、FN蛋白、ICAM-1蛋白表达、HMC活性（24 h、48 h和72 h）明显上升,miR-124-3p mRNA、caspase-3蛋白及caspase-9蛋白表达、HMC凋亡率明显下降（P<0.05）;与高糖组、si-NC组比较,si-KCNQ1OT1组KCNQ1OT1 mRNA、HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白、CyclinD1蛋白、FN蛋白、ICAM-1蛋白表达、HMC活性（24 h、48 h和72 h）明显下降,miR-124-3p mRNA、caspase-3蛋白及caspase-9蛋白表达、HMC凋亡率明显上升（P<0.05）;与si-KCNQ1OT1组、si-KCNQ1OT1+miR-NC组比较,si-KCNQ1OT1+miR-124-3p inhibitor组HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白、CyclinD1蛋白、FN蛋白、ICAM-1蛋白表达、HMC活性（24 h、48 h和72 h）明显上升,miR-124-3p mRNA、caspase-3蛋白及caspase-9蛋白表达、HMC凋亡率明显下降（P<0.05）。较miR-NC组与KCNQ1OT1-WT共转染组而言,miR-124-3p mimic组与KCNQ1OT1-WT共转染组细胞荧光素酶活性明显降低（P<0.05）;较miR-NC组与HMGB1-WT共转染组而言,miR-124-3p mimic组与HMGB1-WT共转染组细胞荧光素酶活性明显降低（P<0.05）。结论：LncRNA KCNQ1OT1可以靶向下调miR-124-3p mRNA表达,上调HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白表达,促进高糖诱导HMC增殖,抑制凋亡,促进细胞纤维化发展。