用ribozyme抑制增殖细胞核抗原的表达对HaLa细胞增殖的影响

增殖细胞核抗原(PCNA)是DNA聚合酶δ的辅助蛋白,它是细胞染色体DNA复制所必需的。人工设计的ribozyme具有可特异地切割PCNA mRNA的性质,将此ribozyme的自修剪体内表达质粒导入HeLa细胞,从细胞总RNA中分离相应部分能在体外切割靶RNA片段,证明此表达质粒在细胞内能表达出有活性的ribozyme分子。与对照相比,导入ribo-zyme表达质粒的HeLa细胞进入S期的时间从12 h推迟到20 h,而突变ribozyme的对照表明反义抑制对细胞进入S期的影响较小(推迟到15 h)。证明该ribozyme能有效抑制He-La细胞DNA复制,同时亦证明PCNA对于细胞DNA复制及细胞周期进程的重要性。     

核糖体 RNA 的生物功能、自我剪接与自我复制

核糖体RNA在肽链合成的起始、延伸和终止等整个过程中都有重要的功能。RNA N-糖苷酶是一类核糖体失活蛋白;它只水解rRNA特定位置上的一个腺苷酸的糖苷键,释放一个腺嘌呤碱基,使核糖体失活。天花粉蛋白是一种核糖体失活蛋白。目前已知最小的ribozyme是人工合成的13寡聚核糖核苷酸。利用四膜虫ribozyme转磷酸酯的逆反应合成了一个42寡聚核糖核苷酸。这说明RNA可以催化RNA的合成。     

Ribozyme与基因表达

Ribozyme指一类具有生物催化功能的RNA,也称RNA催化剂、在化学本质上,它不同于具有生物催化功能的蛋白质--酶(enzyme),Ribozyme发现于80年代初,近十年来,ribozyme研究进展深化了生物催化理论,提出了生物大分子和生命起源的新概念。     

Prion是病毒吗？——兼谈ribozyme的中文定名

在中文定名中,把prion定为朊病毒或与病毒有关的名称均不恰当,不应在定名上动摇“病毒”的原有定义.同样,也不应把ribozyme定为与酶有关的中文名,以避免冲击酶的传统概念.我们赞同把prion定名为蛋白感染子;把ribozyme定名为RNA催化剂.     

丙型肝炎病毒RNA特异性核酶的切割活性研究

针对丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)的5′非编码区和部分C区的二级结构,设计并合成了四个不同的锤头型核酶(ribozyme A, ribozyme B, ribozyme C₁, ribozyme C₂).首先应用体外切割实验筛选出作用于HCV-RNA起始密码子上游GTA↓位点的核酶RzA有较好的活性.为初步验证核酶RzA在细胞内的切割活性,经脂质体介导,将RzA-RNA与另一携带该核酶靶基因的质粒表达载体pCl-neo-luciferase(载体中荧光素酶基因受核酶靶基因的调控)共转染HepG₂细胞.通过测定荧光素酶基因的表达证实了核酶在细胞内有较好的切割活性.在此实验基础上,把RzA基因克隆至pCl-neo质粒表达载体中,再次经脂质体介导,将重组的表达载体pCl-neo-RzA与携带该核酶靶基因的质粒表达载体pCl-neo-luciferase共转染HepG₂细胞,获得了更好的切割效果.     

Hoechst公司改变兼并计划

西德Hoechst公司上个月撤回收买美国Gene-Tvak Systems公司(马萨诸塞州)的计划.中止收买的理由还不清楚.Gen-Trak公司是开发制造DNA探针诊断药的厂家.1988年销售额为2580万美元,纯利润70万美元.主要开发检查食品中沙门氏菌的DNA探针等.正在研究用Qβ复制酶的RNA扩增反应,目标是开发基因诊断系统.在     

RNA的生物催化功能及其研究进展

长期以来,我们一直认为生命过程中的所有化学反应是在生物催化剂——酶的作用下进行的,而所有的酶都是蛋白质或带有辅基的蛋白质。但近年研究发现,某些RNA分子也具有“酶”的生物催化功能,它们能在一定条件下催化自身或其它RNA分子发生化学反应。Cech(1981,1986)据此提出了RNA生物催化剂的概念,将这些具有酶活性的RNA称之为核酶(ribozyme)。本文简要介绍几种RNA分子的生物催化功能及其研究进展。     

小鼠腺苷脱氨酶mRNA特异Ribozyme计算机设计

小鼠腺苷脱氨酶mRNA经计算机分析,包括:ribozyme切点位置选择,二级结构预测,基因生物学功能和基因同源性分析,筛选出四个锤头结构ribozyme.结果表明上述ribozyme底物切点两翼碱基形成发夹结构,切点位于单链环区,切点所在基因片段位于该基因生物功能区内,并同已知小鼠其它基因不同源.     

首例RNA干扰药物问世及该领域技术演化历程

近期,RNA干扰(RNAi)制药公司Alnylam开发的小干扰RNA (siRNA)药物ONPATTRO?美国食品与药物管理局和欧盟委员会批准上市,用于治疗成人患者的遗传性转甲状腺素蛋白淀粉样变性引起的多发性神经病变.这是全球第一款RNAi药物,该事件标志着人类继小分子化合物、单克隆抗体蛋白类药物后,在前沿生物制药领域实现了新的突破,意味着RNAi疗法从基础研究到临床治疗的开发全过程首次贯通,具有里程碑式的意义.本文概述了该药物及适应症的基本情况,介绍了RNAi发现历史、作用机理与药物特征,RNAi药物的研发历程,以及该领域关键技术的最新研究进展.     

日本销售排卵诊断药

日本一公司开始销售日本基因公司开发的检测排卵的单克隆抗体诊断药(??).用于预测排卵期,治疗不育症.现在能妊娠的女性中约有10%的人不易怀孕.而且有逐年增加的倾向.这种药的潜在市场需要大约是一年有10亿日元.该公司打算第一年销售1亿日元.先销售两公司开发的妊娠诊断药“G-控制25”.将来的目标每年销售额5亿日元.     

“发夹”催化型RNA抑制HIV-1表达

北伊利诺伊斯大学(NIU)和加州大学圣迭戈校区(UCSD)的科学家发现,一种“发夹”状催化型 RNA 在人组织培养实验中能抑制 HIV-I 表达。NIU 的 Arnold Hampel 博士及其同事,以及 UCSD 的Flossie Wong-Staal 博士,发现这种发夹状核酶(ribozyme)能切割 RNA 基因拷贝,从而使 HIV-I     

小分子药靶——RNA药靶研究进展

对RNA药靶的特点、研究策略和针对RNA药靶的小分子药物筛选方法,进行了综述.RNA的三级结构作为分子相互作用的识别位点和结合位点对RNA的生物功能的实现具有重要决定作用,RNA分子同蛋白质一样将成为新型小分子药物的作用靶点.     

转录调节因子的新公司

原在美国Genentech公司的David.V.Goeddel今年一月成立了Tularik公司。该氏开发的产品包括人胰岛素、生长激素、α干扰素(IFNα)、IFNγ、TPA等Genentech公司的制品。最近正在生产肝实质细胞生长因子和分析转录调节因子等。Tularik公司是以转录调节因子为目标,筛选医药品的风险企业。通过阻止和促进转录调节因子,研究针对疾病的基因的开启和关闭。当前的目标是开发抗病毒剂。将来要广泛地开发药品如抗炎剂、抗癌剂等。与具有化学合成化合物和微生物化合物文库的企业合作,打     

基因药物研究现状和对策

生物技术药物以人类体细胞的基因组、转录本组和蛋白质组三个层次生物大分子为目标 ,基因药物的研究主要针对致病基因的DNA和基因转录本mRNA两类生物大分子 .mRNA从结构上考虑是研发核酸药物的最理想靶标和策略之一 .反义寡核苷酸、特异水解基因mRNA的核酸酶(ribozyme和DNAzyme)以及具有干扰作用的双链RNA(siRNA)是药物设计的策略之二 .mRNA结构靶点研究是研发反mRNA基因药物的基础 ,mRNA分子具有高度折叠的二级及三级结构 ,阐明其可及性位点 ,筛选其结构靶位点序列是关键 .近年研究报道的靶点筛选有约 7种mRNA的实测新技术 ,以及计算机辅助软件预测分析 .但发展分子生物学实验新技术以分析、确认靶点是药物研发策略之三 .     

菜豆的性状转化获得成功

据报道,美国Agracetue公司的研究员David Russel使菜豆的性状转化获得成功.现在正进行导入抗病基因的实验. Russel使用基因枪导入了有关基因.该公司研究开发副经理Kenneth Barton指出这项成功表明,在抗病毒菜豆品种的开发上可以应用基因重组技术. 据Barton说该公司正在着手导入菜豆的重要病害——烟草花叶病毒的外壳蛋白基因,研究培育抗病菜豆. Agracetus公司是美国Cetus公司和化学公司的W.R.Grace公司合并而成的风险企业.之后,W.R.Grace公司收买了Cetus公司的股份,使其成为W.R.Grace公司的独家子公司.以新品种的开发为中心,继续农业领域的研究开发.该公司以1986年在美国首先获准进行基因重组植物的野外试验而闻名.     

RNAi在药物研究中的应用

RNA干扰是双链RNA分子在mRNA水平上诱发的序列特异性的转录后基因表达沉默。在哺乳动物细胞里,RNAi可以由21-25个核苷酸长度的小干扰RNA（siRNA）触发,在后基因组时代的基因功能研究和药物开发中具有广阔的应用前景。现针对近年RNAi在药物研究中的应用包括应用RNAi发现新药靶、辅助确认药靶、RNAi药物、RNAi与耐药性等方面作一综述。     

迎来转机的兽药市场

2010年7月1日,大日本住友制药公司的兽药部门动物科学部升格为分公司,于是DS pharmaanimal health公司诞生了.此前该公司的兽药业务是从属于人用医药品开发的,主要开发动物的抗菌药和循环器官药等.     

RNAi-分子免疫系统

RNA干扰(RNA interference,RNAi)或RNA沉默是广泛存在于从植物到哺乳动物的真核生物体中小RNA诱导的基因沉默机制.该领域新的研究进展清楚表明在植物和动物中KNAi起着天然抗病毒作用.因此,KNAi常被视为有效的分子免疫系统.深入理解该分子免疫系统非常有助于揭示一些病毒病的致病机制和开发有效的抗病毒疗法.因此,就该分子免疫系统的研究进展作以综述.     

植物遗传工程

920268抗病毒植物的遗传工程〔英〕/Godoni,F一ZAreh.Virol一2990,115(i一2)一i~22〔译 自DBA,1991,10(9),91一05050] 讨论的主要内容包括:用于交叉保护的外壳蛋 白序列对植物的转化,表达病毒外壳蛋白的转基因植物的田间试验,抗病毒侵染的反义RNA技术,病毒卫星RNA在植物中的表达,ribozyme和锤头RNA机制,作为受体专性抗病毒荆的抗个体基因型的抗体;人干扰素基因在转基因植物中的克隆和表达。构建了抗下列病毒的转基因植物,烟草花叶病毒、首藉花叶病毒、烟草线条病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒等。外壳蛋白介导的保护是最广泛采用的…     

肝癌预后miRNA风险评分模型的鉴定和分析

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上高发病率和高死亡率的恶性肿瘤之一.研究目的是寻找HCC相关的mi RNA预后生物学标志物,预测HCC患者的风险程度和生存时间,为他们提供有效的预后信息.使用4种方法从TCGA中识别差异表达的mi RNAs(DEMs).并用Kaplan-Meier生存曲线、单因素和多因素Cox回归分析从DEMs中筛选肝癌预后相关的mi RNA.最终4个HCC的预后mi RNA生物学标志物(hsa-mi R-132-3p、hsa-mi R-139-5p、hsa-mi R-3677-3p、hsa-mi R-500a-3p)被筛选出来组合成一个风险评分模型.目前还没有实验证据表明组合中的hsa-mir-3677-3p与HCC相关,是本研究新发现的mi RNA.生存曲线、ROC曲线、卡方检验等多种生物信息学方法的评价结果均表明,该模型计算出的风险分值能有效预测患者的风险程度(P<0.000,风险比=2.551,95%置信区间=1.751-3.717).低风险组HCC患者1-5年生存率比高风险组高20%-30%.通过与临床数据分析发现,组合的生物学标志物较其他临床指标相比具有更好的预后效果,也可以作为独立的预后因子.最后,预测了4种mi RNA的靶基因,包括AGO2、FOXO1、ROCK2、RAP1B、CYLD等,并在细胞增殖、迁移、凋亡、免疫应答等生物学过程中富集.