长链二羧酸发酵的研究

经过筛选诱变,从热带假丝酵母(Candida tropicalis)1230得到一株能利用正烷烃产生较多长链二羧酸的突变株U3-21,该菌株能利用一系列单一正烷烃C10-C18 1产生与基质链长相应的二羧酸。摇瓶条件试验表明,静止细胞单一二羧酸的产量,除DC…及DC…”以外,为4.02—6.48％。用气液色谱鉴定,粗品二羧酸的纯度为92—98％。因而U3-21 是一株很有前途的优良生产菌株。     

西藏海相下第三系及其双壳类动物群

本文介绍下辽河西部坳陷下第三系锦128井5块样品生物标志物(主要是正烷烃及δ~(13)C值)的研究。其正烷烃碳数分布范围为C_(15)—C_(25),主峰碳为C_(15)、C_(16)或C_(17)。C_(21)+C_(22)/C_(28)+C_(29)比值很大,表明这些岩样有机质来源可能和海产藻类群落有关。5块样品OEP值依次分别为1.2487,0.9569,0.9394,0.9905和0.9889非常符合生油岩0.9—1.2的标准数值。正烷烃碳数范围主要在C_(10)—C_(25),苯馏分表现出低碳和中碳芳香烃优势,说明锦128井①—⑤样品属于高成熟度的油层,特别是J128-1,2,5的层位。以上这些数值正和沟鞭藻化石反映的油源丰度和成熟度相一致。本文结果证明用生物标志物判别石油母质来源、油层对比、油气丰度和成熟度乃是很有效的方法。     

利用正癸烷发酵产生癸二酸的酵母19—2菌株的鉴定

对分离筛选所得的产酸较高,酸质较纯的酵母19—2菌株进行了鉴定,根据其具有较发达的假菌丝,不产生子囊孢子,利用葡萄糖,赤藓醇,不同化硝酸盐;冻化牛奶等主要特征,定为解脂假丝酵母(Candidalipolytica)。该菌对直链烷烃能很好利用,具有较强的趋化性。酵母19—2菌株是一株利用石油正癸烷产生癸二酸的优良菌株。本文报道了对酵母19—2菌株的鉴定     

液体石蜡发酵生产反丁烯二酸I．菌种的筛选和鉴定

经过筛选,从3,149株菌株中得到8株能利用液体石蜡产生反丁烯二酸的菌株,其中产酸最高的菌株是C90,经鉴定是皱褶假丝酵母(Candida rugosa)。其发酵产物经分离提纯,得到白色结晶;经纸上层析、元素分析、红外光谱分析和熔点测定,证明是反丁烯二酸。C90能利用C8-C20。的直链烷烃,利用长链烃比短链烃为好,尤其对C16和C17,的烷烃利用最好,产酸最高。用C13—C18的混合正烷烃做碳潦能得到较好的结果,菌体生 长较快,产酸量较高;C90能利用葡萄糖,菌体生长旺盛,但不产酸;能利用三羧酸循环中的琥珀酸、反丁烯二酸和苹果酸,并使部分反丁烯二酸转变成苹果酸和琥珀酸,也能把部分苹果酸转变成反丁烯二酸。     

石油发酵长链二元酸的研究——(Ⅰ)二元酸产生菌的筛选方法、菌种鉴定及产物分析

微生物能将正烷烃分子两末端氧化成二元脂肪酸。我们设计了应用指示菌筛选产二元酸菌株的方法,并对产短链二元酸之解脂假丝酵母192(Candida lipolytica 192),和热带假丝酵母79(Candida tropicalis 79),用MNNG诱变育种,挑选在十五烷及十三烷 1:13二羧酸培养基上不生长或生长极差,可能是因β氧化受阻而积聚长链二元酸的突变种进行发酵。发酵产物经熔点测定、质谱分析、元素分析、气相色谱和红外光谱分析,证明为α,ω-十三烷1:13二羧酸。发酵产量解脂假丝酵母94为8.1克/升,热带假丝酵母N-15和N-26分别为14克/升和10克/升。 三株指示菌、不动杆菌(Acinetobacter sp)I_7、C_5和C_(11),对一元酸及二元酸的利用有差异,I_7能利用六碳以上二元酸及一元酸,C_5能利用八碳以上二元酸及一元酸,而C_(11)则只能利用一元酸生长。因此可以根据发酵液在这一组指示菌上的反应,筛选短链二元酸的产生菌。对应用指示菌作二元酸定量测定的方法也进行了讨论。     

一株油藏耐热原油降解菌的分离鉴定与特性分析

从中原油田高温采出液中分离到一株能在55℃高温条件下利用石油烃类生长的耐高温菌株P98-18A1.基于表型、生理生化特性和16S rDNA序列分析,初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属(Bacillus sp.).通过菌株对原油及部分烷烃降解试验得出,该菌株在适宜条件下,能有效地利用C6-C16的正构烷烃生长,对链长大于C16的烷烃在某种程度上具有一定的选择性利用能力.     

烷烃发酵产生1，13-十三碳二元酸及其诱导作用的研究

从能利用正十二烷产生1,12-十二碳二元酸的热带假丝酵母突变株D28出发,经两次紫外线照射诱变,选育到一株从正十三烷产生1,13-十三碳二元酸较高的突变株2—23号菌。该突变株较出发菌株提高产酸率20％,达40．4g／L。突变株2—23也能将一定链长的长链烷烃以较高的产率转变成相应的单一二元酸。此外,在产酸摇瓶条件试验中观察到烷烃的诱导作用,使突变株产酸能力得以提高。用烷烃预培养的种子发酵正十三烷,其产生1,13一十三碳二元酸的量较糖质碳源培养的种子发酵时要提高30％。     

烷烃发酵产生1，13-十三碳二元酸及其诱导作用的研究

从能利用正十二烷产生1,12-十二碳二元酸的热带假丝酵母突变株D28出发,经两次紫外线照射诱变,选育到一株从正十三烷产生1,13-十三碳二元酸较高的突变株2—23号菌。该突变株较出发菌株提高产酸率20％,达40．4g／L。突变株2—23也能将一定链长的长链烷烃以较高的产率转变成相应的单一二元酸。此外,在产酸摇瓶条件试验中观察到烷烃的诱导作用,使突变株产酸能力得以提高。用烷烃预培养的种子发酵正十三烷,其产生1,13一十三碳二元酸的量较糖质碳源培养的种子发酵时要提高30％。     

烃类的微生物氧化 I.土壤细菌A-3的某些生化特征

我们从土壤中分离得到一株烃类氧化菌,在石蜡油培养液中振荡培养,繁殖迅速,菌体呈亲油性。该菌能够氧化C_(12)、C_(14)、C_(16)、C_(18)等正烷和石蜡(熔点58—60℃)。正辛烷和正癸烷的氧耗率低于或等于内源。异烷似较难氧化。对正十六烷和正十八烷的呼吸商依次为0.44 和0.47。该菌对脂肪醇的氧化性能与烷类相似。C_(12)—C_(18)脂肪醇氧耗率相当高,低于正癸醇的醇类的氧化则不明显。C_8—C(18)脂肪酸钠盐(10~(-3)M)的氧耗率大抵相等。苯、甲苯(以上为饱和水溶液)、萘、蒽、菲、四氢萘、十氢萘、胆甾醇、胆酸钠(10~(-3)M)和高级脂肪醇硫酸酯的氧化都不明显或有抑制作用。各种浓度的迭氮化钠、氰化钠、碘醋酸、Hg~(++)、Cu~(++)、Co~(++)、a,a′-二联吡啶对菌氧化正十六烷和正十六醇有不同程度的抑制作用。根据以上结果,对菌体内烷烃的氧化途径及酶的性质作了某些推测和讨论。     

铜绿假单胞菌SJTD-2降解长链烷烃与原油的特性

摘要:【目的】石油污染严重威胁生态系统和生物圈,微生物修复被认为是一种安全有效可代替物化方法来治理石油污染的办法。本文对我们从石油污染土壤中分离获得的一株可分解正烷烃和原油的革兰氏阴性菌SJTD-2的理化性质和降解效能进行了研究。【方法】利用菌株表型和生理性质、16S rRNA序列比较分析与进化树绘制,确定新分离菌株SJTD-2的种属;测定菌株SJTD-2的生长曲线,确定其利用不同长度烷烃和原油为单一碳源的效能;利用GC-MS检测烷烃类物质的残留量,确定菌株SJTD-2降解烷烃和原油SJTD-2的降解效率和降解周期。【结果】菌株表型与16S rRNA序列比较及进化树比对分析结果显示,菌株SJTD-2与假单胞菌属的亲缘关系十分接近,为铜绿假单胞菌。菌株SJTD-2 可有效分解C10到C26的中链和长链烷烃及原油,利用它们作为其单一碳源生长;该菌株对长链烷烃(C18－C22)的利用效果较中链烷烃好,其中正二十二烷被认为是其最佳碳源。48 h内,该菌株可完全降解500 mg/L正二十二烷;72h 后,2 g/L的正二十二烷可几乎被菌株全部分解利用。此外,菌株SJTD-2在7 d内可将2 g/L的原油分解88%以上。【结论】与现有其它烷烃降解菌相比,铜绿假单胞菌SJTD-2具有突出的长链烷烃与原油降解效能及耐受能力,该菌株的发现与研究将有助于烷烃降解机制的研究和环境修复的进程。     

酵母细胞转运正烷烃的研究——1.热带假丝酵母U_(3-21)产乳化剂的条件

微生物利用液态正烷烃发酵的第一步是将烷烃和水乳化,烃水乳化之后,正烷烃就易于被转运到细胞中。利用正烷烃发酵的酵母菌产生的乳化剂进入到发酵液中。本文报道用分光光度计测定发酵液中乳化剂含量和热带假丝酵母U_(3-21)产生乳化剂的最     

酵母细胞转运正烷烃的研究——Ⅱ.糖类对突变菌株U_(3-21)的生长、乳化剂和二羧酸产生的影响

以不同碳链的正烷烃作为唯一生长碳源时,U_(3-21)菌株产生乳化剂的量不同,因而菌体生长也不同,产生乳化剂多的,菌体生长也好。本文主要报道在烷烃发酵中,糖类对菌株产生乳化剂的促进与抑制怍用,0.15%的蔗糖,大大促进了乳化剂的产生,加速菌体生长,提高二羧酸的产量。发酵培养基初始pH不同,也影响菌体生长和二羧酸产量。     

弱细颤藻脂溶性化合物分析

对人工培养的弱细颤藻 Oscillatoria tenuis 中有机化合物的初步分析结果表明,脂溶性有机化合物占藻细胞干重5.8%,其中色素化合物含量较高,烃类化合物含量较低。烷烃化合物碳原子数分布范围为 C_(14)—C_(19),以正十七烷含量最高。色素化合物主要为脱镁叶绿素α,β-胡萝卜素和橙红色的未知色素化合物等。     

1株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)1217石油降解特性及相关基因分析（英文）

从石油污染土壤中分离得到1株石油降解菌1217,经细菌形态学、生理生化及16S rD NA序列分析初步鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。在温度5~65℃,pH 2~10,盐度0~9%的条件下菌株能很好生长,在以正十二烷、正十八烷、苯、甲苯、二甲苯和萘为唯一碳源的培养基中生长良好。在10℃和30℃条件下培养7 d,对原油的降解率分别为21.57%和15.15%。菌株产生的生物表面活性剂可以将表面张力从72.20 mN/m降至35.14 mN/m。利用特异性PCR扩增,在菌株中检测到烷烃单加氧酶、甲苯双加氧酶、联苯双加氧酶、芳香烃双加氧酶和氧化还原酶基因,并成功克隆出烷烃单加氧酶和芳烃双加氧酶基因,同相关基因比对分析,与铜绿假单胞菌PAO1的相应基因相似度分别为99.91%和99.22%。研究表明,菌株在生物修复和石油烃污染环境中具有潜在的应用价值。     

石油降解菌株的分离鉴定及降油特性

从甘肃华庆油田污染严重的土壤中采样,通过富集培养、多次筛选分离得到1株优势菌F1。依据生理生化特征和16S rDNA序列将菌株F1鉴定为白色类诺卡氏菌(Nocardioides albus)。GS-MC结果表明,等量原油经F1菌株降解前、后,表现出先降解高碳数正构烷烃为低碳数正构烷烃;高碳数正构烷烃中奇数碳向偶数碳正构烷烃演化规律;平均降油率为64%,F1菌株能较好地促使五环三萜类化合物立体构型中不稳定构型向稳定性构型转化。F1菌株在含油浓度0.3%、0.5%、1.0%土样中降解石油烃的半衰期分别为17.2、18.2、23.7 d,42 d后均达到78%以上。     

利用双报道基因筛选系统改造产烃基因工程细菌(英文)

自然界中所有的蓝藻都能产生烷烃,但这些烷烃都比汽油(C5~C12)的链长更长。两个源于蓝藻的产烃基因已经在大肠杆菌细胞中成功表达。迄今为止,从头合成的最短烷烃为C9。本研究在大肠杆菌细胞中设计了一个人工进化系统,该系统能生产短链烷烃,并可以提高烷烃的产量。该进化系统由两大部分元件组成:产烃基因和胞内烷烃响应系统。烷烃是报道基因氯霉素抗性基因(Cm R)和16S r DNA的一种主要诱导物。携带有Cm R的细胞能在含有氯霉素(Cm)的培养基中存活下来,而烷烃诱导产生更多的16S RNA,能加快细胞的生长和繁殖。将这些基因组装在一种易突变的大肠杆菌菌株中,并成功地筛选出了具有生长优势和高产烷烃能力的细菌。最后,用这些细菌实现了辛烷(C8)的生产——在不加入产烃底物的情况下,创造了在人工生物系统中产生最短链长烷烃的记录。以上结果说明,在大肠杆菌中生产比C9更短的烷烃不存在机理方面的限制。     

化工上的应用

当Pseudomonas sp.生长在植物油或正烷烃中时能产生大量的聚羚基丁醋(简称PHB)。其合适的培养基为2%正烷烃,0.05%尿素和     

生物乳化剂产生菌及其产乳化剂条件初步研究*

从胜利油田原油污染土壤边分离得到一株能降解多种石油芳烃和烷烃且能产生物乳化剂的细菌Eml,经生理生化及16S rRNA基因序列分析鉴定为赤红球菌(Rhodococcus ruber)。对菌株Eml产生乳化剂的条件进行了研究,结果表明,该菌株在以正十六烷为碳源时能较快速产乳化剂,其最佳条件为：正十六烷10g/L,酵母抽提物1g/L,初始pH值为7,30℃下200r/min摇床培养。在此条件下,发酵ld后,培养液的表面张力即降到最低值,约30mN／m,而乳化能力达100％;乳化剂浓度则在第5d达到最大,为68倍的CMC;经初步研究该乳化剂为脂类物质。     

地衣芽胞杆菌FJAT-4脂肽结构鉴定及其对尖孢镰刀菌的抑制作用

【目的】地衣芽胞杆菌FJAT-4产生的脂肽能够有效抑制尖孢镰刀菌的生长,本研究的目的在于探究地衣芽胞杆菌FJAT-4脂肽结构,分析培养基组分和培养温度对FJAT-4产抑菌脂肽的影响,阐述脂肽对尖孢镰刀菌的抑制作用,为菌株抑菌机理的阐释及其在枯萎病防治中的推广应用奠定基础。【方法】通过酸沉醇提法提取地衣芽胞杆菌FJAT-4产生的脂肽;利用液相色谱串联四极杆飞行时间质谱进行地衣芽胞杆菌FJAT-4脂肽组成分析及结构鉴定;以抑菌圈大小为指标评估地衣芽胞杆菌FJAT-4脂肽对尖孢镰刀菌的抑制效果;通过扫描电镜观察地衣芽胞杆菌FJAT-4粗脂肽对尖孢镰刀菌的抑制作用。【结果】地衣芽胞杆菌FJAT-4产生的抑菌脂肽由C_(17)fengycin A、C_(17)fengycin B、C_(17)fengycin B_2、C_(16)fengycin A衍生物、C_(16)fengycin B衍生物、C_(13)–C_(15)surfactin及C_(13)–C_(15)surfactin衍生物组成,其中C_(13)–C_(15) surfactin衍生物(m/z[M+Na]~+=1048.6/1062.6/1076.6)为新化合物。培养基成分不同对菌株FJAT-4脂肽组成影响较小,但温度对菌株FJAT-4产生抑菌脂肽的影响很大,该菌株在较低温度(20–25°C)下培养不产生脂肽,30–40°C下培养能产生抑菌脂肽,且高温有利于提高脂肽中surfactin的比例。该脂肽类物质对辣椒、番茄、香蕉和甜瓜尖孢镰刀菌等多种植物病原真菌均具有很好的抑制效果,且呈剂量依赖性。扫描电镜结果表明地衣芽胞杆菌FJAT-4所产的脂肽会严重影响辣椒、番茄、香蕉和甜瓜尖孢镰刀菌菌丝的正常生长,导致菌丝断裂变形、孢子变形或显著抑制了孢子的生长。【结论】地衣芽胞杆菌FJAT-4产生的抑菌脂肽为fengycin和surfactin类物质,该抑菌脂肽会致使尖孢镰刀菌菌丝体发育畸形,影响尖孢镰刀菌的正常生长。     

Gordonia sp. LAM0048的分离鉴定及其降解正十六烷的研究

以正十六烷为唯一碳源,从长期受石油污染的土壤中筛选到一株高效降解正十六烷的菌株LAM0048。通过形态学观察、生理生化试验、细胞化学组分分析、16S rRNA基因序列分析、细胞脂肪酸和极性脂试验,确定其属于棒杆菌亚目(Corynebacterineae)、诺卡菌科(Nocardiaceae)、戈登氏属(Gordonia),且可能为戈登氏属的一株新种。采用单因素实验对菌株LAM0048在无机盐培养基中降解正十六烷的降解率进行初步探讨,发现该菌株能在以正十六烷为唯一碳源的培养基中生长,菌株LAM0048能够在36 h内完全降解0.05%(V/V)的正十六烷,当烷烃浓度达到1.0%(V/V)时,降解率达46.4%。结果表明LAM0048是一株具有耐受高浓度烷烃的石油降解菌,在石油污染环境的微生物修复中具有一定的应用潜力。