抗草甘膦EPSPS基因的专利保护分析

抗草甘膦转基因作物是目前全球播种面积最大的转基因作物,抗草甘膦基因（EPSPS）的克隆、表达及其功能验证等也因此成为现代分子生物育种研究的重点,利用专利等知识产权保护措施将这些功能基因和转化技术转变成自己的独占产权是发达国家和生物技术公司普遍采取的发展策略。通过检索搜集全球范围内EPSPS基因的专利和转化品系信息,分析研究了EPSPS基因在全球的专利保护、核心技术专利分布与产业化运用状况。结果表明,近几年对EPSPS的专利申请量迅速增加,专利申请人主要集中在美国、法国、中国等国家,但是核心技术和产业化应用的绝大部分专利由孟山都、拜耳、先锋、先正达等跨国公司拥有,相关产业的发展主动权也由此被其掌控。     

葡萄糖淀粉酶色氨酸残基及底物结合位点的研究

 本文用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)对葡萄糖淀粉酶进行特异性修饰,当酶分子表面有3个色氨酸残基被修饰后,酶活力完全丧失。用邹氏图解法测得酶活性中心有一个色氨酸残基是必需的。如果在酶液中加入不同的底物再用NBS氧化,用荧光发射和荧光猝灭光谱检测表明,底物对酶分子有不同程度的保护作用。在被测试的三种底物中,这种保护能力依为糊精>淀粉>麦芽糖。     

用日立835-50型氨基酸分析仪测定色氨酸方法的试验报告

<正> 色氨酸是蛋白质的重要成分,是人和各种动物生长发育不可缺少的必需氨基酸之一,在营养代谢中起着重要作用。因此,准确测定食品及饲料中的色氨酸含量有着重要意义。由于色氨酸在酸水解中破坏较大,所以酸水解法不适于色氨酸测定,须用碱水解法单独测定,因色氨酸在碱水解中比较稳定。但以往所采用的碱水解法是以淀粉作保护     

色氨酸2,3-双加氧酶调控炎症免疫反应在疾病中的作用

犬尿氨酸代谢通路(kynurenine pathway,KP)是色氨酸代谢的主要途径,参与机体多个病理生理过程.色氨酸2,3-双加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase,TDO2)是KP的初始限速酶之一,能够催化色氨酸(tryptophan,Trp)使其转化为犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)...     

DL-5-甲基色氨酸的化学合成

<正> DL-5-甲基色氨酸是色氨酸的一种衍生物,它和其它衍生物一起(如DL-5-氟-色氨酸)主要用于处理色氨酸发酵产生菌,从而获得抗类似物高产菌株,在此基础上,利用重组DNA技术,进一步获得“工程菌株”,因此,它是色氨酸发酵科研中的一     

响应面分析优化L-色氨酸清液发酵培养基

L-色氨酸是八种必需氨基酸之一,随着L-色氨酸应用市场的不断扩大,进行发酵法生产L-色氨酸的研究具有重要的现实意义。为了提高L-色氨酸产量,本文利用响应面分析法对L-色氨酸清液发酵培养基进行优化。利用优化培养基进行发酵,考察清液发酵对L-色氨酸发酵过程中生物量、L-色氨酸产量、副产物生成量的影响。结果表明:在优化条件下利用清液发酵培养基发酵,乙酸含量与原工艺相比降低了(6.75±1.26)%,L-色氨酸产量提高了(16.54±1.15)%,实验值与响应面分析预测值基本相符。     

杂种细菌在植物中的固氮作用

在关于固氮基因直接转移到作物中的最新实验表明,感染了杂种细菌的玉米和糖用甜菜能够固氮,其产量比实验室对照高10％～180％。作物遗传国际有限公司在最近的一份欧洲专利申请里申报了这些成果(EPO125 468,Newswatch,2月18日,第4页)。在这份申请里,还对抗菌素的合成细菌杂种和生长调节剂进行了讨论。Peter S.Carlson(该公司的一位科学家和创始人)说,在对固氮感兴趣的     

一种简单而方便的色氨酸和其它氨基酸的酯化方法

<正> 氨基酸的酯化在肽合成上是非常重要的。在大多数情况下,酯能由酸催化而制备,但是,氨基酸,如色氨酸对酸的敏感性是难以在强酸介质中和高温下进行酯化。 1963年Wilchek等人将色氨酸和光气作用经由N-羧基酸酐中间物再和苄醇作用而合成了色氨酸苄基酯。近来,Williams等人报道,由N-保护的色氨酸苄基二甲基苯胺盐的热分解制备色氨酸苄基酯。但是这种方法直接用于氨基酸是不成功的。况     

靶向色氨酸降解酶在肿瘤免疫治疗中的研究进展

免疫疗法为肿瘤患者带来了巨大希望。色氨酸作为人体必需氨基酸,在肿瘤免疫中具有重要意义。吲哚胺-2,3-双加氧酶1和2 (indoleamine-2,3-dioxygenase 1/2, IDO1/2)、色氨酸-2,3-双加氧酶2 (tryptophan-2,3-dioxygenase 2, TDO2)和白介素4诱导蛋白1 (interleukin-4-induced-1, IL4I1)是催化色氨酸降解的关键酶。研究表明靶向色氨酸降解酶能够恢复抗肿瘤免疫反应,并与其他免疫疗法(如免疫检查点抑制剂)具有协同作用,这给免疫肿瘤学领域带来了希望。然而,IDO1抑制剂的临床试验却带来了令人失望的结果。本综述将讨论色氨酸降解酶及其抑制剂在肿瘤免疫治疗中的潜在效果和问题,并提出了可选的规避方法。     

发展中的氨基酸工业(二)[各论]

<正> 5.L-色氨酸(L TryPtophen) 分子量:204.23 融点:290℃(分解) 本品为白～带黄白色结晶或结晶性粉末,无味或稍有一点苦味。在冷水、乙醇、氯仿中难溶。热水中易溶。在100克水中的溶解度如下: 构成蛋白质的色氨酸广泛分布在自然界中,但含量较低。天然蛋白质中含有的色氨酸都是L型。人类色氨酸的需要量比其它必需的氨基酸低,但色氨酸的生理作用极其重要,是必需氨基酸,并被指定为食品添加剂。     

大肠杆菌trpBA和serA基因的串联表达

大肠杆菌trpBA基因编码的色氨酸合成酶(tryptophan synthetase, TSase)是色氨酸合成的关键酶; serA基因编码的磷酸甘油酸脱氢酶(D-3-phosphoglycerate-dehydrogenase, PGDH)为L-丝氨酸合成(色氨酸合成的底物)的关键酶。为了通过基因工程手段来增加色氨酸的产量, 在利用高效的原核表达载体pET22b(+)分别对trpBA和serA基因克隆表达的基础上, 采用PCR方法扩增了抗反馈抑制的serA和trpBA基因, 将两基因串联于pET22b(+)载体上, 共构建了4种方式的串联质粒, 实现了2种蛋白酶在大肠杆菌中的共表达。聚丙烯酰胺电泳分析显示, ABA-Ⅰ重组菌株在37 kD (PGDH)、29 kD(色氨酸合成酶的α亚基)、44 kD(β亚基)处均有明显的蛋白表达带。4种串联表达质粒重组菌的TSase酶活性, 分别比含空载体菌相应酶的活性提高2~4倍, PGDH酶活性分别提高约2.1~3.6倍。经摇瓶发酵实验表明酶活性较高的ABA-I菌株色氨酸合成量亦最高, 约为对照菌株的20.2倍。     

木瓜蛋白酶的研究——Ⅲ.组氨酸及色氨酸残基为木瓜蛋白酶表现催化活性的必需基团

(一)木瓜蛋白酶在甲烯蓝存在时照光数分钟活力即显著下降,光氧化过程中組氨酸及色氨酸的破坏和活力的下降均按一級反应进行。組氨酸和色氨酸破坏的一級反应常数之和恰等于活力下降的一級反应常数。过程中酪氨酸及二硫鍵含量无显著变化。(二)NBS作用于木瓜蛋白酶引起的色氨酸殘基的破坏与活力的下降完全一致。(三)根据光氧化及NBS的作用过程中木瓜蛋白酶活力下降与組氨酸及色氨酸破坏的定量关系,可以认为木瓜蛋白酶的必需基团中包含一个組氨酸及一个色氨酸殘基。     

改造后的大肠杆菌氨基酸产量可望成倍增长

应用遗传工程学技术又获可喜成果。主要研究氨基酸、色氨酸生产方法的大阪大学工程学部的发酵工程数研室(合叶修一教授)研究小组,用大肠杆菌产生色氨酸研究成功。产生色氨酸的量是当代所采用的发酵法的两倍。 大肠杆菌以葡萄糖为原料,经过五种酶的复杂的连续地反应可以合成色氨酸。在一     

改造后的大肠杆菌氨基酸产量可望成倍增长

应用遗传工程学技术又获可喜成果。主要研究氨基酸、色氨酸生产方法的大阪大学工程学部的发酵工程数研室(合叶修一教授)研究小组,用大肠杆菌产生色氨酸研究成功。产生色氨酸的量是当代所采用的发酵法的两倍。 大肠杆菌以葡萄糖为原料,经过五种酶的复杂的连续地反应可以合成色氨酸。在一     

作物野生近缘种的原生境保护

作物野生近缘种是作物种质创新和品种改良的天然基因库,全球30%的作物增产得益于野生近缘种在作物育种中的利用。然而,由于生境破坏和污染、资源过度利用、盲目引种和气候变化等导致大量自然群体消失和群体遗传多样性丧失,对作物野生近缘种的繁衍和进化形成了严重威胁。原生境保护是在自然条件下对作物野生近缘种及其生态环境进行保护,维持其进化潜力,保护物种与环境互作的进化过程,是保护作物野生近缘种的重要途径之一。本文在分析国内外原生境保护政策和技术手段的基础上总结了作物野生近缘种原生境保护技术路线,综述了国内外对作物野生近缘种的原生境保护进展,并基于中国国情提出了作物野生近缘种存在的问题,探讨了未来作物野生近缘种原生境保护和野生近缘种可持续利用的发展方向和工作重点,强调把基因组、表型组和环境因子相关大数据与作物野生近缘种保护、研究和利用紧密结合,为作物野生近缘种的有效保护和高效利用提供强有力的理论和信息支撑。     

粗山羊草(Aegilops tauschii)中Pinb基因的克隆和表达分析

puroindoline a(Pina)和puroindoline b(Pinb)是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报道的小麦Pinb基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对粗山羊草Aegilops tauschii(DD)的基因组DNA进行Pinb基因扩增、克隆和序列分析,发现了一个新型Pinb等位基因。该基因长447 bp,编码148个氨基酸残基,具有麦类作物PinB蛋白所特有的WPTKWWK色氨酸结构域和10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构。与软粒小麦cv.Capitole的Pinb-D1a相比较,该基因含有14个氨基酸变异位点,其中包括一个紧邻色氨酸结构域的变异位点(Val66Phe),其核苷酸和氨基酸同源性分别为93.3%和90.5%。RT-PCR和Western Blot证实了Pinb基因在籽粒胚乳中的表达。Southern Blot分析结果表明,粗山羊草中Pinb基因为单拷贝。研究结果表明,粗山羊草中包含着与小麦差异较大的籽粒硬度控制基因,对此基因的进一步研究将加深对小麦籽粒硬度形成分子机制的了解。     

色氨酸对海水处理下长春花生物碱含量的影响

以长春花为(Catharanthus roseus(L.)G.Don)材料进行温室实验,研究了不同浓度色氨酸对20%海水处理下长春花幼苗生物碱含量的影响,发现20%海水中加入色氨酸,长春花中色氨酸脱羧酶(TDC)活性提高,吲哚生物总碱以及长春碱、长春质碱、文多灵、长春新碱含量显著增加.其中加入500 mg/L的色氨酸最有利于生物碱含量的增加.     

芳香族氨基酸生物合成和苯丙氨酸发酵

<正> 苯丙氨酸(Phemylalanine,Phe)、酪氨酸(Tyrosine,Tyr)和色氨酸(Tyrptophan,Trp),即所谓芳香族氨基酸(aromatic amino acid),不仅本身结构较谷氨酸复杂(表1),而且合成机制亦较多采,特别是其用途的日益广泛,也使人们开始注意其生产技术。大家都知道,苯丙氨酸和色氨酸是人体必需氨基酸,酪氨酸可由苯丙氨酸转换、而提供人体。芳香族     

大肠杆菌trpBA基因的克隆表达

目的:提高大肠杆菌中色氨酸合成酶的表达量和表达活性。方法:利用PCR方法从大肠杆菌K-12的基因组中直接克隆出紧密连锁trpB和trpA基因(简称trpBA),并将其连接到原核表达载体pet22b( )中,得到重组质粒pet22b( )-trp-BA,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导重组蛋白表达,表达产物经SDS-PAGE分析并用比色法测定其活性。结果:凝胶电泳可见PCR扩增产物大小约为2kb,SDS-PAGE鉴定目的蛋白的Mr分别约为29000和44000,色氨酸合成酶α、β亚基分别得到了高效表达,色氨酸合成酶活性提高到对照菌的3.7倍。结论:成功构建了重组质粒pet22b( )-trpBA,色氨酸合成酶的表达量和表达活性在大肠杆菌中得到了提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定基础。     

生物技术领域发明专利申请文件撰写中存在的问题

专利申请文件的撰写在一定程度上决定一项专利的命运,针对国内生物技术类专利申请文件撰写中存在的问题,从6个方面提出看法和建议,供国内专利申请人参考,以之保护自己的发明创造成果。