重症监护病房分离菌菌谱及其耐病性分析

目的了解重症监护病房(ICU)院内分离菌菌谱及细菌耐药情况,为临床防治院内感染提供依据。方法对汕头大学第一附属医院ICU 2000年1月～2003年12月所分离的细菌菌株、真菌及细菌耐药性进行回顾性调查。结果4年共分离获得菌株460株,分离菌仍以G^-菌为主．占57．4％．其次G^ 菌占27．2％,真菌占15．4％。G^ 分离率逐年增多,由2000年的20．7％上升到2003年的28．3％。G^-以肠杆菌属为主。G^ 菌以金黄色葡萄球菌(金葡菌)为主,耐甲氧西林葡萄球菌占G^ 的90．9%。真菌以白色念珠菌为主。前6位分别为金葡菌(13．7％)、肺炎克雷伯杆菌(12．6％)、埃希肠杆菌(11．5％)、白色念珠菌(10．4％)、产气肠杆菌(9．3％)和嗜麦芽窄食黄单胞菌(5．4％)。体外药敏试验显示主要分离菌均呈多重耐病特性。只有万古霉素对G^ 具有很强抗菌活性,敏感率达100％。结论该ICU院内分离菌仍以G菌为主．G^ 菌分离率逐年增多,金葡菌已上升到第1位。细菌呈多重耐药特性,耐甲氧西林葡萄球菌在G^ 菌中比例很高,应高度重视。掌握该地区、该科室常见分离菌菌谱及其耐药特性具有重要意义。     

美洲大蠊肠道内生细菌的分离及其初步抑菌活性研究

分离鉴定美洲大蠊肠道内生细菌,并初步研究了其抑菌活性。采用平板稀释法对美洲大蠊肠道内生细菌进行分离纯化,分离菌株通过形态学观察和16S rDNA基因序列BLAST比对进行种属鉴定。以金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌4株细菌为对象,采用牛津杯法初步鉴定各分离菌株的抑菌活性。BLAST比对分析结果表明:从15只美洲大蠊肠道内分离鉴定出125株内生细菌,分属12科20属。初步抑菌活性显示:部分菌株对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌有明显抑菌活性。美洲大蠊肠道内生菌种类繁多,而且较多菌株具有抑菌活性。     

血培养中病原菌分布及药敏调查分析

目的了解血培养中病原菌的分布及药敏情况,供临床借鉴。方法对中山大学附属第三医院血培养标本中所分离到的细菌及药敏结果进行统计分析。结果从血培养标本中分离到细菌239株,其中其中革兰阴性杆菌(G-b)131株,占52.6%,革兰阳性球菌(G+c)99株,占39.8%(99/236),真菌占6.8%,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌检出率分别是54.2%和48.6%,只对亚胺培南、特治星和阿米卡星敏感,敏感率超过85%,G+c中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别是42.9%和89.2%,只对万古霉素敏感(100%),检出的肠球菌已出现对万古霉素耐药。结论血培养分离的病原菌分布复杂,产ESBLs菌和MRS菌株检出率高,临床应重视血培养检测结果.合理用药。     

一种分离培养和观察微生物的简易方法

本文介绍了一种简易的分离、培养和观察微生物的方法（双载片法）,适用于好氧菌及耐氧性厌氧菌。试验表明,此法的优点是：适于连续地观察和研究微生物的个体生长,了解其生活史;能快速简便地测定微生物的死亡率;能有效地分离纯种;为耐氧性厌氧菌的研究提供了一种便利的方法。     

松嫩平原盐碱地中耐(嗜)盐菌的生物多样性

【目的】分离纯化松嫩平原盐碱地中可培养的耐盐菌和嗜盐菌,并分析其生物多样性。【方法】采用纯培养法和定向富集法从该地区盐碱土样中分离耐盐菌和嗜盐菌,然后通过16S rRNA基因同源性比对鉴定所分离细菌的系统发育学地位,从而获取松嫩平原盐碱地中耐盐菌和嗜盐菌的多样性信息。【结果】共分离到细菌40株,分属于细菌域中3个门(Actinobacteria,Firmicutes,γ-Proteobacteria)、8个科、16个属、34个种。其中多数菌株属于厚壁菌门(Firmicutes),最优势属为葡球菌属(Staphylococcus)(8株,占总菌株的20%),其次依次为盐单胞菌属(Halomonas)(5株,12.5%)、芽胞杆菌属(Bacillus)(4株,10%)、大洋芽胞杆菌属(Oceanbacillus)(4株,10%)、库克菌属(Kocuria)(4株,10%)和假单胞菌属(Pseudomonas)(3株,7.5%)等。其中9株细菌的16S rRNA基因序列与最近缘种的同源性在97.2%-99.0%之间,可能为新种。菌株耐盐能力主要在5%-10%之间,其中62.5%的菌株为耐盐菌,其余则为中度嗜盐菌。所有菌株的耐碱能力在pH 9-12之间,其中60%的菌株耐碱能力则高达pH 12,除两株为嗜碱菌,其余均为耐碱菌。【结论】研究结果表明,松嫩平原盐碱地中耐盐菌与嗜盐菌种群丰富,主要以葡萄球菌和盐单胞菌为主,菌株不仅耐盐能力高而且耐碱能力也高,并且该地区可能含有丰富的耐盐菌和嗜盐菌的新物种。     

抗耐药细菌药用植物内生菌的筛选与鉴定

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐头孢霉素大肠杆菌和耐亚胺培南铜绿假单胞菌在医院临床治疗中引起的严重感染,极大地危害着人类身体健康。旨在从植物组织中分离和筛选高活性的拮抗上述耐药细菌的内生菌株。从分离自22种药用植物组织的197株内生菌中,经过两步筛选获得18株对MRSA有拮抗作用的菌株,未筛选到对耐头孢霉素大肠杆菌和耐亚胺培南铜绿假单胞菌有拮抗作用的菌株;经16SrRNA序列分析,其中8株为链霉菌属,6株为芽孢杆菌属,4株为假单胞菌属;对抑菌效果较强的5株菌进行发酵培养,检测发酵液对MRSA的抑菌效果,其中QN1和CF2的发酵液对MRSA有很好的抑制效果。     

广西湖润锰矿床的共生生金菌的分离与鉴定

从锰矿床中分离出一种氧化锰的细菌──共生生金菌,该菌嗜温、好氧,是一种化能有机营养型细菌,其适宜于pH6~8的环境中生长,生长具有周期性,与锰作用也表现出阶段性,是氧化锰的主要生物因素。     

铅锌矿区耐砷细菌的分离、鉴定及性质研究

旨在从湖南康家湾铅锌矿区的重金属污染土壤样品中筛选出耐高浓度砷的细菌菌株。用稀释涂布法分离耐砷细菌;根据16S r RNA基因系统发育分析鉴定分离得到的砷高耐受性菌株并检测菌株内含有的砷耐受性相关基因;用砷钼蓝法测定耐砷细菌的砷氧化还原能力;并通过吲哚乙酸(IAA)定量实验检测优势菌株产IAA的能力。结果显示,从土壤样品中共分离出152株耐砷细菌,其中6株细菌对As5+和As3+的耐受性值分别高达800 mmol/L和20 mmol/L;并且这6株耐砷细菌分属于5个不同的属:假单胞菌属、苍白杆菌属、芽孢杆菌属、威廉氏菌属和节细菌属;菌株Tw31、Tw133、Sw149和Tw222中存在砷还原酶基因ars C,Bw218和Tw222中存在砷离子外排基因ars B/ACR3(2);在72 h之内,菌株Tw133和Tw222的As3+氧化率(约17%)和As5+还原率(约35%)均高于其他菌株;尤其是菌株Tw133在144 h具有48.66%的As5+还原率;且这两株菌分别能产生42.86μg/m L和24.36μg/m L的IAA。筛选出的Tw133和Tw222菌株在砷耐受性、砷氧还能力和产IAA能力等方面展现出了较明显的优势,为深入研究细菌的砷耐受性机制提供了实验材料。     

神经外科重症监护病房常见病原菌及耐药性分析

目的:了解神经外科重症监护病房(NICU)常见病原菌及其耐药情况,为临床抗菌药物合理使用提供理论依据。方法:收集2009年1月-2010年12月NICU收治患者的各种标本,对病原菌的分布情况及其对抗菌药物的耐药情况进行回顾性分析。结果:分离出病原菌537株,其中革兰氏阴性菌239株(占68.72%),革兰氏阳性菌139株(占25.88%),真菌29株(占5.40%);前5位病原菌依次为鲍曼不动杆菌(19.93%)、肺炎克雷伯菌(18.44%)、金黄色葡萄球菌(12.29%)、铜绿假单胞菌(7.82%)、大肠埃希氏菌(5.77%);产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希氏菌分离率分别为37.37%、64.52%;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离率和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)分离率分别为63.08%、87.50%。结论:NICU病原菌以革兰氏阴性菌为主,对常用抗菌药物的耐药性高。需持续进行细菌流行病学及耐药性监测,指导临床合理使用抗菌药物,减少细菌耐药性产生。     

2013年新疆17家三级医院细菌耐药性监测分析

目的:了解新疆地区17家三级医院2013年临床分离细菌的分布特征及对抗生素的耐药性。方法:采用最小抑菌浓度法(MIC)和纸片扩散法(K-B)对细菌进行药物敏感试验。结果:临床共分离出细菌44022株,其中革兰阳性菌占30.2%,革兰阴性菌占69.8%。1大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌产ESBLs菌株检出率分别为66.2%、48.0%和52.0%。2鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌对亚胺培南和美洛培南的耐药率分别为51.8%、30.4%和37.6%、22.9%。3耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)的检出率分别为27.7%和79.8%。414岁以下儿童肺炎链球菌对青霉素的耐药率(4.2%)高于成人(2.1%)。泛耐药菌株(XDR)中,鲍曼不动杆菌381株(9.6%),铜绿假单胞菌57株(1.7%),大肠埃希菌6株(0.1%),肺炎克雷伯菌16株(0.3%)。结论:通过对细菌耐药数据分析情况来看,细菌耐药情况普遍存在,对于耐药克隆株的传播,应加以关注;此外,应加强细菌耐药监测,合理使用抗生素。     

专一性PCR和变性梯度胶电泳协助从焦化废水处理装置中分离优势功能菌Thauera属菌株

【目的】在专一性PCR和变性梯度胶电泳(DGGE)的协助下,从废水处理装置的微生物群落中分离较难分离的功能菌Thauera。【方法和结果】本研究首先使用Thauera特异性PCR-DGGE的方法鉴定了焦化废水处理装置反硝化池生物膜中的Thauera在6种培养基、好氧/厌氧条件下的生长情况。挑选Thauera多样性较高的培养基1/10 NB与MMQ在好氧条件下进行分离培养。然后使用Thauera特异性PCR方法确定分离得到的菌落是否呈阳性,并使用DGGE的方法检验其是否为纯菌。使用不同培养基对含有Thauera的混合菌落进行进一步纯化,DGGE检测发现MMP培养基对混合细菌菌落Q20中的Thauera有明显的富集作用。经过Thauera特异性PCR结合DGGE检测对Thauera属细菌进行追踪,将混合菌落在MMP培养基上多次划线,最终分离得到纯菌。通过这种方法,从反硝化池样品中分离获得了3株在样品中最为主要的Thauera菌株。【结论】以特异性分子标记为导向分离培养细菌,不仅提高了分离效率及细菌筛选的灵敏度,还能协助分离常规方法难以分离的细菌。     

耐氧双歧杆菌的分离和鉴定

从中年人粪便中分离到136株可疑双歧杆菌,通过耐氧力测定获得一株耐氧性菌.经属和种的系统生理生化鉴定,确认为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum).小范围饮用实验结果表明,该菌对便秘有疗效.     

新疆乌尔禾地区盐渍土壤耐盐细菌多样性与群落结构研究

研究新疆北部乌尔禾地区盐渍土壤中微生物群落结构及多样性,以期发现新的高盐环境耐盐性微生物资源菌株。采用传统分离培养法获得可培养耐盐菌株并对菌株形态学、16S rRNA基因测序、耐盐特性进行研究,同时结合高通量测序技术分析新疆乌尔禾地区盐渍土壤耐盐细菌的多样性与群落结构。共分离得到耐盐细菌11株,分属6个属,均为中度耐盐菌,以芽胞杆菌属(Bacillus)为优势菌。对盐渍土壤微生物16S rRNA(V3～V4)基因测序,共获得细菌序列290 952条,分属24个门410个属,变形菌门(Proteobacteria, 60.31%)、厚壁菌门(Firmicutes, 21.52%)、拟杆菌门(Bacteroidetes, 6.9%)和放线菌门(Actinobacteria, 6%)相对丰度较高。优势属为克吕沃尔菌属(Kluyvera,21%)、Hafnia-Obesumbacterium(19.6%)和假单胞菌属(Pseudomonas,7.5%)。结果表明,新疆乌尔禾地区盐渍土壤耐盐细菌优势菌群以芽胞杆菌属(Bacillus)居多,细菌群落结构较复杂,潜在可利用微生物资源较为丰富,对高盐极端环境耐盐微生物新资源有进一步研究的意义。     

一株抗MRSA内生细菌的鉴定及其活性物质

根据生理生化特征和16S rDNA序列,对一株从新疆苦豆子Sophora alopecuroides中分离的、对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)具有较强拮抗作用的内生细菌菌株KDNB6进行鉴定;并通过硅胶柱、凝胶柱层析从该菌发酵产物中分离纯化了抗MRSA的活性物质。结果表明菌株KDNB6各项特征与粘质沙雷氏菌Serratia marcescens最为接近,鉴定为S.marcescens。从菌株KDNB6的代谢产物中分离到一个抗MRSA的活性成分。     

268例化脓性中耳炎分泌物细菌培养及对三种滴耳液的筛选

对２６８例（２８２耳）急性化脓性中耳炎分泌物进行需氧菌培养鉴定。分离出致病菌２３８株,阳性率８４．３％。其中革兰氏阳性菌１４８株,占６２．２％,以金黄色葡萄球菌为主,革兰氏阴性菌９０株,占３２．８％,以假单胞菌属为主。单一菌生长２１２例,复合菌生长２６例。２３８株细菌共分离出１９个种类细菌。我们对其中１２０例分离菌株进行体外药敏测定。对氧氟沙星敏感者Ⅲ株（占９２．９％）,对环丙沙星敏感者１０７株（     

南极地区海底沉积物中低温菌的鉴定与生长温度特征

从南极半岛及舍得兰群岛海底沉积物的13个样品中分离到23株细菌,进行了0、5、10、15、18 20、25℃温度梯度培养试验及耐盐度试验。由生长温度曲线得知,其中15株菌在0℃生长,依据菌株不同,其最适生长温度范围均在5—20℃以内;25℃下生长明显下降(9株)或缓慢下降(6株),属于耐冷菌。经鉴定,假单胞菌11株;弧菌1株;芽孢杆菌2株及黄杆菌1株。这15株菌中2,11(均为假单胞菌)及15(黄杆菌)的最适生长温度均为5℃;且前两株菌对中温较敏感;10 (假单胞菌);14(芽孢杆菌)的最适生长温度为10℃。本文还讨论了菌的分布与地区,以及与样点水源和距陆地远近间的相关性。     

极端环境中甲烷氧化细菌的分离和特性

从乙醇浓度高达6—7%,pH低至3—4的厌氧曲酒发酵醅中,分离到一株专性甲烷氧化细菌854-1。该菌仅依赖于甲烷好氧生长,在普通牛肉膏平板和以甲醇作为唯一碳源和能源的培养基中均不能生长。细胞革兰氏染色反应     

青藏高原药用植物内生细菌多样性研究

采用传统的分离方法和分子生物学的技术,对我国青藏高原药用植物党参、黄芪、连翘的内生细菌进行遗传多样性的研究,共分离到42株内生细菌,分属于9个属,其中微球菌属(Micrococcus sp.)为此类群的优势菌群。所分离到的所有菌株均属于兼性嗜碱菌和耐盐菌,这也反映了青藏高原高盐碱性的土壤性质。所分离到的3种药用植物内生细菌均对抗生素有一定的抗性,也证明了药用植物内生细菌与药用植物本身一样,具有某些抗药活性。     

天山冻土产低温脂肪酶菌株的筛选及其多样性分析

【目的】通过天山冻土细菌的分离和产低温脂肪酶菌株的筛选,了解天山冻土微生物的物种多样性和产脂肪酶菌株的系统发育多样性,为高效低温脂肪酶生物技术奠定基础。【方法】采用稀浓度的R2A、TSB平板涂布分离天山冻土中可培养细菌,通过选择性培养基筛选产低温脂肪酶的菌株。采用细菌常规生理生化实验、最适生长温度、耐盐性、产酶性能对分离菌株的生理学进行研究,通过16S rRNA基因序列分析确定产脂肪酶菌种的系统进化地位,通过BOX-PCR指纹技术对16S rRNA基因高度同源性的菌株进一步区分。【结果】分离筛选到78株可培养低温菌,选择培养基显示有17株可产低温脂肪酶,其中8株在两种选择培养基中均可产脂肪酶和酯酶。17株产酶菌分别隶属于5个系统发育类群、6个属,其中假单胞菌属(Pseudomonas)占大多数(58.9%)。【结论】天山冻土中产低温脂肪酶的细菌具有较丰富的系统发育多样性,依据生长温度,均属于耐冷菌。     

2000年广州地区常见病原菌耐药性监测

目的：对广州地区临床分离菌进行耐药性监测,为临床合理用药提供依据。方法：采用纸片扩散法进行药敏试验,用whonet软件进行统计和分析。结果：耐甲氧床西林的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌分别占50.8%和79.1%,未发现耐万古霉素的葡萄球菌,大肠埃希菌和克雷伯菌属未发现耐亚胺培南,产超广谱β-内酰胺酶的发生率为36.4%和31.7%,肠杆菌属、不动杆菌属对第三代头孢菌素的耐药率较高,铜绿假单胞菌对头孢他啶和亚胺培南仍较敏感。结论：了解细菌耐药的最新动态,对临床合理用药具有重要意义。