应用于细菌分类学中的DNA-DNA杂交方法

自六十年代以来,由于分子生物学不断向细菌分类学领域渗透,使人们有可能在分子水平上研究种间关系,把以表型特征为主要依据的细菌分类学引向深入。由于碱基对的线性序列决定着生物的“遗传密码”,控制着生物的表型特征,因此碱基线性序列和表型特征之间有     

短状杆菌的DNA分子杂交与分类学研究

利用非放射性光敏生物素标记DNA分子与固定在微稀释板上的热变性单链DNA杂交的方法,对短状杆菌(Brachybacterium)15个菌株的染色体DNA进行分子杂交．通过测定荧光强度,确定DNA间的同源值．根据其遗传相关性,对难以从形态特征、生理生化特性等进一步分类的细菌在种的水平上定论,确定其应有的分类位置．光敏生物素标记DNA,在微稀释板上进行分子杂交是一种准确、快速的杂交技术,在短状杆菌的分类学研究中起着决定性的作用．     

现代分子方法在细菌分类学方面的应用

现代分子方法在细菌分类学方面的应用李颐,陈锡时（沈阳农业大学土化系,１１０１６１）分子方法应用于细菌分类始于六十年代初。这些方法的应用对改进和扩大细菌分类学领域作出了积极的贡献,并越来越受到微生物学界的重视。其中ＤＮＡ：ｒＲＮＡ杂交技术在属及超属的水...     

细菌基因组DNA提取方法概述

细菌基因组DNA提取是分子生物学研究的基础,DNA提取的质量和效率可直接影响后续实验结果的准确性和精确性。综述并比较了近10年细菌DNA提取的几种方法,分析不同方法的提取效率,以期为分子生物学研究提供更可靠的基础。     

细菌分类学教学的几点体会

细菌分类学教学的几点体会杨文博（天津南开大学微生物学系,天津３０００７１）细菌分类学是微生物学一门重要的分支学科。在设置微生物学系或微生物学专业的一些高等院校按专业必修课开设这门课。笔者在多年从事细菌分类学的教学工作中,深得一些体会,草拟成文,愿与同...     

细菌DNA的一种大量提取方法

本文介绍了一种大量提取细菌DNA的方法。该法是用60℃裂解菌体,以氯仿-苯酚去除蛋白,用Rnase去除RNA,用1倍体积95%乙醇沉淀DNA,省略了异丙醇沉淀步骤。而且该方法操作方便,对仪器要求不高。该法改进结果是:可稳定地得到50—60%的DNA回收率。可用于革兰氏阴性和阳性细菌的DNA提取。有些菌株用Marmur法和Zaslott法提取,DNA回收率在10%以下,采用本法仍能得到50%的回收率。每次提取的DNA量在毫克数量级。特别适合用于Tm法测定DNA G+C mol%含量所需DNA样品的制备。     

GISH中杂交鲷亲本封阻DNA不同制备方法的效果

目的:基因组荧光原位杂交(GISH)作为一种细胞遗传学的研究方法,以其特定的优点被越来越广泛的应用于杂种染色体分析、染色体行为考察等方面。采用适当的封阻DNA制备方法得到合适的封阻DNA从而使得在基因组原位杂交中大大提高杂交效率,更能突显GISH方法的优势。方法:采用煮沸法和超声波破碎法对杂交鲷亲本真鲷(♀)、黑鲷(♂)DNA进行剪切研究了两种鲷类封阻DNA的制备。结果:煮沸15 min时DNA已被切断。煮沸70 min以后,DNA片段更加集中,主要分布在500bp左右。煮沸90 min或者煮沸120 min以后发现,DNA电泳条带主要分布于250 bp附近,已达到GISH所需封阻DNA片段大小的要求。结论:煮沸法对基因组DNA的剪切,与超声波清洗仪剪切DNA相比,具有更高的效率。研究结果为基因组荧光原位杂交的顺利进行提供了条件。     

DNA条形码与动植物分类学的研究

DNA条形码在动植物分类学中的研究最近几年非常火热。这项技术在国外研究的比较多,国内的许多方面的研究还没达到国际水平。我国的动植物种类比较繁多,地区差异也较大,怎样能将这些物种准确,快速的进行分类,是众多动植物学家一直在研究的难题。针对DNA条形码研究的现状和他在动植物学中应用以及它存在的争议来进一步认识DNA条形码。     

不产氧光合细菌的分类学进展

不产氧光合细菌(APB)一直是研究生命起源与进化、光合作用和固氮机理的良好模式生物.近年来,APB资源研究发展迅速,不断发现新的物种、模式种及特殊功能物种,不断提出新的分类单元,APB分类系统发生了较大变化,同时引起了一定混乱.本文对不产氧光合细菌定义、分类系统和分类指征最新进展进行了系统述评,对分类系统中存在的问题和发展趋势也进行了评述.     

临床标本细菌基因组DNA提取方法探讨

目的优化细菌基因组DNA提取方法,使其适合临床细菌分子生物学检测需要。方法分别采用专用DNA提取液法、热裂解法、溶菌酶法、热裂解法与碱性裂解法组合改良法,对纯培养细菌和临床标本中细菌基因组DNA进行提取。结果专用DNA提取液法、溶菌酶法提取成功率为100%,热裂解法革兰阳性菌提取成功率为0%,革兰阴性菌成功率为100%,碱性裂解液法在NaOH浓度大于4 mmol时提取成功,临床标本在NaOH溶液超过20 mmol/L并含2%SDS时细菌基因组DNA的提取成功率为100%。结论热裂解法与碱性裂解法组合改良法提取细菌基因组DNA方便快速、简单实用,适用临床标本检测。     

体外诱导分化神经细胞的原位分子杂交方法

经１×１０－６ｍｏｌ／Ｌ视黄酸诱导的Ｐ１９细胞体外可向神经方向分化,接种于多聚赖氨酸（ｐｏｌｙＤｌｙｓｉｎｅ）和纤连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）包被的玻片后,细胞逐渐聚集成团,此时细胞的贴壁性较差,进行原位分子杂交时容易脱落。我们尝试在细胞表面覆盖一层明胶,减少了细胞的脱落,又比较了蛋白酶Ｋ和胃蛋白酶对细胞蛋白质的消化作用,确定胃蛋白酶可较温和地消化细胞蛋白质,使探针有效地透入结合,杂交后细胞亦能较完整地保留于玻片上。     

细菌分类学课程改革的探索与实践

从更新和充实教学内容、融应用实例和科研成果于教学、改进教学方法和教学手段等3个主要方面对细菌分类学课程进行改革,使古老的分类学增添了新的活力,提高了教学效果和质量。     

DNA芯片制作原理及其杂交信号检测方法

文章讨论了ＤＮＡ芯片的制作原理和杂交信号的检测方法。依其结构,ＤＮＡ芯片可分为两种形式,ＤＮＡ阵列和寡核苷酸微芯片。ＤＮＡ芯片的制作方法主要有光导原位合成法和自动化点样法。ＤＮＡ芯片与标记的探针或ＤＮＡ样品杂交,并通过探测杂交信号谱型业实现ＤＮＡ序列或基因表达的分析。适应于ＤＮＡ芯片的发展,同时出现了许多新型的杂交信号检测方法。主要有激光荧光扫描显微镜、激光扫描共焦显微镜、结合作用ＣＣＤ相机的荧光     

DNA芯片制作原理及其杂交信号检测方法

文章讨论了DNA芯片的制作原理和杂交信号的检测方法。依其结构,DNA芯片可分为两种形式,DNA阵列和寡核苷酸微芯片。DNA芯片的制作方法主要有光导原位合成法和自动化点样法。DNA芯片与标记的探针或DNA样品杂交,并通过探测杂交信号谱型来实现DNA序列或基因表达的分析。适应于DNA芯片的发展,同时出现了许多新型的杂交信号检测方法。主要有激光荧光扫描显微镜、激光扫描共焦显微镜、结合使用CCD相机的荧光显微镜、光纤生物传感器、化学发生法、光激发磷光物质存储屏法、光散射法等。     

《系统生物学的概念和方法》──分类学工作者的重要参考书

《系统生物学的概念和方法》──分类学工作者的重要参考书由赵铁桥研究员编著的《系统生物学的概念和方法》一书已由科学出版社出版,１９９５年１月在全国发行。该书全面介绍了现代系统生物学的学科分枝及其相互关系,从学科发展历史沿革的角度,对各分支学科研究目的、...     

土壤细菌DNA提取及多样性分析的T-RFLP方法

获得高质量的土壤总DNA是土壤细菌生态学的关键步骤之一.实验通过综合应用两个试剂盒(Soilmaster kit和DNA IQTM系统)的优点进行土壤样品总DNA的提取,结果证明该方法是一种快速、有效、灵敏、稳定的土壤DNA提取方法.另外尝试将16S rDNA序列和T-RFLP(Terminal restriction fragment 1ength polymorphism)技术引入土壤细菌DNA群落多样性的研究中,证明T-RFLP是一种有力的土壤细菌多样性分析工具.     

小鼠胚胎胃肠道细菌基因组DNA提取方法比较

目的:筛选能均衡地提取小鼠胚胎胃肠道微生物区系各种细菌总DNA的方法.方法:分别采用反复冻融法、CTAB -SDS法、柱式基因组DNA提取试剂盒法提取小鼠胚胎胃肠道细菌基因组DNA,对其进行琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定、PCR扩增等质量检测.结果:CTAB -SDS方法提取的基因组DNA纯度较高,OD260/OD280平均值最高,为1.845,电泳条带清晰,能满足下游的PCR扩增等分子操作.结论:确定CTAB -SDS方法为提取小鼠胚胎胃肠道细菌基因组DNA的最佳方法,为研究不同种动物胚胎的肠道菌群的结构和多样性奠定了基础.