利用酯酶同工酶技术检测香菇双单杂交后代

选用香菇的野生株Ｑ 与栽培株苏香的四种孢子单核体进行完全亲和双单杂交,运用拮抗试验并辅以液体出菇试验初步鉴定出１２ 个杂交后代,且对杂交后代酯酶同工酶进行了检测,并以聚类分析方法分析了菌株间酯酶同工酶酶谱的结果,较直观本质地反映了杂交后代及其与亲本之间的遗传差异,表明１ —１２ 号菌株是真正的双单杂交后代,认为菌株间酯酶同工酶酶相似系数值可以作为香菇遗传育种选择亲本的辅助的遗传标记     

香菇双单杂交后代不同发育阶段酯酶同工酶研究

选用香菇野生株分别与栽培株及杂交株进行双单杂交 ,得到 8个杂交后代 ,且具有结实能力 ,分别对液培 2 0d杂交后代菌丝与液培原基酯酶同工酶进行了比较研究。结果表明 ,液培 2 0d菌丝菌株间酯酶同工酶酶谱显示出多样性 ,可以作为鉴定菌株的辅助遗传标记 ,而原基菌株间酯酶同工酶酶谱谱带较少 ,呈现趋同效应 ,不宜作为鉴定香菇菌株的辅助遗传标记。     

利用SSR标记鉴定香菇单核体及杂交后代

【目的】研究简单重复序列(Simple sequence repeat,SSR)分子标记方法用于香菇原生质体单核体、孢子单核体及其杂交后代的分离和鉴定。【方法】利用基于香菇全基因组序列信息开发的SSR标记,分析由香菇品种"L808"双核菌丝制备的原生质体单核体、孢子单核体及其杂交后代的SSR指纹。【结果】对制备的原生质体单核体的鉴定中,在不经过杂交配对的情况下,鉴定出"L808"的两种不同极性的原生质体单核体,其分离比例为191:1,该鉴定结果得到SSR标记、随机扩增多态性DNA(Random amplified polymorphismic DNA,RAPD)标记及传统方法的验证。另外,开发的香菇SSR标记还能以多位点组合的方式,用于对孢子单核体及其杂交后代的鉴定。【结论】应用SSR标记可加快香菇单核体的制备进程,并提高鉴定单核体及相关杂交菌株的准确性,促进香菇遗传育种研究。     

担孢子介导传播对香菇双分体病毒LePV1群体形成的影响

【背景】LePV1为中国香菇种质资源中携带的主要病毒之一。在前期研究中,根据分子序列特征将LePV1带毒菌株群体分为两个分子类群(亚型I和亚型II),亚型I包含大部分带毒香菇菌株,而亚型II仅包含少数几个供试带毒香菇菌株,在地理上相距遥远的不同遗传背景香菇菌株中发现了同一LePV1分子类型。【目的】探究担孢子介导传播对香菇双分体病毒LePV1群体形成的影响。【方法】比较不同亚型菌株的有性担孢子后代带毒率差异,并采用单单杂交和单双杂交方式分析杂交对LePV1群体形成的影响等。【结果】亚型I中栽培菌株ZP51和野生菌株YS94的担孢子带毒率分别为70%和100%,亚型II中栽培菌株ZP28和野生菌株YS5的担孢子带毒率分别为45%和55%,暗示亚型I菌株担孢子传毒效率高于亚型II;当杂交配对的任一亲本携带LePV1时,无论是单单杂交还是单双杂交,获得的杂交子带毒率为100%。【结论】不同亚型担孢子病毒携带率的不同和杂交在香菇双分体病毒LePV1群体形成中可能发挥着重要作用;此外,LePV1不能在杂交不亲和的单核体之间传播,也不能在不亲和的单双杂交配对中进行传播;在杂交可亲和的单双杂交配对中,杂交成功的杂交子在与亲本双核体菌丝接触一段时间后,可以将病毒LePV1通过胞质传播传给亲本双核体菌丝体。该研究为明确香菇双分体病毒LePV1传播规律及LePV1群体形成机制提供了线索。     

香菇交配型因子次级重组体的鉴定

对13个香菇菌株的担孢子后代进行了交配型分析,其中8个菌株非亲和反应与亲和反应之比与预期的3∶1的比例无显著差异。另外5个菌株非亲和反应与亲和反应之比不符合3∶1,其中4个菌株在0.05显著水平的X2值仅略高于理论值,而另一菌株HL01具有特殊的表现,其单核体132个随机配对的非亲和反应与亲和反应之比为82∶50,X2值显著偏离3∶1的临界值。用4个标准测试菌株鉴定了来自HL01同一子实体的189个孢子单核体的交配型,在189个单核体中,161个单核体归于4种正常交配型(A1B1,A2B2,A1B2,A2B1)之一。而另外28个可能源于次级重组的单核体可分成另外4个类群。通过以所有可能的组合进行配对杂交,进一步分析了28个单核体的交配型。结果表明,次级重组同时在A因子和B因子中发生,重组值分别为8.5%和11.6%。A因子至少由2个亚基组成而B因子可能由不止2个亚基组成。随后的出菇试验表明,至少含有1个重组体的所有可亲和配对均具有结实能力。     

利用RAPD技术检测香菇双-单杂交后代

利用ＲＡＰＤ技术对香菇６个双单杂交菌株及其两个双核体基因组ＤＮＡ进行了检测,结果显示：１～３号杂交菌株之间的相似系数为０．８９３～０．９６２,它们与其亲本Ｓ之间的相似系数为０．８４２～０．８５９;４～６号杂交菌株之间的相似系数０．８５７～０．９２５,与其亲本ＳＳＯ１之间相似系数为０．７０８～０．９０２表明杂交菌株与其双核体亲本基因组具有较大差异,杂交菌株之间存在着不同程度差异,６个杂交菌株是真正的杂交后代,聚类分析树状图直观地表明了菌株间的遗传相关性,认为菌株间ＤＮＡ的相似系数值可以作为杂交育种选择亲本的     

香菇亲本菌株及其杂交后代的RAPD分析

运用随机扩增多态性ＤＮＡ技术对源于两个香菇双核菌的孢子单核体,原生质体单核体及其杂交后代进行了基因组ＤＮＡ多态性分析,用９个随机引物共扩增出１１６条ＤＮＡ片段,其中８２．５％具有多态性,综合分析９个随机引物的扩增谱带,可将所有供试亲本单核本清楚地工,且单聚类分析的结果与其来源及遗传背景相吻合。此外,用两个双核亲本菌株的各４个不同酱 孢子单核体两两酱所得的所有杂交组合,也均可与双核亲本菌株明确地区分     

利用RAPD技术检测香菇双—单杂交后代

利用ＲＡＰＤ技术对香菇６个双单杂交菌株及其两个双核体基因组ＤＮＡ进行了检测,结果显示：１－３号杂交菌株之间的相似系数为０．８９３－０．９６２,它们与其亲本Ｓ之间的相似系数为０．８４２－０．８５９;４－６号杂交菌株之间的相似系数０．８５７－０．９２５,与其亲本ＳＳＯ１之间相似系数为０．７０８－０．９０２;表明杂交菌株与其双核体亲本基因组具有较大差异,杂交菌株之间存在着不同程度差异,６个杂交菌株是真正     

香菇亲本菌株及其杂交后代的RAPD分析

运用随机扩增多态性DNA（RandomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD）技术对源于两个香菇（Lentinulaedodes）双核菌株的孢子单核体、原生质体单核体及其杂交后代进行了基因组DNA多态性分析。用9个随机引物共扩增出116条DNA片段,其中82．5％具有多态性。综合分析9个随机引物的扩增谱带,可将所有供试亲本单核体清楚地分开,且早核体聚类分析的结果与其来源及遗传背景相吻合。此外,用两个双核亲本菌株的各4个不同交配型的孢子单核体两两支配所得的所有杂交组合,也均可与双核亲本菌株明确地区分开来。因此,在杂交育种中,RAPD分析可为亲本的选配及杂种的鉴定提供可靠依据。     

香菇亲本菌株及其杂交后代的RAPD分析*

运用随机扩增多态性DNA（RandomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD）技术对源于两个香菇（Lentinulaedodes）双核菌株的孢子单核体、原生质体单核体及其杂交后代进行了基因组DNA多态性分析。用9个随机引物共扩增出116条DNA片段,其中82．5％具有多态性。综合分析9个随机引物的扩增谱带,可将所有供试亲本单核体清楚地分开,且早核体聚类分析的结果与其来源及遗传背景相吻合。此外,用两个双核亲本菌株的各4个不同交配型的孢子单核体两两支配所得的所有杂交组合,也均可与双核亲本菌株明确地区分开来。因此,在杂交育种中,RAPD分析可为亲本的选配及杂种的鉴定提供可靠依据。     

Anaerobically induced production of hybrid monokaryons by heterokaryons of Candida albicans

Summary During aerobic replication, balanced heterokaryons (hets) of Candida albicans produced by fusing protoplasts of complementing auxotrophic strains characteristically segregate low frequencies of prototrophic monokaryons bearing hybrid nuclei formed either through karyogamy or unidirectional internuclear genetic transfers within het cells. Anaerobic growth causes exponential inactivation of hets and induces their production of hybrid monokaryons. Both responses are functions of heterokaryosis as such and not the genetic backgrounds of hets. Evidence is presented that (i) the nuclei of anaerobically generated hybrids arise through induction in hets of karyogamy not internuclear genetic transfers and that (ii) the events underlying that induction are different from those responsible for inactivation of the cells.     

香菇135菌株特异SCAR标记在其原生质体单核中的分布

以香菇保藏菌种庆元135以及庆元出菇的135新鲜子实体组织分离得到的菌丝为材料制备原生质体,分别获得58和83个原生质体单核体;经交配型鉴定后,用已获得的135特异SCAR引物对单核进行PCR扩增,统计SCAR条带的分布。结果显示：原生质体单核体分为A1B1和A2B2两种交配型,而特异条带仅存在于后者中,证明135特异SCAR标记是稳定遗传的,也为鉴定以带标记核为亲本之一的杂交后代提供了依据,这就进一步拓宽了分子标记应用于菌株鉴定的适用范围。     

香菇135菌株特异SCAR标记在其原生质体单核中的分布

以香菇保藏菌种庆元135以及庆元出菇的135新鲜子实体组织分离得到的菌丝为材料制备原生质体,分别获得58和83个原生质体单核体;经交配型鉴定后,用已获得的135特异SCAR引物对单核进行PCR扩增,统计SCAR条带的分布。结果显示:原生质体单核体分为A1B1和A2B2两种交配型,而特异条带仅存在于后者中,证明135特异SCAR标记是稳定遗传的,也为鉴定以带标记核为亲本之一的杂交后代提供了依据,这就进一步拓宽了分子标记应用于菌株鉴定的适用范围。     

Development of SCAR Markers to Determine the Mating Types of Lepista nuda Protoplast Monokaryons

Lepista nuda (Bull. ex Fr.) Cooke belongs to Tricholomataceae and is an edible fungus with both economic and medical value. Mycelia were isolated from the fruiting bodies of L. nuda and were used to prepare the protoplast monokaryons. One hundred and fifteen monokaryons were obtained and their mating types were determined using somatic incompatibility tests. Protoplast monokaryons segregated into either the A₁B₁ or the A₂B₂ mating types. Inter-simple sequence repeats and sequence-related amplified polymorphism fingerprinting were used to analyse the mating types of these protoplast monokaryons and 16 sequence-characterised amplified region primers were developed to efficiently differentiate between the monokaryon mating types. Multiplex PCR analyses were also established. The data presented here outline a method for the precise and rapid identification of protoplast monokaryon mating types, which has the promise to shorten the period required for conventional crossbreeding.     

Effects of growth temperatures on plating efficiencies and stabilities of heterokaryons of Candida albicans

Heterokaryons (hets) of Candida albicans constructed by fusing protoplasts of complementing auxotrophs produce heterogeneous clones on minimal medium consisting of (i) a minority of slow-growing hets, (ii) a preponderance of non-growing, parental-type auxotrophic monokaryons, and (iii) some prototrophic monokaryons bearing hybrid nuclei. Hets grown at a given temperature within the range 25° C to 41° C replate with higher efficiencies at any lower temperature and exhibit progressively declining plating efficiencies as plate temperatures increase beyond that at which they were initially grown. Neither auxotrophic nor prototrophic monokaryons show such responses. Growth of colonies produced by hets, wild-type strains or prototrophic hybrid monokaryons is stimulated by temperatures in the order, 37° C > 30° C > 41° C > 25° C. However, the proportion of hets to auxotrophic monokaryons within individual net clones increases directly from 25° C to 41° C. Though this pattern obtains whether colonies are compared at equivalent sizes or ages, het frequencies decline as colonies age at all temperatures. Appearance of hybrid monokaryons within het clones is unaffected by growth temperature. The relationships of temperatures to plating efficiencies and stabilities of hets are independent of the natures of their complementing auxotrophies or the wild-type backgrounds of their nuclear components and are, therefore, functions of heterokaryosis per se. Modifications of these relationships by selective metabolic antagonists or by growth of hets on different preand post-plating carbon sources indicate that they reflect temperature-dependent properties of mitochondria which are peculiar to hets.     

酯酶同工酶及RAPD技术在香菇杂种优势研究中的应用

采用酯酶同工酶及RAPD技术对香菇3个亲本双核体(苏香、野生46#、野生80#)及其10个单核体、以及它们的10个杂交后代进行了遗传差异和亲缘关系的研究,同时针对亲本单核体酯酶同工酶标记和RAPD标记遗传距离、以及杂交子和亲本单核体RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势进行了相关性分析。结果表明,酯酶同工酶和RAPD技术都可进行香菇杂种优势群的划分研究,但RAPD标记检测的多态性要远远高于酯酶同工酶标记。相关分析结果表明,亲本单核体酯酶同工酶标记遗传距离与香菇产量超亲优势无相关性,而RAPD标记遗传距离与其存在极显著正相关;杂交子和以苏香为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势也存在极显著正相关,而杂交子和以野生46#、野生80#为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与其相关不显著。