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目的:通过多肽筛选和比较分析,找到针对人胚胎干细胞(hESC)特异结合的多肽的膜受体蛋白,为相关通路或特异膜表面蛋白下游的研究奠定基础。方法:首先,在前期运用噬菌体展示技术的基础上进行ELISA重筛选,通过对比结合强度的大小,挑选出特异性结合人胚胎干细胞的噬菌体多肽并且进行测序和合成有poly-his标签的多肽;然后运用His Pull-Down系统获得特异结合人胚胎干细胞的某一特殊噬菌体12肽的膜上靶分子受体蛋白;最后质谱测序后通过Mascot数据库和NCBI进行序列信息分析。结果:1通过ELISA重筛选,得到了高特异性结合人胚胎干细胞的两个噬菌体序列,其序列分别为HGAAWGTRTGHV(HGA)和VPATETAQAGHA(VPA)。2通过His Pull-Down实验得到了一个针对多肽VPA的特异性膜蛋白受体。3通过MALD质谱分析以及NCBI的数据库搜索分析,进一步确认这一VPA多肽特异性结合的潜在受体蛋白可能属于HECT超级家族。结论:寻找到一个潜在未知的人胚胎干细胞的特异表面标志物,此膜受体可与VPA多肽特异性结合,为人胚胎干细胞的筛选和鉴定提供了重要指标。 相似文献
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病毒通过与靶细胞表面的特异性受体结合,进而吸附、入侵靶细胞,劫持细胞的复制机器完成自身的复制周期。细胞受体作为病毒入侵宿主的门户,细胞受体的结构与功能及其介导病毒入侵的机制一直是病毒学研究的热点之一。对细胞受体的研究有助于了解病毒的致病机制并为病毒性疾病的防控提供科学依据。近年来,利用功能缺失性基因组学筛选病毒功能性受体的进展极大地拓展了人类对病毒入侵机制的认识和理解。目前,应用较为广泛的病毒功能性受体筛选策略包括RNA干扰技术、利用单倍体细胞系随机插入逆转录病毒致突变技术以及基于CRISPR/Cas9系统的新型编辑技术。本文系统介绍并比较了这三种病毒功能性受体筛选新策略,同时对其应用及优缺点进行了归纳总结,可为相关研究者提供一定的参考。 相似文献
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以辣根过氧化物酶标记人LDL、兔抗人LDLIgG或羊抗兔IgG抗体作为示踪剂,作用于培养的人胚肺细胞,经DAB-H_2O_2显色,超薄切片,电镜观察,结果表明: (1)细胞能与很低浓度LDL-HRP产生特异性结合,显示LDL受体的高亲和力。 (2)兔抗人LDLIgG-HRP与已结合在受体上的LDL的结合可被未标记的兔抗人LDLIgG封闭,而封闭后以羊抗兔IgG-HRP作用又显示特异性反应,这种反应只能在已有LDL结合的细胞膜上显示,IgG不能阻断这种反应。 (3)肝素或高浓度LDL对LDL-HRP与受体的结合产生竞争性抑制;事先经高脂培养,这种结合也受到抑制(反馈性抑制)。 (4)细胞对游离HRP不显示特异性高亲和力的结合。 (5)生长在不含LDL-HRP是培养液中的细胞也无这种特殊性反应。上述纳果说明,LDL-HRP是结合于质膜表面有外被区特异性的、高亲和力的LDL受体上。 相似文献
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问题1:S型细菌的D N A经过高温为什么不会失去活性?答:R型活肺炎双球菌(受体菌)在对数期后期(生长后期)约40m in内处于“感受态”,吸收外源DNA的能力比其他时期大1000倍。此时,R型活肺炎双球菌(受体菌)细胞膜表面有30~80个“感受态因子”位点。感受态因子是一种胞外蛋白,它可以催化外来DNA片段的吸收或降解细胞表面某种成分,从而使细胞表面的DNA受体显露出来(也可能是一种自溶酶,可特异性地结合双链DNA)。被加热杀死的S型肺炎双球菌(供体菌)通过自溶过程,释放出自身的DNA片段(已经失活,但双链结构尚存在,分子量小于1×107,约含15… 相似文献
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近场光学显微镜结合量子点标记人胃腺癌SGC-7901细胞靶点的观察 总被引:3,自引:0,他引:3
扫描近场光学显微镜突破衍射极限,具有纳米量级的空间分辨率,量子点(QD s)标记有荧光强度高且抗光漂白能力强等优点。结合上述两种技术,对人胃腺癌SGC-7901细胞膜表面特异性结合的叶酸受体(FR)进行成像探测,获得了叶酸受体在SGC-7901细胞膜表面上的分布,以及细胞内化外源性叶酸过程中叶酸受体在细胞膜表面的分布变化,成像的光学分辨率达到120 nm。实验结果表明:特异性结合的叶酸受体在SGC-7901细胞膜表面的分布,绝大部分是以聚集体的形式存在。随着SGC-7901细胞内化叶酸量的增加,叶酸受体在细胞膜表面的分布密度逐渐降低,并在经过120 m in左右趋于稳定。上述方法和手段为实现单细胞水平上靶点分布和变化的长期监测,肿瘤细胞内化受体的机制研究提供了新的技术途径。 相似文献
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尼帕病毒融合蛋白和受体结合蛋白基因DNA免疫的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV囊膜蛋白F和G基因的真核表达质粒pCAGG-NiV-F和pCAGG-NiV-G.细胞融合试验表明,重组NiV融合蛋白F和受体结合蛋白G在pCAGG-NiV-F、pCAGG-NiV-G共转染BHK细胞中获得表达,并具有良好生物学活性.真核表达质粒pCAGG-NiV-F、pCAGG-NiV-G和pCAGG-NiV-F pCAGG-NiV-G DNA分别按100μg/只的剂量肌肉注射免疫6周龄BALB/c小鼠,间隔4周加强免疫,第二次加强免疫3周后采血,分离血清备用.分别以重组杆状病毒感染Sf9细胞表达的重组NiV融合蛋白(rNF)和受体结合蛋白(rNG)为包被抗原,应用间接ELISA检测上述质粒DNA免疫血清中的特异性抗体,具有较高的敏感性和特异性.另外,中和试验结果表明,DNA免疫小鼠产生的特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性,并且受体结合蛋白G基因DNA诱导中和抗体的滴度高于融合蛋白F基因DNA.结果表明,DNA疫苗具有防制尼帕病毒性脑炎的潜力. 相似文献
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菌落杂交技术通过RNA-DNA或DNA-DNA杂交能在短时间内筛选出含某些特异DNA序列的细菌克隆。细菌菌落在铺于琼脂平皿中的硝酸纤维素滤膜上培养。影印上述菌落作参比菌落,并于2-4℃保存。裂解滤膜菌落细胞,不必除去细胞残屑,释出DNA作原位变性。放射RNA或DNA探针与滤膜上菌落DNA杂交。 相似文献
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雄激素受体的作用机制 总被引:8,自引:0,他引:8
主要概述了雄激素受体的作用机制,特别对影响雄激素受体特异性的因素进行探讨.雄激素受体(AR)属于甾体激素受体超家族,能通过配体依赖方式与特异的DNA序列结合,调控基因转录. 相似文献
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本文对近年有关嗜肝DNA病毒进入细胞的分子机制的研究作一综述,主要介绍了近年来鸭乙型肝炎病毒细胞表面受体的研究进展,新发现的与乙型肝炎病毒进入细胞有关的细胞膜分子以及乙型肝炎病毒包膜蛋白的水解机制。 相似文献
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本文利用Southwestern印迹技术发现人肿瘤HT1080细胞染色质蛋白中一组与N-ras基因结合的蛋白,分子量约为150,105,95,90KDa,而与Ha-ras基因结合的一组蛋白,分子量约为160,115,100,55KDa,其中150KDa蛋白是N-ras基因特异的DNA结合蛋白,具有细胞型特异性,在HT1080细胞中含量最多,T24细胞次之,而在人HeLa细胞,淋巴细胞、肠细胞以及未转化的NTH3T3细胞中未被发现。此种蛋白可能与N-ras基因在HT1080细胞内的激活有密切关系。 相似文献
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透明带的精子受体在ZP3的O—糖链上 总被引:1,自引:0,他引:1
哺乳动物的受精过程主要包括几个步骤 ,精子与卵子相遇后 ,精子结合到卵透明带上 ,引起精子的顶体反应 ,随后精子穿透透明带与卵细胞融合受精。精卵结合具有种属特异性 ,这种特异性结合是由精子表面的特异蛋白和卵透明带糖蛋白通过受体配体模式进行的。但是 ,卵透明带上的什么物质与精子识别和结合呢 ?近 30年来 ,这一领域的研究很活跃 ,也取得了很大的进展。1 .小鼠透明带糖蛋白ZP3作为精子受体透明带是卵细胞膜外的一层特殊的非细胞结构 ,是精子与卵细胞识别和结合的部位。小鼠和其它研究过的哺乳类的透明带都是由少数几种糖蛋白组成 ,… 相似文献
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T细胞受体基因 以~(125)Ⅰ标记的抗原测试T细胞,发现T细胞能与抗原结合,在放射活性很高时被杀灭,余下的T细胞就不再能结合此种抗原。这提示T细胞也具有抗原受体,且有克隆多样性。但对TCR的本质多年来捉摸不定,推测也是一种Ig样分子,故称之为IgT或Igx。1983年同时有几个实验室制备了与TCR反应的克隆特异性抗体。1984年以来相继克隆了TCR基因的 相似文献