三齿草藤(Vicia bungei Ohwi)凝集素的细胞表面受体研究

应用亲和层析法从三齿草藤(Vicia bungei Ohwi)种子中纯化的三齿草藤凝集素(VBL),可以凝集兔和豚鼠的红细胞,也可凝集人、牛和羊的精细胞,说明这些细胞表面存在有VBL的受体。用FITC和~(125)I进行标记,可得到FITC-VBL和~(125)I-VBL,其生物学活性不受影响。氯胺T法的标记率可达55％;应用FITC-VBL研究牛精细胞和兔红细胞膜上VBL受体的分布,发现二者由胞膜上受体分布据不一致。VBL与牛精细胞结合条件的正交试验表明细胞浓度的影响最大。用不同量的未标记的VBL对~(125)I-VBL与兔红细胞和人精细胞的结合实验,以Scatchard法作图,兔红细胞得一类似于双曲线的凹形曲线,提示该细胞膜上受体的性质有所不同,而人精细胞却有很大差异。若以兔红细胞膜上存在有高低亲和力两种受体进行计算,可求得结合常数和每个细胞上的受体数。应用几种单糖和外源凝集素影响~(125)I-VBL与兔红细胞的结合,当单糖(D-Man,D-Glc)浓度为0.01M时,相对结合率开始急剧下降,单糖浓度若增至0.1M时,其相对结合率仅为40％,而PHA-P和SML浓度为1mg/ml时,相对结合率开始下降,当浓度达10mg/ml时,相对结合率下降至30％左右。     

~(125)Ⅰ—标记尖吻蝮蛇出血毒素Ⅰ在家兔体内的药代动力学研究

用~(125)Ⅰ标记从尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)毒中分离出的出血毒素(Ⅰ Aa-HI),得到Ⅰ~(125)Ⅰ—AaHI。静脉注射~(125)Ⅰ—AaHI到家兔体内,对~(125)Ⅰ—AaHI在动物体内的分布和药物代谢动力学进行研究。注射~(125)Ⅰ—AaHI 5小时后将家兔杀死,测定各组织的放射性强度。结果表明有血脑屏障存在。~(125)Ⅰ—AaHI代谢的大量产物由肾通过尿排出。对于药物代谢动力学,计算机模似结果为一室模型,其中生物半衰期T_(1/2)为55.9分钟,K值为0.0124分钟。我们认为在动物体内可能有AaHI相关的结合位点或受体存在。     

鸡胚肝凝集素受体的放射自显影和扫描电镜观察

近些年来用标记过的外源凝集素作探针以研究细胞膜的结构和功能已取得很大进展。本文首次用~(125)I标记鸡胚肝凝集素,再以~(125)I-凝集素亲和标记鸡胚肝细胞。标记的鸡胚肝细胞经放射自显影(ARG),可用扫描电镜(SEM)对细胞表面受体的位点进行直接观察,以研究鸡胚肝凝集素受体的分布特征。     

鸡胚肝乳糖凝集素专一性的研究——SEM-ARG技术的应用

本文利用扫描电镜放射自显影(SEM-ARG)技术研究鸡胚肝凝集素的专一性。该凝集素经乳糖尿素液抽提和离心分离后,再用DE-52纤维素柱和蓝色葡聚糖柱进一步纯化。纯化后的鸡胚肝凝集素用 ¹²⁵Ⅰ标记。以标记的 ¹²⁵Ⅰ-凝集素为探针再标记来自不同组织的细胞。标记的细胞经过放射自显影,用扫描电镜对细胞表面凝集素受体的位点进行直接观察。实验结果表明鸡胚肝凝集素对细胞的凝集作用具有相对的专一性。     

脂肪细胞上的半夏蛋白受体

本文对分离的大鼠附睾脂肪细胞与半夏蛋白结合的若干性质进行了探讨。脂肪细胞与半夏蛋白的结合是专一的,非标记半夏蛋白可完全地置换~(125)Ⅰ-半夏蛋白。脂肪细胞上半夏蛋白受体与半夏蛋白的结合对半夏蛋白而言是一饱和过程,饱和曲线呈反曲形,但Scatchard图形则是一不规则的曲线,提示脂肪细胞上可能存在不止一种半夏蛋白受体。根据饱和曲线计算,每个脂肪细胞可结合大约6～7×10~7个分子半夏蛋白。当反应液中~(125)Ⅰ-半夏蛋白浓度对细胞而言足够高时,半夏蛋白与其受体的结合随溶液中细胞浓度的增高而增加。半夏蛋白与其受体的结合随温度的升高而减少,37℃的结合量仅为0℃的10%左右。在24℃时,半夏蛋白与其受体的结合很快达到平衡,但自然解离则极慢。在0℃达到平衡的半夏蛋白-受体复合物,当移置到37℃时,则很快解离,达到新的平衡,提示复合物在0℃比在37℃稳定。反应液中α-甲基甘露糖苷浓度为0.1M或甘露聚糖浓度为2毫克/毫升时,均观察不到它们有促使复合物解离的作用。伴刀豆球蛋白A具有显著的但不完全的抑制半夏蛋白与其受体结合的能力,它也能使半夏蛋白-受体复合物部分解离。胰岛素即使浓度高达2.5×10~(-5)M亦不抑制~(125)Ⅰ-半夏蛋白与其受体的结合。     

大鼠肝和肝癌DNA酶切片段与标记RNA杂交图谱比较

Southern印迹杂交实验提示,大鼠肝15kbp EcoR Ⅰ片段与~(125)Ⅰ标记核RNA杂交带强度,大于肝癌DNA相应片段;当以5′-~(32)P标记核RNA和3′-~(32)P标记核RNA代替~(125)Ⅰ标记核RNA时,在肝癌相应DNA片段处几无可见的杂交带。大鼠肝2.4kbp EcoR Ⅰ片段与~(125)Ⅰ标记核RNA杂交带明显强于肝癌相应DNA片段。而大鼠肝癌2.0kbp EcoRⅠ片段与~(125)Ⅰ标记核RNA的杂交带明显强于大鼠肝相应DNA片段。大鼠肝2.2kbp和5kbpBamH Ⅰ片段与~(125)Ⅰ标记核RNA或5′-~(32)P标记核RNA或3′-~(32)P标记核RNA的杂交带,均明显高于肝癌相应DNA片段。~(125)Ⅰ标记大鼠肝癌核RNA与大鼠肝和肝癌2.2kbp或1.1kbpEcoR ⅠDNA片段的杂交带,弱于用~(125)Ⅰ标记大鼠肝核RNA为探针得之结果,当以5′-~(32)P标记核RNA代替~(125)Ⅰ标记核RNA为探针时,差异更明显。     

鸡输卵管胞液中雌激素受体的性质研究

以乙酚(DES)刺激未成年的雌鸡,输卵管增长到0.6到1.0克,胞液中含有的雌激素受体为0.082微微克分子/毫克蛋白,此种受体表现有以下的特性。 1.专一地结合雌性激素。以雌二醇作配基时平衡解离常数是0.25×10~(-9)M~(-1);在输卵管胞液中该受体的结合位点是1356/细胞。 2.硫酸铵沉淀胞液中的雌激素受体已转变成为团聚状态,如在硫酸铵沉淀的过程中有钼酸钠存在则能明显地减少团聚,因此钼酸钠有防止胞液中受体团聚的作用。 3.胞液中雌激素受体进行DEAE—葡聚糖凝胶柱层析,不论有或无钼酸钠存在,均表现为一个单一的峰。     

胸腺激素受体的研究

胸腺激素可促进T淋巴细胞的成熟,因此在细胞免疫功能中起着十分重要的作用,本文报道了以~(125)Ⅰ-胸腺激素T_1的放射受体测定法研究猪胸腺激素T_1受体的初步结果。结果指出胸腺淋巴细胞的表面有胸腺激素受体,在pH6.0,37℃条件下,激素与淋巴细胞孵育60～90分钟,特异性结合可达最高。向结合系统中加入胰岛素、皮质激素或甲状腺素,不影响胸腺激素T_1与受体的结合,证明这种结合是专一的。但在胸腺激素各个组分间,这种专一性并不是很严格,例如胸腺激素E_1的性质与T_1有很大差别,但可以和T_1竞争受体。E_1和T_1可以竞争同一受体是否暗示它们作用于同一T细胞亚群,有待证实。胸腺激素与受体的结合能力与它的生物活力是相关的,T_1的活力随胰蛋白酶的消化而逐渐丧失,相应的T_1与受体结合的能力亦逐渐降低至零。所以用放射受体的方法测定的胸腺激素是代表有生物活力的部分,它的测定范围一般在10～1000毫微克之间。     

胸腺激素受体的研究

胸腺激素可促进T淋巴细胞的成熟,因此在细胞免疫功能中起着十分重要的作用,本文报道了以~(125)Ⅰ-胸腺激素T_1的放射受体测定法研究猪胸腺激素T_1受体的初步结果。结果指出胸腺淋巴细胞的表面有胸腺激素受体,在pH6.0,37℃条件下,激素与淋巴细胞孵育60～90分钟,特异性结合可达最高。向结合系统中加入胰岛素、皮质激素或甲状腺素,不影响胸腺激素T_1与受体的结合,证明这种结合是专一的。但在胸腺激素各个组分间,这种专一性并不是很严格,例如胸腺激素E_1的性质与T_1有很大差别,但可以和T_1竞争受体。E_1和T_1可以竞争同一受体是否暗示它们作用于同一T 细胞亚群,有待证实。胸腺激素与受体的结合能力与它的生物活力是相关的,T_1的活力随胰蛋白酶的消化而逐渐丧失,相应的T_1与受体结合的能力亦逐渐降低至零。所以用放射受体的方法测定的胸腺激素是代表有生物活力的部分,它的测定范围一般在10～1000毫微克之间。     

金环蛇神经毒素与乙酰胆碱受体结合的特点

进一步纯化了前一工作中从广西省产金环蛇(Bungarus fasciatus)蛇毒分离的突触后毒素Ⅰ和Ⅱ。以超饱和剂量的毒素Ⅰ或Ⅱ先与从电鳐(Narcine maculata)电器官得到的乙酰胆碱受体(AChR)保温10min 或 lh,再加入~(125)Ⅰ-标记α-银环蛇毒素或~(125)Ⅰ-标记眼镜蛇毒素,继续保温10min 或 lh,由测定与 AChR 结合的放射性强度得知,如以未经毒素Ⅰ或Ⅱ预饱和的放射性强度为100%,则经与其一预饱和者的约为30%,即毒素Ⅰ或Ⅱ只竞争地阻遏了α-银环蛇毒素或眼镜蛇毒素与 AChR 结合能力的2/3左右。文中讨论了存在两种类型 AChR 的可能性。     

若干外源凝集素对胰岛素与其受体相互作用的影响

本文研究了若干外源凝集素对胰岛素与其脂肪细胞胰岛素受体相互作用的影响。结果表明与D-甘露糖和D-葡萄糖专一结合的外源凝集素,如ConA(伴刀豆球蛋白A)、豌豆及蚕豆凝集素可抑制~(125)Ⅰ-胰岛素与其受体的结合。与D-半乳糖专一结合的外源凝集素,如蓖麻凝集素Ⅰ和天花粉凝集素基本上不抑制~(125)Ⅰ-胰岛素与其受体的结合,在低浓度时有一定程度的促进胰岛素与受体结合的能力。另外两个和低聚糖专一结合的半夏凝集素和PHA(菜豆凝集素)的效应和蓖麻凝集素Ⅰ等类似。这些结果说明在胰岛素受体分子表面可能存在着与ConA等专一结合的糖,而且它们在胰岛素受体与胰岛素结合部位的附近。而和其他几个外源凝集素专一结合的糖或低聚糖链则和胰岛素受体与胰岛素结合的部位相距较远,并就这些凝集素对胰岛素与受体结合的促进作用进行了讨论。     

成纤维细胞表皮生长因子的胞吞和向细胞核转移研究

本文以C3H小鼠胚胎正常成纤维细胞株C3H10T1/2C18(简称NC3H10)及其由氚标记脱氧胸苷(~3H-TdR)恶性转化的细胞株(简称TC 3H 10)为对象,研究了表皮生长因子(EGF)在受体介导下的胞吞和向细胞核转移现象。~(125)I-EGF 与细胞膜上的EGF 受体结合后,胞吞和向细胞核转移呈时间依赖性。两种细胞的EGF 的胞吞和向细胞核转移率接近。但是NC 3 H 10细胞~(125)I-EGF 胞知和向细胞核转移的绝对量明显高于TC 3 H 1 0细胞(p<0.05)。SDS-PAGE 电泳表明向细胞核转移的~(125)I-EGF 是未被降解的完整分子,溶酶体抑制剂NH_4Cl 对~(125)I-EGF 向细胞核转移有明显促进作用(p<0.05)。这些结果表明受体介导下的EGF 胞吞和向细胞核转移可能与EGF 的细胞核内凋节作用密切相关。     

转铁蛋白抑制大鼠卵泡颗粒细胞FSH受体的结合与维持

转铁蛋白能抑制大鼠卵泡颗粒细胞的分化,但其机理尚不清楚。本实验用已烯雌酚处理后分离的大鼠颗粒细胞,观察了转铁蛋白对FSH结合到颗粒细胞,以及在培养过程中对颗粒细胞FSH受体量维持的影响。结果表明,生理浓度范围的转铁蛋白部分地阻断了~(125)I-rFSH结合到颗粒细胞上;将转铁蛋白与FSH一起处理细胞,发现它能剂量依赖性地抑制FSH对颗粒细胞FSH受体的维持作用,并表现为孕酮及雌二醇的分泌减少。     

雌激素在兔胚泡着床中的作用——子宫雌激素受体的研究

为了验证雌激素作用存在于完整的和去卵巢兔胚泡着床过程中,本文用~3H—雌二醇交换法测定了早期妊娠 D_3、D_5、D_7子宫组织的雌二醇受体浓度,并与去卵巢后仅补充孕酮的 D_7子宫作比较。结果显示:在 D_3、D_5、D_7的子宫细胞浆和细胞核中都存在雌二醇受体。妊娠7天去卵巢兔的子宫细胞核中雌二醇受体量与妊娠7天卵巢完整的兔作比较,二者无明显差异。这说明去卵巢后子宫细胞核中雌激素受体浓度并未受影响,因此雌激素作用依然存在。关于胚泡是否有雌激素受体的问题,本工作在胚龄5、6、7天胚泡中未测得雌二醇受体。据此,胚泡着床时,雌激素的作用可能主要通过母体子宫组织而发挥其生理效应。     

大鼠前列腺染色质组分与雄激素-受体复合物的相互作用(英文)

本文用~3H-DHT/~(131)Ⅰ-受体双标记复合物,研究了雄激素作用过程中,其与大鼠前列腺细胞染色质的相互作用。前列腺细胞染色质经盐分部成4个组分,其中0.35mol/L低盐可溶性和2mol/L高盐不溶性染色质组分是与激素-受体复合物的主要结合部分,分别占48%和30%。按蛋白质的量计算,高盐不溶性染色质的结合程度是前者的17.5倍。该两种染色质组分的可能关系以及在雄激素作用中的机制值得深入探讨。与染色质各组分结合的雄激素-受体的~3H/~(131)Ⅰ比例恒定,提示DHT-受体复合物参与作用的完整性。实验结果提示,染色质蛋白在雄激素作用过程中,涉及到与DNA形成接受位点的可能。     

~(125)Ⅰ-中胚层诱导蛋白在东方蝾螈外胚层细胞内的定位

用放射自显影方法观察了外胚层细胞经~(125)Ⅰ-中胚层诱导蛋白处理不同时间的参入部位。随处理时间的不同~(125)Ⅰ-中胚层诱导蛋白的参入量和参入部位有所变化。处理1小时,约51%的外胚层细胞内出现标记蛋白,银颗粒多在细胞质内。处理3小时,标记细胞总数增至74%,而其中45%在核内观察到标记蛋白,每个核内平均为10个银颗粒。处理12小时,90%的反应细胞核内参入了标记蛋白,参入量增加为每个核内平均为21个银颗粒。实验结果表明,~(125)Ⅰ-中胚层诱导蛋白先是进入细胞质,然后转入细胞核。这似乎提示,中胚层诱导蛋白是在细胞核内行使其生理功能。     

巨噬细胞极低密度脂蛋白受体的调节作用

本文研究了小鼠腹腔巨噬细胞极低密度脂蛋白(VLDL)受体的调节。用富含甘油三酯(TG)的VLDL与小鼠巨噬细胞预温育后,细胞结合~(125)I-VLDL的最大结合容量(Bmax)比对照细胞只降低5％(1071/1127ng/mg细胞蛋白质),当细胞内TG增加到对照的2.5倍时,细胞摄取及降解~(125)I-VLDL的量分别下降40％和22％;乙酰-低密度脂蛋白(AC-LDL)预温育的细胞结合~(125)I-VLDL的Bmax比对照细胞只降低14％(633/831ng/mg细胞蛋白质),当细胞内胆固醇(Ch)增加到对照的23倍时,细胞摄取及降解~(125)I-VLDL的量只分别下降10％和21％。此后随着细胞内TG或Ch含量的增加,摄取及降解~(125)I-VLDL的量仍保持不变。 结论:细胞内TG或Ch含量对VLDL受体的调节作用微弱,与TG相比,Ch的调节作用更弱。     

[~(125)I]BE 2254能鉴定兔主动脉平滑肌的α_1肾上腺受体

α肾上腺受体在调节血管张力和反应性方面,可能行使重要的作用。血管α肾上腺受体的药物学特性,过去是通过血管的收缩,间接反应的,因此,对血管α肾上腺受体的生物化学特性及其调节作用仍不太清楚。近年来,由于放射性配基结合技术的迅速发展,改进了肾上腺受体的研究。已采用的氚标记α配基有[~3H]dihydroergocryptine、[~3H]yohimbine、[~3H]WB 4101。1981年Colucci等用放射性配基成功地测定了大鼠肠系膜动脉的α受体,发现它是α_1亚型。但由于氚标记的放射性配基相对特异性小、比放射性低、测定动脉平滑肌受体时需要大量的血管组织来制备膜受体,这对于一些小型实验动物,存在不少困难。最近,Tsujimoto等报道了一种新型的、高特异性的、有效的、同位素碘标记的α配基——[~(125)I]BE 2254。药理学实验说明,BE 2254对α_1受体有优先的抑制作用,用~(125)I标记的化合物,更增加了对α_1肾上腺受体     

B细胞免疫球蛋白与T细胞抗原受体基因的种系结构及其体细胞重排(续)

T细胞受体基因 以~(125)Ⅰ标记的抗原测试T细胞,发现T细胞能与抗原结合,在放射活性很高时被杀灭,余下的T细胞就不再能结合此种抗原。这提示T细胞也具有抗原受体,且有克隆多样性。但对TCR的本质多年来捉摸不定,推测也是一种Ig样分子,故称之为IgT或Igx。1983年同时有几个实验室制备了与TCR反应的克隆特异性抗体。1984年以来相继克隆了TCR基因的     

甾类雌激素叠氮化物与雌二醇17β-脱氢酶的激光亲和反应

以雌酮为原料,经过硝化、还原、重氮化及叠氮化钠处理,得到2-叠氮雌酮、4-叠氮雌酮、2-叠氮雌二醇和4-叠氮雌二醇。本文测定这四种叠氮衍生物作为雌二醇17β-脱氢酶底物的表观条件K_m依次为;1.75×10~(-4)mol/L、2.37×10~(-4)mol/L、1.39×10~(-4)mol/L、1.97×10~(-4)mol/L。在280nm波长激光照射下,它们均使雌二醇17β-脱氢酶失活,并遵循准一级动力学规律。如果这类亲和反应发生在雌激素依赖性肿瘤细胞内的雌激素酶或受体上,使酶或受体失去活性而不能发挥其正常的生理功能,可能会抑制肿瘤细胞的生长。用320nm波长激光照射时,四种化合物都没有使酶失活的作用。