胃癌癌旁肠化上皮酶组织化学研究

本文应用酶组化方法对６０例胃癌癌旁粘膜中４７例肠化上皮（７８．３％）的破性磷酸酶（ＡＬＰ）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、胞嘧啶单核苷酸酶（ＣＭＰ）、葡萄糖－６－磷酸酶（Ｇ－６－ｐａｓｅ）、焦磷酸硫胺素酶（ＴＰＰａｓｅ）、５－核苷酸酶（ＳＮａｓｅ）、三磷酸腺苷酶（Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ,Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ）和细胞色素氧化酶（ＣＣＯ）等九种细胞器标志酶进行了定位观察。结果发现肠化上皮吸收细胞上述酶活性均较强,且分布具有极性,杯状细胞酶反应较弱,主要位于细胞基底部。癌旁粘膜肠化阳性率为７８．３％,其中ＡＬＰ阳性的酶完全型肠化和ＡＬＰ阴性的酶不完全型肠化分别占５３．２％,４６．８％,两者出现率相近。酶完全型肠化ＡＬＰ阳性率在胃分化型癌及未分化型癌瘤旁分别占６９．２％和３３．３％。ＡＬＰ阳性率在胃分化型及未分化型癌组织内分别为３５．５％和０％。提示肠化上皮具有与肠上皮相似的代谢特征,酶完全型肠化和酶不完全型肠化可能是肠化的二种不同的形式,在致癌环境下,二者都有可能转变成癌,其中酶完全型肠化与分化型癌的关系较为密切。     

双基因表达载体的构建及生物活性观察

为了促进肠上皮细胞增殖、加速肠上皮机械屏障修复和防止肠源性感染的发生,利用分子克隆技术首先获得含胰高血糖素样肽-2(GLP-2)编码序列的高血糖素原cDNA片段,通过PCR重叠延伸技术成功拼接GLP2的信号肤及成熟肽,同时将成熟肽N-末端第二位丙氨酸的序列(GCT)定点突变为GGT序列(甘氨酸);并以我室保存的pcDNA3.1-HD-5-cDNA为模板克隆防御素-5(HD-5)信号肽及成熟肽序列,分别构建到双基因表达载体pVITRO3,转染肠上皮细胞并观察其对肠上皮细胞增殖活性和杀菌能力的影响,结果显示构建的pVITR03-HD-5-GLP2双基因性表达栽体具有促进肠上皮细胞增殖和抑制细菌增殖和黏附的作用.     

胰高血糖素样肽-2研究的新进展

胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptide-2,GLP-2)是胰高血糖素原基因转录、翻译后处理加工的33氨基酸的多肽,GLP-2经二酰肽酶Ⅳ水解后,则失去生物学活性。GLP-2作为一种肠上皮特异性生长因子,能促进正常肠黏膜的生长及损伤肠上皮的修复。GLP-2通过作用于GLP-2受体(GLP-2R)来发挥生物学作用。GLP-2R在肠道的广泛分布(肠上皮细胞、肠内在神经元、肠内分泌细胞、肠黏膜下的肌纤维母细胞),提示GLP-2可能通过直接、间接等多条途径发挥生物学作用。本文概括介绍GLP-2的特性、生理作用及机制等方面的研究进展。     

erbB-2与胃癌细胞恶性表型及其增殖调控的关系

应用基因重组、基因转染、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、细胞生长曲线测定及裸鼠成瘤观察了反义ｅｒｂＢ－２逆转录病毒重组载体的转染对人胃癌细胞中ｅｒｂＢ－２过度表达的影响及其对ＥＧＦ的反应性．研究结果显示,ｅｒｂＢ－２的表达被其反义重组子特异抑制,伴有细胞增殖能力的下降及致瘤性的下降;在ＥＧＦ的刺激下,ｅｒｂＢ－２高表达肿瘤细胞生长速度提高的幅度显著大于ｅｒｂＢ－２反义重组载体转染细胞;ＥＧＦ促细胞增殖及促基因表达的功能在ｅｒｂＢ－２反义重组子转染后受到抑制,提示ｅｒｂＢ－２在细胞增殖调控中具有重要功能．     

血管内皮生长因子C的研究进展

血管内皮生长因子Ｃ（ＶＥＧＦ－Ｃ）是一种特异性血管、淋巴管内皮细胞调节因子,其结构与ＶＥＧＦ具有同源性。ＶＥＧＦ－Ｃ通过受体ＣＥＧＦＲ－２和ＶＥＧＦＲ－３发挥作用,其ｍＲＮＡ的表达具有一定的组织特点,并受多种因素的调节。ＶＥＧＦ－Ｃ对于胚胎发育,细胞分化、活体内外血管、淋巴管内皮细胞均有重要的调节作用。     

促性腺激素释放激素免疫调节作用的研究进展

淋巴细胞自身可以表达促性腺激素释放激素（ｇｏｎａｄｏｒｅｌｉｎ,ＧｎＲＨ）和其受体（ｆｏｎａｄｏｒｅｌｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＧｎＲＨＲ）。ＧｎＲＨ能促进Ｔ淋巴细胞的增殖及ＩＬ－２Ｒ的表达;也能促进Ｂ细胞的增殖分化及ＩｇＧ的分泌;对早期淋巴细胞增殖分化有特别重要的作用;对ＮＫ细胞、粒细胞、巨噬细胞也有一定影响。这说明ＧｎＲＨ对机体细胞免疫和体液免疫均有较强的调节作用。     

IGF—I及其受体,IGF结合蛋白—2和LH受体mRNA在卵泡中的表达

利用原位杂交和原位ＤＮＡ－３’末端标记的方法研究了胰岛素样生长因子－Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）,ＩＧＦ－Ｉ受体,ＩＧＦ结合蛋白－２,和促性腺激素受体的信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）在不同生长与闭锁阶段的大鼠卵巢卵泡中表达的变化,结果表明：ＩＧＦ－Ｉ主要在正常生长的初级卵泡,窦前卵泡和小窦状卵泡中表达。在各生长与成熟阶段的卵泡中都检测到ＩＧＦ－Ｉ受体ｍＲＮＡ,闭锁卵泡的ＩＧＦ－Ｉ受体表达降低,窦前与窦状的生长和闭锁     

前列腺素及其受体与哺乳动物的生殖

前列腺素（ＰＧ）是一类二十碳脂肪酸的衍生物,作为细胞间信号分子广泛分布于各种组织。ＰＧ受体按结合特异性和不同的生理、药理作用可分为ＥＰ－ＦＰ等型,ＥＰ受体又可分为四种亚型。它们者是与Ｇ蛋白偶联的跨膜蛋白。ＰＧ及其受体在哺乳动物生殖过程中发挥着着急而复杂的调节作用。卵泡产生的ＰＧ是排卵所必需的;ＰＧＦ２α参与黄体退化;各种ＰＧＥ受体胚胎着床过程中特异性表达;ＰＧ在分娩过程中也是必不可少的。     

胰岛素样生长因子研究进展

胰岛素样生长因子（ＩＧＦ）是一类多功能细胞增殖凋控因子。因其化学结构民胰岛素原类似而得名。ＩＧＦ系统由２个多肽类生长因子、２类受体和至少６种结合蛋白组成。本仅不ＩＧＦ系统成员的分子生物学方面的最新进展及其主要生物学功能作一综述。     

高表达钙调素NRK细胞模型的建立及其对细胞生长失调的影响

钙调素作为Ｃａ＾２＋信号的主要胞内受体，在细胞增殖调节中起着重要作用，实验中运用ＤＮＡ体外重组技术构建了高表达钙调素的真核载体，并将其转染到大鼠正常肾细胞中得到钙调素高表达的稳定细胞株。分析表明，高表达钙调素加速细胞生长，促进细胞从Ｇ１期向Ｓ期及Ｇ２期向Ｍ期的进程，并且使细胞血清依赖性降低，在单层培养中出现接触抑制丧失的岛状生长的现象。基因表达分析表明，原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ随钙调素增高而     

甲状旁腺素、胰岛素样生长因子-Ⅰ对骨特征性标志蛋白的影响

为了阐明甲状旁腺素（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅ,ＰＴＨ）、胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－Ⅰ,ＩＧＦ－Ⅰ）在促成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８增殖的同时对其分化状况的影响,研究了ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ对骨特征性标志蛋白碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ,ＡＬＰ）活性、骨钙素（ｏｓｔｅｏｃａｌ－ｃｉｎ）ｍＲＮＡ表达及骨胶原蛋白（ｃｏｌａｇｅｎ）合成的影响．结果表明,ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ均可抑制ＡＬＰ活性,ＰＴＨ的抑制作用强于ＩＧＦ－Ⅰ,抑制作用具有时间剂量依赖性;ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ均可诱导骨钙素ｍＲＮＡ表达增加;ＰＴＨ能够促进３Ｈ－脯氨酸参入新生小鼠颅骨组织,既ＰＴＨ能够骨胶原蛋白合成增加．这些结果提示,ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ在促成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８增殖的同时也促进其分化,表明在成骨细胞的生发成熟过程中,增殖、分化现象相辅相成,相伴而行．     

溶血磷脂酸的信号转导途径

溶血磷脂酸（ＬＰＡ）是一种细胞间磷脂信使,它可通过Ｇ蛋白偶联受体引起多种生物学效应,如促进血小板聚集,诱导平滑肌收缩,刺激细胞增殖,抑制细胞分化等。最近研究发现Ｇ蛋白介导的ＬＰＡ信号转导途径至少有四种：（１）刺激磷胆酶Ｃ和磷脂酶Ｄ;（２）抑制腺苷酸环化酶;（３）激活Ｒａｓ及其下游的Ｒａｆ／ＭＡＰＫ途径;（４）Ｒｈｏ信号;粘着斑蛋白的酪氨酸磷酸化和肌动蛋白细胞骨架的重组。这些信号转导途径对细胞的增殖     

高表达钙调素NRK细胞模型的建立及其对细胞生长失调的影响

钙调素作为Ｃａ￣（２＋）信号的主要胞内受体,在细胞增殖调节中起着重要作用。实验中运用ＤＮＡ体外重组技术构建了高表达钙调素的真核载体,并将其转染到大鼠正常肾细胞（ＮＲＫ）中得到钙调素高表达的稳定细胞株。分析表明,高表达钙调素加速细胞生长,促进细胞从Ｇ＿１期向Ｓ期及Ｇ＿２期向Ｍ期的进程,并且使细胞血清依赖性降低,在单层培养中出现接触抑制丧失的岛状生长的现象。基因表达分析表明,原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ随钙调素增高而表达加强,这可能是钙调素作用的分子机理之一。     

G蛋白偶联受体激酶—2的N端结构域缺失对其催化功能的影响

为揭示Ｇ蛋白偶联受体激酶（Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｋｉｎａｓｅｓ，ＧＲＫｓ）的Ｎ端结构域在该酶家族磷酸化受体以及催化反应中的作用，对ＧＲＫ２的Ｎ端结构域进行了缺失突变研究。将Ｎ端结构域的ＧＲＫ２（ΔＮ－ＧＲＫ２）与谷城肽转硫酶融合表达。经过亲和纯化后，再用凝血酶酶切得到单独的ΔＮ－ＧＲＫ２蛋白。对磷酸化小肽的活力检测表明，Ｎ端结构域的缺失基本上不影响ＧＲＫ２的激酶催化     

牛生长激素释放因子的融合表达及其产物的化学加工

通过寡核苷酸引导的定位突变,在人工全合成的第２７位为Ｉｌｅ的牛生长激素释放因子［Ｉｌｅ２７］ｂＧＲＦ（１－４４）ＯＨ基因的５＇端ＡＴＧ后插入Ｔｒｐ密码子序列,并分别了构建了Ｐｌ ｐｒｏｍｏｔｅｒ控制下、以β－半乳糖苷酶和ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ结合ＩｇＧ ｄｏｍａｉｎＢ、Ｃ为载体蛋白的融合型基因表达质粒ｐＢＬＥ３１０和ｐＢＬＰＡＥ２Ｄ,在大肠杆菌中得到高效表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,表达产物β－Ｇａｌ     

原癌基因c—met的激活与人类肿瘤发生发展的关系

原癌基因ｃ－ｍｅｔ属于具酪氨酸酶活性的生长因子受体类,编码肝细胞生长因子（ＨＧＦ）受体,是细胞内信息传导的重要组分。ＨＧＦ激活的ｃ－ｍｅｔ受体与细胞内的ＰＬＣγ、Ｇ蛋白,及多种癌基因产物直接作用,是细胞生长、分化的重要调节者。ｃ－ｍｅｔ表达与结构的异常下多种人类肿瘤的发展、发展密切相关。ｃ－ｍｅｔ激活的主要方式是重排、扩增和高表达。不同类型的肿瘤细胞和组织中,ｃ－ｍｅｔ激活的方式不同。对ｃ－ｍｅｔ     

GSTs同工酶基因在乳腺癌中的扩增与基因的表达

采用ＤＮＡ和ＲＮＡ的斑点杂交分析方法,对３２例乳腺癌和相应的癌旁正常组织中ＧＳＴ－π、ＧＳＴ－α和ＧＳＴ－μ基因的ＤＮＡ扩增和ＲＮＡ转录表达情况进行研究,发现ＧＳＴ－π在乳腺癌中存在基因扩增和明显的ｍＲＮＡ表达升高,ＧＳＴ－π基因表达调控主要在转录水平进行的;ＧＳＴ－α和ＧＳＴ－μ在乳腺癌中表达水平较低,但仍可见α和μ类ＧＳＴ同工酶ｍＲＮＡ转录在肿瘤和正常组织中发生了较大的变化。结合乳腺癌中雌激素受体（ＥＲ）表达情况还发现ＧＳＴ－π表达水平与ＥＲ的表达存在负相关性。     

灵芝多糖对人脐血LAK细胞活性的影响

本文研究了灵芝多糖（ＧＬＰ）对人脐血ＬＡＫ（ＣＢ—ＬＡＫ）细胞活性的影响,结果发现,单独ＧＬＰ能刺激人脐血单个核细胞（ＣＢＭＣ）增殖,但不能诱导ＬＡＫ活性,当与５０ｕ／ｍｌｒＩＬ—２伍用时,可增殖ＣＢ—ＬＡＫ细胞诱导活性,不同剂量ＧＬＰ（０．５—１００μｇ／ｍｌ）影响作用不同,以１０μｇ／ｍｌ浓度最好．在不同浓度ｒＩＬ—２（１０—１００ｕ／ｍｌ）诱导ＣＢ—ＬＡＫ细胞过程中加入ＧＬＰ（１０μｇ／ｍｌ）,可明显提高细胞增殖能力,减少ｒＩＬ—２用量。ＧＬＰ亦能促进效应阶段ＣＢ—ＬＡＫ细胞对Ｒａｊｉ肿瘤靶细胞的杀伤作用（Ｐ＜０．００１）。由此看出,ＧＬＰ具有增强ＣＢ—ＬＡＫ细胞活性的作用,是一很好的生物反应调节剂（ＢＲＭ）,有必要进行深入的研究。     

RGDS肽对大鼠主动脉球囊内膜剥脱后血管壁增殖的影响

在大鼠主动脉球囊内膜剥脱术后血管壁细胞过度增殖模型上,用合成的血小板膜纤维蛋白原受体（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎⅡｂ／Ⅲａｃｏｍｐｌｅｘ,ＧＰⅡｂ／Ⅲａ）拮抗剂ＲＧＤＳ（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ,５０μｍｏｌ·ｋｇ－１·ｄ－１）治疗可有效地抑制损伤血管壁的细胞计数增加和内膜增厚以及血管平滑肌细胞增殖,显著降低其血管组织３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｌｅｕ的参入增加程度。实验结果提示ＲＧＤＳ肽作为血管成型术的辅佐剂,对于防治血管再狭窄可能具有潜在的临床应用前景。     

肝刺激因子对肝癌细胞增殖的调节作用

初断乳雄性ＳＤ大鼠的肝匀浆以超速离心和柱层析法分离纯化肝刺激因子（ＨＳＳ）,观察其对肝癌细胞增殖、细胞表皮生长因子（ＥＧＦ）受体表达及受体磷酸化的影响。结果表明,ＨＳＳ具有明显的促肝癌细胞分裂增殖能力,提高细胞周期中Ｓ期细胞所占比例。ＨＳＳ促肝癌细胞增殖作用与其促ＥＧＦ受体表达有关,表现为：（１）ＨＳＳ上调７０ｋＤ ＥＧＦ受体蛋白表达,此作用与ＥＧＦ合用后明显加强,即呈协同效应;（２）ＨＳＳ上调Ｅ