细胞程序死亡与bcl－2基因

细胞程序死亡,是有别于细胞坏死的另一种重要的衰老,死亡形式,它在胚胎发育,肿瘤发生,免疫系统的克隆选择中起重要作用,ｂｃｌ－２是调控ＰＣＤ的基因,但不能抑帛有类型的ＰＣＤ,最近发现,ｂｃｌ－Ｘ基因编码大小不同的两种蛋白,分别具有刺激和抑的ＰＤＣＣＤ的功能,ｂｃｌ－２通过抑制ＰＣＤ可导致细胞癌变,因而ｂｃｌ－２被看作第三类癌基因。     

bcl－2基因家族对细胞凋亡的调节

ｂｃｌ－２基因为一原癌基因,因其在淋巴瘤和白血病中出现重排而得名。近年研究表明,ｂｃｌ－２基因是细胞凋亡的重要抑制基因,它的过度表达是癌症和自身免疫病发生的重要原因。最近又发现了几个与ｂｃｌ－２基因有不同程度同源性的调节基因,也在细胞凋亡中发挥作用。     

bcl—2基因在免疫系统中的作用

bcl-2是在滤泡型淋巴瘤中是先发现的与t(14;18)染色体易位相关的一种癌基因,最近研究表明bcl-2对细胞凋亡具有调控作用,并与T细胞发育,B细胞分化以及淋巴瘤的发生,发展等方面有关。     

bcl—2基因的转录调控

许多不同的外界刺激,包括生长因子和细胞因子等都能诱导ｂｃｌ－２基因的表达,而且很显然,这种爱诱导表达的Ｂｃｌ－２对于细胞的存活是至关重要的。因此,为了对ｂｃｌ－２的转录调控研究有了初步的了解,将从转录水平和转录后水平两个层次上谈谈目前在该领域中的最新进展。     

急性白血病细胞中抗凋亡蛋白bcl－2及其mRNA的表达

采用免疫组织化学与原位杂交方法检测了２５例急性髓系或淋巴系白血病骨髓活检组织及６种白血病细胞株中ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ水平。结果２１例白血病标本中存在ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ的一致性高表达;５种白血病细胞株（ＣＥＭ、Ｒａｊｉ、ＨＬ－６０、Ｕ９３７及Ｋ５６２）均能表达一定水平的ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ（Ｍｏｌｔ－４例外）。提示ｂｃｌ－２基因的功能状态与淋巴造血系统肿瘤密切相关。     

Bcl—2基因与细胞编程死亡

细胞编程死亡在生物体的发育形成及功能维持中起着重要作用。本着重介绍Ｂｃｌ－２基因及其产物对细胞编程死亡的抑制,探讨了Ｂｃｌ－２基因的作用机制,指出Ｂｃｌ－２基因的研究有重大的理论意义及应用前景。     

反义bcl—2在胃癌细胞中的诱导表达及促凋亡作用

为了观察ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ对胃癌细胞ＳＧＣ７９０１的促凋亡作用及ＭＴ－１１启动子的启动诱导活性,用分子克隆方法构建载体,以电泳术,电镜术,流式细胞术,原位杂交,裸鼠肿瘤抑制试验及化学发光分析等方法观察,结果表明,可诱导载体ｐＭＴｂＮ具有良好的诱导启动转录活性,Ｂｃｌ－２蛋白的表达下降使胃癌细胞ＳＧＣ７９０１更易发生凋亡,致瘤性也发生改变。     

核酶对bcl－2mRNA的体外切割

通过微机对ｂｃｌ－２ＲＮＡ二级结构的分析,设计针对ｂｃｌ－２片段５＇ＣＧＣＧＡＣＣＣＧＧＵＣＧＣＣＡＧＧＡＣＣＵＣＧ３＇的“锤头状”（Ｈａｍｍｅｒｈｅａｄ）核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ,ＲＤ）基因,平端连接于ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（－）ＨｉｎｃⅡ位点,克隆后经测序表明序列正确,ｂｃｌ－２和Ｒｉｂｏｚｙｍｅ基因经体外转录,５０℃作用２ｈ,从１６５６－１６５７（Ｃ－Ｇ）位之间切断ｂｃｌ－２ＲＮＡ片段．     

Bcl——2基因表达对TNF及OA诱发的细胞编程死亡的不同效应

用ＴＮＦ和ＯＡ（Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ）诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞死亡,并证明细胞死亡为编程死亡（ＰｒｏｇｒｍｍｅｄＣｅｌｌＤｅａｔｈ,简称ＰＣＤ）。将编码Ｂｃｌ－２全长蛋白的ｃＤＮＡ植入ＰＪＸ４１ｎｅｏ载体中,使其表达由ＨＣＭＶ病毒起动子控制。形成的顺义（ｐＢｃｌ－２－Ｓ）及反义（ｐＢｃｌ－２－ＡＳ）表达质粒经转染导入ＳＫ细胞中获得稳定转染子。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹表明顺义转染子表达大量的２６ｋｄＢｃｌ－２蛋白,而反义转染子则不表达。增强表达的Ｂｃｌ－２蛋白能抑制由ＴＮＦ引发的ＰＣＤ,但不影响ＯＡ引发的ＰＣＤ,从而证明了Ｂｃｌ－２基因产物抗细胞死亡效应的特异性。     

烟草叶片愈伤组织形成过程中的细胞程序性死亡

以烟草叶片在MS培养基上诱导的10个不同时期的愈伤组织为材料,通过荧光染色显微观察到细胞核在形态上发生了缩缢变形,DNA Ladder检测也出现了标志细胞程序性死亡特征的DNA片断,表明了愈伤组织形成过程中发生了细胞程序性死亡（programmed cell death, PCD）,而在诱导的第六个时期（13 d）DNA的脱尾现象最为明显,表明这一时期是PCD发生较为活跃的时期。利用RT-PCR法在诱导的前九个时期,即诱导的第3、5、7、9、11、13、15、17、19 d的叶片的愈伤组织中均扩增出了细胞程序性死亡相关Beclin1基因的cDNA片段(678 bp),Northen杂交结果显示,在诱导的第13 d,类Beclin1基因表达较强。通过酶联免疫法测定诱导前14 d叶片中内源激素ABA的含量变化,在诱导的第六时期ABA含量相对达到了峰值,结果表明：在烟草叶片愈伤组织诱导过程中伴随PCD的发生,在此过程中内源激素ABA与Beclin1基因起到了调节作用。     

植物程序性细胞死亡检测技术

程序性细胞死亡(PCD)是细胞死亡的方式之一,在植物发育及逆境响应等方面起着重要作用。主要介绍检测植物PCD的细胞学、生物化学、分子生物学及生理学方法,以及流式细胞仪在植物PCD检测中的应用。 Abstract:Programmed cell death (PCD) is an active way for plant cells marching to death,which plays an important role in plant development and stress responses.Cytological,biochemical,molecular and physiological methods for measuring plant PCD were reviewed.Application of flow cytometer to plant PCD research was also covered.     

Overexpression of the OsPDCD5 Gene Induces Programmed Cell Death in Rice

The primary aim of the present study was to investigate the overexpression of the rice （Oryza sativa L.） programmed cell death 5 （OsPDCD5） gene in rice plant. Constitutive expression of OsPDCD5 from the cauliflower mosaic virus （CaMV） 35S promoter induced programmed cell death （PCD） in transgenic rice. Programmed cell death was accompanied by typical features, including inhibition of developmental growth, a reduction of fresh weight, degradation of total protein content, and fragmentation of genomic DNA. These results suggest that OsPDCD5 plays an essential role in the regulation of PCD in rice plants.     

植物发育过程中的细胞程序性死亡

细胞程序性死亡(PCD)是植物发育过程中必不可少的一部分,近年来对植物发育过程中的细胞程序性死亡机制的研究已经广泛开展。植物发育过程中的PCD对植物自身形态建成和组织分化有重要意义。一般认为动、植物的PCD有很大的相似性,但植物发育过程也有着独特的PCD机制,例如依靠有裂解功能的液泡来参与PCD。通过比较植物和其他生物发育过程中的PCD,可对植物发育过程中PCD的特征有着更深入的了解。说明植物发育过程中PCD的研究将在理论和生产上有重大意义。     

胱冬肽酶非依赖性的细胞程序性死亡

在多细胞有机体的组织内稳态维持和正常发育过程中,细胞程序性死亡发挥着重要的作用。细胞程序性死亡有多种形式(如细胞凋亡、类细胞凋亡和类坏死等),其中了解较清楚的是细胞凋亡。一直以来,胱冬肽酶(caspase)被认为是细胞凋亡发生中关键的一种蛋白酶。但是最近的研究表明,包括细胞凋亡在内的一些细胞程序性死亡可以以一种不依赖胱冬肽酶的方式发生。细胞程序性死亡与胱冬肽酶之间存在非依赖性关系。     

果蝇程序化死亡基因5(PDCD5)同源cDNA的克隆和序列分析

 为了解人类白血病细胞凋亡相关新基因 TFAR1 9(PDCD5,programmed cell death5)在不同种属间的序列同源性 ,利用 EST(expression sequence tag)拼接、RT- PCR、DNA序列测定技术及计算机分析技术 ,首次成功地进行了果蝇 PDCD5同源 c DNA编码区基因克隆和序列分析 .发现果蝇与小鼠及果蝇与人 PDCD5在核苷酸水平上分别有 57.5%和 57.1 %的同源性 ,在氨基酸水平上分别有 46.8%和 46.4%的同源性 .功能区分析发现 ,果蝇 PDCD5c DNA编码 1 33个氨基酸 ,计算机预测可能是一种核蛋白 ,含 5个可能的酪蛋白激酶 (casein kinase )磷酸化位点 ,2个可能的 PKC磷酸化位点 ,与人 PDCD5的功能区类似 .因而果蝇 PDCD5是与人 PDCD5同源的新基因 ,可能都与细胞程序化死亡相关 .     

银杏贮粉室发生部位的珠心细胞程序性死亡的形态学观察

银杏（Ginkgo bilobaL)贮粉室的发生涉及位于珠孔端的珠心细胞的程序性死亡（PCD）,本研究观察了贮粉室发生过程中发生PCD的珠心细胞的形态学变化。这些珠心细胞在PCD过程中形态变化显著,细胞组分有序地降解,液泡在此起关键作用。在液泡化过程中,细胞质基质和一些细胞器被液泡所吞噬,此时的细胞器结构完整。当液泡膜破裂,细胞质基质消失之后。细胞器才逐步解体。最终,这些珠心细胞仅具有残留的细胞壁,随着胚珠的生长,细胞壁也被破坏,在整个PCD过程中,内膜系统发生明显改变;细胞质膜出泡,产生多泡体;形成多环膜结构;出现由膜包围的小体,其中含有细胞质基质和一些细胞器;液泡膜破裂;细胞器解体;细胞中出现大量的小膜泡。珠孔端的珠心表皮开裂形成贮粉室的开口有两种方式：一种为专一细胞的自溶,而另一种是在两个邻接细胞的中胶层处分离,没有发生细胞的自溶破裂。贮粉室开口位置的特定表皮细胞在开裂发生前就死亡,从而提前标示出表皮开裂的发生位置。这些细胞形态的变化反映出银杏珠心细胞的死亡是受发育调控的PCD过程。     

植物细胞程序死亡的机理及其与发育的关系

细胞程序死亡（ＰＣＤ）是在植物体发育过程中普遍存在的,在发育的特定阶段发生的自然的细胞死亡过程,这一死亡过程是由某些特定基因编码的“死亡程序”控制的。ＰＣＤ的细胞分化的最后阶段。细胞分化的临界期就牌死亡程序执行中的某个阶段。ＰＣＤ包含启动期和清除期三个阶段,其间ＣＡＳＰＡＳＥ家族起着重要作用。ＰＣＤ在细胞和组织的平衡、特化,以及组织分化、器官建成和对病原体的反应等植物发育过程中起着重要作用。ＰＣＤ     

GPx对活性氧诱发细胞程序性死亡的影响

谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）是细胞内清除活性氧的主要抗氧化酶之一.以稳定表达GPx的CHO细胞系为模型,研究GPx对百草枯（paraquat）和叔丁基脂氢过氧化物（tbOOH）细胞毒性的影响,发现paraquat和tbOOH都能够诱导CHO细胞产生典型的细胞程序性死亡的形态学改变和特征性的DNA“梯子状”断裂,而稳定表达GPx的细胞系能明显抵抗tbOOH诱发的细胞程序性死亡,但不能抵抗paraquat诱发的细胞程序性死亡.该结果揭示,GPx能选择性抑制活性氧诱发的细胞凋亡.