黑斑蛙(Rana nigromaculata)离体视网膜的制备及视紫红光敏度的测定

设计了一个为测定离体视网膜通透光谱的装置和灌流盒,用ERG—b波为指标,探索了黑斑蛙(R·nigromaculata)灌流视网膜的成活条件(灌流速度、pH以及通氧与否等)。在20—25℃,网膜可稳定存活5—7h以上。用 Baumann的分步漂白法测定了在位视紫红的光敏度,其值为(15.68±2.34)×10~(-17)cm~2。对这结果和其他工作者结果的差别作了简略的讨论。     

壬基酚对雄性黑斑蛙生殖毒性的研究

通过研究壬基酚对雄性黑斑蛙(Rana nigromaculata)成体的精子和精巢的影响,探讨壬基酚对黑斑蛙的生殖毒性.用不同剂量的壬基酚对雄性黑斑蛙进行处理,对黑斑蛙的精巢系数、精子数、形态结构、畸形率和精巢显微结构等分别进行研究.结果表明,与对照组相比,随着壬基酚浓度的升高,染毒组黑斑蛙的精巢系数下降,精子数减少,精子畸形率明显增大;畸形精子主要表现为其头部出现肥大、弯曲和圆形等现象;精巢显微结构发生变化,表现为生精小管萎缩,生精细胞层次减少,间质区不明显.说明壬基酚对雄性黑斑蛙生殖系统具有毒性效应.     

黑斑蛙乳酸脱氢酶和酯酶同功酶的研究

用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了黑斑蛙肝脏和眼球中的乳酸脱氢酶（LDH）和酯酶（EST）同功酶,乳酸脱氢酶有3个遗传位点,Ldh-2和Ldh-3在肝脏和眼球中均表达,而Ldh-1仅在眼球中表达,这3个位点均为单态。酯酶共有10个点,其中Est-2、Est-4和Est-8为多态位点,Est-1、Est-2和Est-3在肝脏中表达,且活力很高,而在眼球中不表达。     

黑斑蛙早期胚胎发育过程中乳酸脱氨酶同工酶的初步研究

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对河南新乡地区黑班蛙（Rananigromaculata）早期胚胎发育过程中（受精后0－324h）乳酸脱氢酶（LDH）同工酶进行了研究。结果表明：LDH1自始至终存在,且活性一直占绝对优势;LDH5比于心跳期出现,该期以后其活性仅次于LDH1;LDH2于襄胚早期开始出现,其活性一直较弱;LDH3和LDH4均于开口期少量出现,以后前者活性一直极弱,后者则呈现一定的活性。与哺乳类及鱼类资料比较,提示两栖类黑斑蛙LDH同工酶有其独特的表达谱式。     

黑斑蛙过氧化物酶活性测定条件的研究

本文报道了测定黑斑蛙过氧化物酶活力的两套方法.应用细胞组织化学的方法,对黑斑蛙的肝组织过氧化物酶的原位染色,以显示过氧化物酶在细胞中的分布.此外,还探讨了一种新的过氧化物酶活性检测方法,以联苯胺为底物,利用分光光度法测定反应液的吸光度,以吸光度的变化速率来表征过氧化物酶的活力.通过试验确定了该方法适宜的工作条件,包括酶浓度、温度、pH值等,得到酶活性变化的相关数据.     

沼蛙(Rana guentheri)种内遗传分化状况初步研究

本文测定了香港特别行政区内沼蛙(Rana guentheri)多个种群的线粒体16S rRNA基因部分DNA序列,并与广州及越南共4个沼蛙基因序列作对比,研究各地区种群遗传分化状况,研究表明三个地区之间的序列遗传分化为0．4％～1．1％,表明沼蛙mtDNA 16S rRNA基因进化速率比较低,其中香港沼蛙10个个体在mtDNA 16S rRNA基因上没有出现变异,共发现5种单倍型,其中香港与广州种群关系最近,越南河内种群与志玲种群关系最近。     

鲫鱼、黑斑蛙和家兔视网膜结构的比较组织学研究

为探讨鲫鱼Carassius auratus、黑斑蛙Rana nigromaculata和家兔Oryclagus cuniculus domestica视网膜组织结构与其生活环境的适应关系,测量了3种动物视网膜各层厚度、3个核层的胞核层数及胞核直径,并对数据进行了统计分析.结果表明:鲫鱼、黑斑蛙和家兔视网膜均由4层细胞...     

黑斑蛙和中华大蟾蜍精子的超显微结构研究

过去,在精子的超显微结构方面的研究虽然已积累了很多资料,但在无尾的两栖类,蛙和蟾蜍方面的研究却不多。施履吉等（1981）结合他们的生化工作,曾用液面铺片法研究了这两种两栖类染色质在超显微结构方面的异同。发现黑斑蛙的精子染色质保留了体细胞染色质的核小体的结构,而在蟾蜍染色质中则无核小体结构,取而代之的则为由精蛋白和DNA组成的纤维状结构。然而在原位的情况下,黑斑蛙（Rana nigromacu-lata）和中华大蟾蜍（Bufo bufo asiaticus）的染色质呈何形态尚需做进一步的研究。     

棘腹蛙(Rana boulengeri Günther)早期胚胎发育与分期的研究

本文研究了湘西地区棘腹蛙（Ｒ．ｂｏｕｌｅｎｇｅｒｉＧ．）的早期胚胎发育与分期．用人工诱导排卵、人工授精的方法获得受精卵,在控制水温为（２３±０．５）℃下发育,棘腹蛙的胚胎发育从人工授精开始到蝌蚪的鳃盖完全闭合需要２６１ｈ;以胚胎形态变化和主要生理特征的出现为基础,该蛙早期胚胎发育可分为２５个时期．棘腹蛙发育过程中的形态特征和其它无尾两栖类相似,但在某些方面也呈现出与适应山地溪流环境有关的一些特点．     

对黑斑蛙(Rana nigromaculata)和中华大蟾蜍(Bufo bufo asiatius)精子染色质的碱性蛋白和超微结构的比较研究

在精子形成过程中,精子细胞的细胞核高度浓缩成结构致密,体积很小的细胞核(精子核)。为了研究这种极度浓缩之染色质的组分和结构,我们用凝胶电泳法分析了黑斑蛙和蟾蜍的经过提纯之精子的染色质碱性蛋白和用电镜铺片法观察这些精子染色质的亚显微结构。我们发现黑斑蛙精子含有五种组蛋白,即H_1、H_3、H_(2B)、H_(2A)和H_4。H_3、H_(2A)、H_(2B)和H_4是核小体的主要组分。用电镜观察黑斑蛙精子染色质的结果说明,黑斑蛙精子染色质含有核小体结构,反之电泳分析结果说明,蟾蜍精子含有4条碱性蛋白带,其中1条带染色很深、宽度很大,迁移率远较组蛋白为大而与鱼精蛋白相似,而另外3条带染色既浅、宽度又狭,其中有1条从其迁移率来看相当于H_(2B)。用电镜观察时,这种蟾蜍精子染色质没有核小体结构。     

大鼠原生殖细胞培养和分化的研究

研究大鼠胚胎原生殖细胞（primordial germ cells,PGCs)的培养及分化,取受精后11-12.5天大鼠PGCs进行原代培养,光、电镜观察PGCs及其分化细胞的微细结构,碱性磷酸酶染色检测细胞的分化程度,结果显然显示大鼠PGCs大而圆,散在分布,或多个聚集成团,胞质中含有椭圆形的线粒体和丰富的核糖体,在鼠胚成纤维细胞饲养层存在的情况下,PGCs保持未分化状态,碱性磷酸酶反应呈强阳性,在缺乏饲养层的条件下PGCs很快分化,形态不规则,有伪足,碱性磷酸酶反应减弱,进一步分化可形成具有细长突起的神经元样细胞,胞质中含有细丝束的表皮细胞,可见节律性跳动的心肌细胞,具有分泌颗粒的分泌细胞及似血管,心脏形状的管腔结构等,由PGCs分化来的细胞碱性磷酸酶反应均呈阴性,结果表明大鼠PGCs能够分化形成三个胚层的衍生物,生殖嵴来源的PGCsp是一种具有发育全能性的胚胎多能干细胞,本研究同时证明鼠胚饲养层能抑制大鼠PGCs的分化。     

革胡子鲇原始生殖细胞的起源、迁移及性腺分化

革胡子鲇又称埃及胡子鲇,是一种多次产卵类型的硬骨鱼。作者用组织学、组织化学、电子显微镜等方法对革胡子鲇的原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)的起源、特征、迁移方式和性腺分化进行了研究。实验结果:PGCs来源于内胚层;PGCs的细胞质中存在着一种与生殖细胞有关的电子致密物--生殖质(Germ plasm);PGCs在迁移过程中有主动迁移的能力;PGCs到达生殖嵴的部位后,与生殖上皮细胞(Epithelisl cells)一起共同形成原始性腺;原始性腺分别逐步向精巢和卵巢分化;生殖质与性腺的分化有密切关系;卵巢的分化比精巢早。       

LOCATION AND ULTRASTRUCTURE OF PRIMORDIAL GERM CELLS (PGCs) IN AMBYSTOMA MEXICANUM

The location and ultrastructure of the primordial germ cells (PGCs) were studied in Ambystoma mexicanum larvae of stages 23 to 47.
PGCs were found in the spaces between the endodermal cell mass and the lateral plate mesoderm at stages 23 to 35. Some of the PGCs at stage 35, and most of them at stages 40 and 42, were located near the Wolffian duct. At stages 46 and 47 all the PGCs were situated in the genital ridges. Cilia, which have hitherto never been reported in PGCs, were occasionally seen in PGCs of Ambystoma from stage 23 till stage 46.
No "germinal plasm" was found in the PGCs prior to stage 40. Specific structures or "nuage material", corresponding to the germinal granules or their derivatives in Xenopus , were first recognized in the vicinity of the nucleus at stage 40. Between stages 40 and 46, the amount of "nuage material" markedly increased. It was finally localized mainly in "intermitochondrial spaces". A possible transfer of material from the nucleus to the cytoplasm or vice versa through nuclear pores was first noticed at stage 40, the material concerned being quite similar in ultrastructure to the "nuage material".     

影响鸡原始生殖细胞分离克隆因素的研究(简报)

具有多向分化潜能的胚胎干细胞有两种来源:一是来自于早期胚胎内细胞团的胚胎干细胞(Em-bryonic Stem Cells,ESCs),另一种是来自于胚胎生殖腺原始生殖细胞(Primordial Germ Cells,PGCs)的胚胎生殖细胞(Embryonic Germ Cells,EGCs)。     

不同时期鸡胚原始生殖细胞分离的研究

采用Ficoll密度梯度离心,酶解离两种方法在鸡胚孵化的第14期、19期、28期,分离、培养鸡胚中的原始生殖细胞(PGCs)。探索PGCs分离、培养的适宜时期及方法,以期获得较多数量,较高活力的PGCs作介导生产转基因鸡。结果表明：1．提取、分离PGCs的最佳时期依次为19期、28期。2．两种分离方法均能分离到一定数量的PGCs细胞。但在19期和28期,酶解离法分离到的PGCs的相对数量较多,存活时间较长,是一种较适宜的分离方法。     

PRODUCTION OF GERMLINE CHIMERIC CHICKENS BY TRANSFER OF CULTURED PRIMORDIAL GERM CELLS

Primordial germ cells (PGCs) from stage 27 (5.5-day-old) Korean native ogol chicken embryonic germinal ridges were cultured in vitro for 5 days. As in in vivo culture, these cultured PGCs were expected to have already passed beyond the migration stage. Approximately 200 of these PGCs were transferred into 2.5-day-old white leghorn embryonic blood stream, and then the recipient embryos were incubated until hatching. The rate of hatching was 58.8% in the manipulated eggs. Six out of 60 recipients were identified as germline chimeric chickens by their feather colour. The frequency of germline transmission of donor PGCs was 1.3–3.1% regardless of sex. The stage 27 PGCs will be very useful for collecting large numbers of PGCs, handling of exogenous DNA transfection during culture, and for the production of desired transgenic chickens.     

OBSERVATIONS OF PRIMORDIAL GERM CELLS IN THE TURTLE EMBRYO (CARETTA CARETTA): LIGHT AND ELECTRON MICROSCOPIC STUDIES

Primordial germ cells (PGCs) in the turtle embryo ( Caretta caretta ) were observed with light and transmission electron microscopes. Identification of the PGCs for light microscopy was made by the periodic acid-Schiff (PAS) technique. PGCs were first found in the yolk-sac endoderm through the 5th to 6th day of development. PGCs freed from the endoderm then migrated to the root area of the dorsal mesentery and the coelomic angle between the 7th and the 11th day of development, and finally settled down in the gonadal anlage by the 14th day. Turtle PGCs were characterized by a large size (16 μm in diameter) and large nuclei with distinct nucleoli, and by the presence of large numbers of lipid droplets, yolk platelets and glycogen particles in the cytoplasm. Cell organelles were well-developed in PGCs at later stages. Amoeboid features of the PGCs were observed in the mesenchyme, indicating active locomotion. PGCs were usually surrounded or encircled by neighboring somatic cells. No intravascular PGCs were detected at any stage of development examined.     

抑制Ligase4或Xrcc6活性增强斑马鱼原始生殖细胞中DNA同源重组的效率

利用斑马鱼作为体内模型, 研究旨在提高斑马鱼原始生殖细胞(Primordial germ cells, PGCs)中同源重组(Homologous recombination, HR)的效率。首先, 将UAS:mRFP-nos1载体显微注射到Tg (kop:KalTA4) 转基因胚胎中标记转基因PGCs, 结果表明筛选PGCs特异表达mRFP的胚胎能够相对提高转基因的生殖系传递效率。随后建立了PGCs中HR效率的评估体系, 并且证明抑制DNA ligase IV(Lig4)和Xrcc6(曾用名Ku70)的活性不但在全胚胎水平, 而且在PGCs水平都能够显著提高HR的效率。研究表明Tg (kop:KalTA4) 转基因品系是开展HR介导的基因打靶的一个有效平台。       

小鼠原生殖细胞建系过程及其分化特性的研究

以小鼠8.5dpc、10.5dpc、12.5dpc胚胎为材料,分离其中包含PGC的胚胎组织,使其生长于饲养层细胞上,在生长因子LIF、SCF和bFGF的共同作用下存活增殖,形成PGC克隆,经过几次分散转移至新的饲养层细胞,产生稳定增殖的EG干细胞克隆,共建成5株EG细胞系,AKP染色以及oct-4基因表达产物的免疫荧光检测均显示阳性。EG1、EG2、EG3、EG4、EG5,分别来自8.5、10.5dpc的胚胎,没有得到长期培养的12.5dpc的EG细胞系。EG细胞系在有饲养层细胞或添加LIF的环境中可稳定传代,保持不分化状态,至少15代内正常核型细胞所占比例80%以上。去除抑制分化因素的前提下,悬浮培养的EG细胞形成胚体,分化出类似胚胎内胚层和外胚层的细胞结构;贴壁生长的胚体能产生不同类型的分化细胞,包括上皮细胞、成纤维细胞、神经细胞等。EG细胞在裸鼠体内形成畸胎瘤。以上结果证实我们建立的EG细胞系具发育多能性,为研究早期胚胎和生殖细胞生长分化提供了模型。