人血浆 α_2-巨球蛋白的分离纯化

α_2-巨球蛋白(α_2-Macroglobulin,简称α_2M)是一种高分子量的糖蛋白,含糖量为8-11％,分子量为725,000,等电点为5.5,已知每克分子α_2M含有4.8克原子锌,占血浆总锌含量的20％.α_2M是血浆中重要的蛋白酶抑制剂.含量约为2毫克/毫升,能抑制四种内肽酶的活性.α_2M使蛋白酶失活的机理尚未彻底弄清,文献报道α_2M与胰蛋白酶、凝血酶、纤溶酶及激肽释放酶反应时,可从α_2M分子上游离出一段多肽(MW:85000),这一裂解作用使α_2M分子     

甲_2巨球蛋白的丙烯酰胺梯度SDS凝胶板电泳分析

甲_2巨球蛋白(简称α_2M)是一种分子量为725000的大分子糖蛋白。天然有活性的和失活的α_2M经SDS热引导和巯基乙醇还原分解的亚基分子量有明显差别。不同来源的α_2M亚基分子量也略有差异。本实验用3-25％丙烯酰胺梯度SDS凝胶板电泳来鉴定纯化的猪α_2M、大鼠α_2M和人α_2M制剂。结果指出猪α_2M和人α_2M均有185000、125000和62000三条亚带,代表有活性的天然α_2M,大鼠α_2M电泳图谱指出,130000分子量亚带代表天然α_2M,29000和90000分子量二带为失活部分。人α_2m制剂图谱表明除了混有两种球蛋白外,只有一条62000分子量亚带代表少量有活性的α_2M。     

大鼠肝癌中α_2-巨球蛋白等几种分泌性蛋白基因表达的变化

用Northern blot方法对二乙基亚硝胺所诱发的大鼠肝癌中内源性蛋白酶抑制因子α_2-巨球蛋白(α_2-M)、非特异性免疫抑制剂α_1-酸性糖蛋白(α_1-AGP)及雄性激素正调控的α-2u球蛋白(α-2u)三种分泌性蛋白基因表达情况进行了分析。结果表明在大部分(14/16)肝癌样品中α_2-M RNA水平显著降低;而α_1-AGP RNA水平显著高于正常对照水平;α-2u RNA水平明显下降,但在某些雄性大鼠肝癌样品中该基因却有一定程度的表达。这些结果说明,一些肿瘤宿主血浆中α_2-M水平的显著下降及α_1-AGP水平的明显升高分别是由于基因表达活性的下降及升高所致。α-2u基因表达的异常提示,在癌变过程中机体的内分泌功能发生了某些变化。     

三角帆蚌alpha-2巨球蛋白活性测定及不同组织的表达

alpha-2巨球蛋白(alpha-2 Macroglobulin,α2M)是一种蛋白酶结合蛋白,是重要的天然免疫因子。利用α2M的作用原理,用三角帆蚌血浆保护胰蛋白酶,后用大豆蛋白酶抑制剂抑制未被保护的胰蛋白酶。利用Na-benzoyl-DL-arg-nine-p-nitroanilide(BAPNA)作为酶底物检测被保护的蛋白酶活性的方法,首次证明了三角帆蚌体内α2M的存在。在此基础上,克隆了α2M基因保守区受体结合区片段,进一步证明了α2M在三角帆蚌体内的存在。同时,还进行了α2M不同组织的表达检测,结果显示,α2M基因在血细胞中有表达,而在外套膜、闭壳肌、肠和性腺中没有表达。     

一种具有抑制糜蛋白酶活性的血清DNA结合蛋白质的纯化和理化特性

 本文采用离子交换层析,DNA亲和层析和硫酸铵盐析三步从人血清中分离纯化了一种肿瘤相关DNA结合蛋白质(64DP)。本方法较简便,产率提高。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳鉴定纯度符合要求。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量为64,000。等电聚焦电泳测得等电点在4.2左右。醋酸纤维膜电泳和转移电泳表明其为一种α_1球蛋白。过碘酸西夫氏糖蛋白染色呈阳性反应。氨基酸分析和酶抑制试验证实64DP与α_1抗縻蛋白酶很相似。     

草鱼α2巨球蛋白的分离纯化与若干特性

α2 M是动物体内重要的血浆蛋白之一,195 5年Schultze从人的血清中首次分离纯化出α2 M这一位于电泳α区的蛋白质(郑远旗等,1994 )。α2 M作为一种非特异性的蛋白酶抑制剂在免疫、疾病发生和发展中的作用日益受到重视,尤其在鱼类免疫系统中α2 M起着非常重要的作用。但鱼类α2     

高纯度α_1-抗胰蛋白酶的提取、抗血清的制备及其火箭免疫电泳测定

α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)是肝细胞分泌的一种糖蛋白,是血浆蛋白电泳α_1球蛋白的主要成份。它能抑制多种蛋白酶,如胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、纤维蛋白溶酶等的活性。α_1-AT在血浆中含量较高,在组织中广泛存在,对维持机体正常生理功能,防止组织过度破坏起重要作用。本文报道经我们改良的高纯度α_1-AT提取方法、抗血清的制备及其火箭免疫电泳定量测量方法。一、材料与方法 1、α_1-AT、蛋白质测定方法α_1-AT按Eriksson法测定胰蛋白酶抑制容量(TIC)。结晶胰蛋白酶为Sigma产品,胰蛋白酶的特异性     

人血浆α_2-巨球蛋白的研究概况

α_2-巨球蛋白(α_2-Macroglobulin,简称α_2-M)是人体中重要的血浆蛋白之一,能与多种蛋白水解酶反应,是血浆中含量最多的蛋白酶抑制剂。α_2-M通过对蛋白酶水解活性的调节而参与凝血、纤溶、激肽释放、炎症及免疫等一系列生理及病理过程。因此,α_2-M的研究对某些疾病发病机制的了解具有重要的意义。 1953年,Jacobsson首先报道了α_2-M。此后对其组成、结构、理化性质及生物活性等方面的研究都有较详细的报道和论述。国内这     

人血浆α_2巨球蛋白的研究概况

α_2-巨球蛋白(α_2-Macroglobulin,简称α_2-M)是人体中重要的血浆蛋白之一,能与多种蛋白水解酶反应,是血浆中含量最多的蛋白酶抑制剂。α_2-M通过对蛋白酶水解活性的调节而参与凝血、纤溶、激肽释放、炎症及免疫等一系列生理及病理过程。因此,α_2-M的研究对某些疾病发病机制的了解具有重要的意义. 1953年,Jacobsson首先报道了α_2-M.此后对其组成、结构、理化性质及生物活性等方面的研究都有较详细的报道和论述.国内这     

褶纹冠蚌alpha2巨球蛋白基因的分子克隆与序列分析

alpha2 巨球蛋白(α2M)是一类广谱的蛋白酶抑制因子, 存在于许多无脊椎或脊椎动物的血浆中1。它不仅可以与机体内过量的蛋白酶相结合产生α2M-蛋白酶复合物,清除血液中流动的蛋白酶2, 还能与细菌内毒素脂多糖,丝裂原ConA、PHA 结合, 通过调节释放其活性; 同时还参与抗原递呈3。因此, α2M 在动物的先天性免疫中起着极其重要的作用4。       

甲2巨球蛋白对辐照细胞的保护效应

用~3H—TdR掺入办法观察电离辐射对培养的人成纤维细胞的影响。在0—500cGy钻-60γ射线照射剂量范围内,细胞~3H-TdR掺入计数与照射剂量呈线性关系。y=33745.4e~(-0.0036×)。低浓度α_2M对细胞~3H-TdR掺入没有影响,高浓度α_2M能抑制细胞~3H-TdR掺入。4×10~5细胞经钻-60γ射线500cGy照射后加α_2M制剂,细胞~3H-TdR掺入计数与不照射对照组相比有明显升高(P<0.05)。在照射前加α_2M制剂与对照组相比无明显差别。     

甲2巨球蛋白制剂对正常人外周血淋巴细胞周期的影响

采用外周血淋巴细胞姐妹染色单体差别法(SCE)检测技术,研究甲_2巨球蛋白制剂α_2M对人外周血淋巴细胞周期的影响,在人外周血淋巴细胞培养中加入α_2M制剂浓度在≤0.5mg/ml培养液时,第一次细胞周期(M_1)、第二次细胞周期(M_2)、第三次细胞周期(M_3)、细胞增殖速度指数(PRI)改变不大。在加入的α_2M制剂浓度(?)1.0 mg/ml培养液时,M_1百分数增加(r=0.977,P<0.001)、M_2百分数也随α_2M浓度递增而增高(r=0.956,P<0.001)而M_3百分数则随α_2M浓度递增而减少(r=-0.979,P<0.001)、细胞增殖速度指数则随α_2M浓度递增而减少(r=-0.983,P<0.01),表明在人外周血淋巴细胞离体培养时,当每毫升培养液中α_2M浓度等于或大于1mg时,细胞分裂周期延缓。讨论了它的意义和可能作用的环节。     

马拉色菌蛋白酶活性测定方法的建立及其应用

为建立检测马拉色菌蛋白酶的方法并检测不同来源菌株的蛋白酶活性 ,使用全脂牛奶平板法、BSA平板法检测 7株标准株 ,3 3株M .furfur、12株M .sympodialis、4株M .obtusa临床分离株和 2 8株M .furfur正常皮肤分离株蛋白酶活性 ,并检测温度、pH值和蛋白酶抑制剂对蛋白酶活性的影响。 7株标准株均检出蛋白酶活性 ,M .furfur临床分离株蛋白酶活性高于正常皮肤分离株 (p <0 .0 1) ,最高蛋白酶活性在 3 2℃、pH5.5时表达 ,EDTA能抑制其蛋白酶活性。全脂牛奶平板法为简便、可靠的测定马拉色菌蛋白酶活性的方法 ,蛋白酶活性与菌株的致病性相关     

猪血浆α1-抗胰蛋白酶的分离纯化

α_1-抗胰蛋白酶(α_1-Antitrypsin,简称α_1-AT)是由肝细胞分泌的一种糖蛋白,是存在于动物血液中的一种重要的蛋白酶抑制剂,它能抑制多种丝氨酸类蛋白水解酶,占血浆胰蛋白酶抑制总活力的90％以上。α_1-AT通过调节蛋白水解酶的活性而参与机体的一系列生理活动,如血液凝固、纤维蛋白溶解、组织激肽释放、细胞融合、大分子装配和免疫反应等过程,对防止组织过度损伤有重要作用。目前国际上对人的α_1-AT研究较多,而对猪α_1-AT的研究甚少,仅见     

α2巨球蛋白的应用研究进展

α2巨球蛋白(α2-macroglobulin,α2M)是血浆中含量丰富的大分子糖蛋白,是一种广谱的蛋白酶抑制剂,主要通过调节内源或外源性蛋白酶广泛参与许多重要的生理病理过程。α2M还通过与细胞因子、生长因子和激素等分子结合调节它们在体内的分布、半衰期和生物学活性。研究发现α2M具有广泛的应用前景:α2M对辐射损伤、脓毒症、阿尔茨海默病等疾病具有很好的保护作用。此外,α2M还可以作为药物传递的载体和疫苗佐剂,并且可以作为许多疾病诊断和预后的生物标志物。本文主要综述α2M在应用方面的新进展。     

α_1抗糜蛋白酶

<正> 血浆中含有几十种蛋白质。其中含量最多的是清蛋白,其次为免疫球蛋白。居于第三位的是一组蛋白酶抑制物,关于它们的生物学意义,有些至今尚未明确。引起人们对这类血浆蛋白质的兴趣始于60年代初。当时有人报道α_1抗胰蛋白酶(α_1—AT)的缺乏与肺气肿的发生有关。该作者用琼脂电泳法检查了六例肺气肿思者的血清,发现在α_1区缺少一种成分,免疫电泳证实它是α_1—AT。直到1970年,西德的N.Heimberger采用了一种特别的生化分析方法,才首次比较系统地分离和鉴定了几种存在干血浆内的蛋白酶抑制物。这个方法把电泳和酶     

慈菇中两种结晶的多功能蛋白酶抑制剂的研究

由于蛋白酶抑制剂在生理、生化、病理、药理上都占有很重要的地位,特别是具有多功能的蛋白酶抑制剂被广泛应用于临床,近年来愈来愈受到各方面的重视。本文报道了从慈菇中提取两种结晶的多功能蛋白酶抑制剂,它们都具有两个活力相等的活性中心,这与其他已知的同类型植物蛋白酶抑制剂不同,有它的特殊性。(1)_慈菇蛋白酶抑制剂A、B,除能抑制胰蛋白酶外,还能抑制胰凝乳蛋白酶及猪颌下腺的舒缓激肽释放酶。用酰胺、酯及蛋白等不同底物分别求出抑制剂A、B对胰蛋白酶的当量抑制比值及对胰凝乳蛋白酶的半抑制比值。两者对胰蛋白酶的抑制常数在10~(-9)～10~(-10)的范围内,抑制剂B对胰蛋白酶较之A有更大的结合力,但抑制剂A对胰凝乳蛋白酶及舒缓激肽释放酶较之B却有更明显的抑制活力。(2)_用葡聚糖凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳分别测定抑制剂A、B的分子量均在17000左右。从抑制剂A、B对胰蛋白酶的当量抑制比值求得分子量为8500。这说明每一抑制剂分子中具有两个活力相等的活性中心。(3)_测定了抑制剂A、B的氨基酸组成,二者除碱性氮基酸及天冬氨酸含量略有差异外其余皆相同,各含有两对二硫键,非极性氨基酸含量较高约占60%左右。由氨基酸组成求得最小分子量约16500。(4)_用二硝基氟苯,二甲基氨基萘磺酰氯及氨呔酶M测定抑制剂A、B的N末端,都证实是天冬氨酸。     

褶纹冠蚌α2M基因的组织分布及原核表达

α2-巨球蛋白(alpha-2 Macrogloblin,α2M)是存在于无脊椎动物和脊椎动物血浆中的一类广谱性蛋白酶抑制因子。本文利用RT-PCR方法分析了α2M基因mRNA在褶纹冠蚌不同组织的表达及在嗜水汽单胞菌刺激后褶纹冠蚌血细胞中的表达变化。结果表明,α2M仅在血细胞中有表达,而在外套膜、闭壳肌、肝胰腺和鳃组织中均无表达。注射嗜水气单胞菌6h、12h、24h后,褶纹冠蚌血细胞中α2M的mRNA表达水平显著升高,表明α2M是褶纹冠蚌基础免疫系统中的重要组成部分。选择褶纹冠蚌α2M基因包含有受体结合区片段的第1369～1589氨基酸设计含有酶切位点的表达引物,构建重组表达质粒,经过IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE分析表达产物。结果表明重组的α2M在大肠杆菌Escherichia coli Rosetta-gami(DE3)中获得了表达,产物为40.81KDa的融合蛋白。     

地龙蛋白对人增生性瘢痕成纤维细胞的作用研究

目的:研究鲜地龙提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)增殖作用,及从其分离纯化的活性蛋白对基质金属蛋白酶(MMP-1、9)表达影响。方法:地龙提取物依次通过DEAE离子柱层析、葡聚糖凝胶柱层析分离纯化,应用HSF细胞模型,以活性为导向得到活性组份。获得样品组份进行部分理化性质实验,及对HSF细胞基质金属蛋白酶(MMP-1、9)表达影响。结果:地龙样品组份明显抑制HSF细胞增殖;样品经化学反应定性为蛋白,SDS-PAGE电泳法测定分子量为38k Da,p H值的平均值为7.82。分离纯化的DB-2样品使基质金属蛋白酶表达量下调,P0.05。结论:地龙样品组份能够显著抑制HSF细胞增殖,具有开发成为治疗瘢痕药物的潜力。     

重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在PichiaPink系统中的表达

目的:比较PichiaPink表达系统和巴斯德毕赤酵母GS115在表达外源蛋白方面的差异,对PichiaPink表达系统的潜在优点进行评价。方法:以重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白(HSA-IFN-α2b)为报告蛋白,构建相关载体,分别转化PichiaPink系统菌株和巴斯德毕赤酵母GS115菌株,诱导HSA-IFN-α2b表达并测定表达水平;通过SDS-PAGE检测HSA-IFN-α2b在PichiaPink系统中的降解程度。结果:PichiaPink系统几乎所有的转化子都可以表达HSA-IFN-α2b,而GS115菌株只有60%的转化子能表达HSA-IFN-α2b;同一种Pink菌株中,整合有高拷贝数表达载体pPink-HC的菌株表达量高于整合有低拷贝数表达载体pPink-LC的菌株;Pink蛋白酶缺陷菌株在复杂培养基(YPD,BMMY)中HSA-IFN-α2b基本没有降解,而在合成培养基(BSM)中降解现象明显。结论:PichiaPink表达系统产生的转化子较GS115菌株产生的转化子易于筛选;PichiaPink系统蛋白酶缺陷菌株可明显减少外源蛋白降解。这些结果为利用PichiaPink表达系统高水平和大规模制备外源蛋白提供了实验依据。