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从单纯疱疹病毒I型HSV-1基因组中分离出其包装信号序列,与含HSV-1复制起点及IE-68基因启动子的DNA序列、β半乳糖苷酶基因和大肠杆菌质粒骨架,构建了一种HSV-1扩增子质粒载体pHSL,其中LacZ基因置于IE-68基因启动子控制下。将此质粒转染已感染了HSV-1温度敏感株tsK株的Vero细胞,pHSL可在HSV-1tsK的辅助下包装成假病毒颗粒,这样就可得到同时含有假病毒和HSV-1 相似文献
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单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子质粒载体的构建及LacZ基因的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
从单纯疱疹病毒Ⅰ型HSV-1基因组中分离出其包装信号序列,与含HSV-1复制起点及IE-68基因启动子的DNA序列、β半乳糖苷酶基因和大肠杆菌质粒骨架,构建了一种HSV-1扩增子质粒载体pHSL,其中LacZ基因置于IE-68基因启动子控制下。将此质粒转染已感染了HSV-1温度敏感株tsK株的Vero细胞,pHSL可在HSV-1tsK的辅助下包装成假病毒颗粒,这样就可得到同时含有假病毒和HSV-1tsK的混合毒株dvHSL。将此混合毒株感染传代细胞和神经细胞,可在其中表达LacZ基因,而在生理温度(37℃)下,混合毒株的复制受到抑制。提示这种缺陷型疱疹病毒载体有用于向神经系统基因转移的可能性。 相似文献
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牛疱疹病毒I型前早期基因BICPO的表达对牛免疫缺陷病毒LTR的反式激活… 总被引:2,自引:0,他引:2
由含有BHV-1(Bovine Herpes Virus-1)前早期基因的基因组片段亚克隆ICPO(BHV-1Infected Cell Protein O)的DNA序列至表达载体pSVD3,构建质粒pSV2.9。将该质粒与PBLTR-Luc共转染小牛肺细胞,检测转染细胞裂解物的荧光素酶活性,BICPO的表达产物可以显著地激活BIV LTR启动子控制下的荧光素酶基因的表达。根据PSV2.9与含有B 相似文献
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伪狂犬病毒闽A株基因文库的构建及物理图谱分析 总被引:6,自引:0,他引:6
本文报道以质粒pBR322作载体,用鸟枪法克隆出了PRV闽A株除BamHI-1,2外的所有酶切片段,构建了PRV闽A株基因文库,并以克隆出的BamHI片段用光生物素标记作探针,应用分子杂交法确定了PRV闽A株绝大部分限制性内切酶位点的位置。 相似文献
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由含有BHBV-1(BovineHerpesVirus-1)前早期基因的基因组片段亚克隆BICPO(BHV-1InfectedCellProteinO)的DNA序列至表达载体pSVK3,构建质粒pSV2.9。将该质粒与pBLTR-Luc共转染小牛肺细胞,检测转染细胞裂解物的荧光素酶活性,BICPO的表达产物可以显著地激活BIVLTR启动子控制下的荧光素酶基因的表达。根据pSV2.9与含有BIVLTR不同区段缺失的质粒pD-319-Luc、pD-115-Luc、pD-52-Luc共转染小牛肺细胞的实验结果,推测BIVLTR-319位上游区的DNA序列影响BICPO基因产物对BIVLTR表达的激活作用。 相似文献
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香蕉束顶病毒基因Ⅰ的克隆及序列分析 总被引:5,自引:0,他引:5
以中国漳州地区感染BBTV的香蕉组织总DNA为模板,根据我国台湾地区BBTV分离物基因组Ⅰ序列,设计并合成了一对引物,通过PCR扩增出约500bp的片段。利用pBluescriptⅡSK T-载体获得此片段的克隆,经测序表明为BBTV组分Ⅰ的部分序列。由已测知的BBTV基因组Ⅰ序列设计一对相邻引物,以我国漳州的感染BBTV香蕉组织总DNA为模板,通过PCR坟增出约1.1kb的片段。利用pBlues 相似文献
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根据已发表的序列,分别在鸡贫血病毒(CAV)环形基因组DNA(全长2.3kb)的EcoRI位点和BamHI位点的两侧选择适当序列合成两对引物,用PCR技术,从斑点杂交检测到病毒核酸的CAV感染的MDCCRP1细胞基因组DNA中,分别扩增出包含EcoRI和BamHI分割开的病毒基因组两部分(1.5kb和0.8kb)约1.5kb和约1.25kb的两个片段。再将其中相应序列拼接克隆进pUC18载体,获得包含CAV全基因组序列DNA片段的克隆质粒pCAV2.4。酶切分析表明,该质粒具有预期的BamHI位点、PstI位点、HindⅢ位点,而预期的EcoRI位点消失。重组质粒插入DNA片段的两端序列分析表明,质粒pCAV2.4是包含CAV全基因组序列的重组质粒,插入DNA片段序列中的EcoRI位点序列发生了一个碱基突变。 相似文献
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用PCR扩增和克隆马立克氏病病毒糖蛋白D基因 总被引:2,自引:0,他引:2
用PCR技术,从GA株马立克氏病病毒(MDV)感染的成纤维细胞(GEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因片段的约1300bp编码序列,将该pcR扩增的产物于EcoRI和Kpnl位点克隆到pUC18质粒载体中,在以digoxigenin(dig)标记的gDPCR产物作为探针,进行原位杂交初步筛选到阳性重组质粒克隆,再根据酶切分析筛选到含MDVgD基因的重组质粒p18MgD。将p18MgD质粒DNA用dig标记后,在Southernblot中,该探针能识别MDV基因组DNA的BamHI-A克隆中的A片段DNA。酶切位点分析表明,该gD克隆也和已发表的MDV的RBIB株gD一样,不含有EcoRⅠ、HindⅢ、PstⅠ、SmaⅠ、pvuⅡ等酶切位点。证明该重组质粒是MDVgD克隆。 相似文献
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将含脊髓灰质炎病毒(PV)RNA聚合酶的不同长度基因片段克隆到载体pSG5质粒上,分别构建了4个表达RNA聚合酶的质粒。体外转录实验证明,pSG5-POL1.99和pSG5-POL2.03质粒转染细胞的提取物促进了特异的RNA转录,表明两质闰可表达RNA聚合酶。将PV的5’NCR序列插在载体pGREEN LANTERN-1的CMV启动子下游,构建了pGREEN LANTERN-1-5’NCR质粒; 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒中国流行株免疫原S1基因的分子克隆、序列分析及其DNA免疫的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
对来源于我国华东地区的鸡传染性支气管炎病毒流行株QD免疫原S1基因cDNA进行了克隆、序列分析和DNA免疫的初步研究。RTPCR扩增QD毒株的S1基因,将其5′和3′端分别进行分子修饰后插入克隆载体pUC18的BamHⅠ/HindⅢ位点,在大肠杆菌中实现了目的基因的克隆;利用英国IBV毒株S1全基因核酸探针与QD毒株S1基因的重组克隆质粒分子杂交后,采用HaeⅢ,PvuⅡ和XbaⅠ等限制酶对此流行毒株S1基因cDNA进行了酶切分析;在测定QD毒株S1基因5′端高变区核苷酸序列并以此与IBVM41,H120,6/82及Beaud等参考毒株序列对比分析的基础上,构建了QD株S1基因DNA免疫表达质粒,肌肉注射免疫小鼠后,鸡胚病毒中和试验的结果表明,IBVS1基因DNA免疫表达质粒能诱导小鼠产生病毒特异的中和抗体,具有良好的免疫原性,初步显示基因疫苗在鸡传染性支气管炎防治上应用前景。 相似文献
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本文从含ArgRS306KR基因args306KR的pUC18重组质粒的大肠杆菌TG1转化子中经DEAE-Sephacel和Blue-Sepharose两步柱层析,得到电泳一条带的ArgRS306KR。纯酶的比活为2790单位/毫克。该酶氨酰化和ATP~PPi交换活力的最适pH分别为pH8.3和pH7.5。氨酰化活力对ATP、Arg和tRNA的Km分别为2.6mmol/L、14.0μmol/L和5.0μmol/L:Vmax为7630单位/毫克;koat为9S-1。ATP~PPi交换活力对ATP和Arg的Km分别为8.3mmol/L和99μmol/L;Vmax为16320单位/毫克;kcat为18S-1。 相似文献
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本文报道以家蚕核型多角体病毒为载体,在家蚕体内高效表达天花粉蛋白基因的结果。天花粉蛋白基因是用PCR技术从栝楼基因组中分离的,该基因被插入到家蚕核型多角体病毒转移载体质粒pBm-1的多角体蛋白基因启动子下游,构建成重组质粒pBmTCS。将重组质粒DNA和野生型BmNPVDNA共转染家蚕培养细胞,通过在家蚕培养细胞中进行同源重组和筛选,获得了无多角体的重组病毒BmTCS。采用PCR技术对重组病毒进行了鉴定,证实重组病毒合天花粉蛋白基因。重组病毒对家蚕的感染性不及野生病毒,提示表达产物对病毒的增殖有抑制作用。对重组病毒感染的家蚕血淋巴进行了SDS-PAGE和免疫印迹分析,结果显示在蚕体血淋巴中的表达产物天花粉蛋白占总蛋白的5%。本实验为利用基因工程方法大量生产天花粉蛋白提供了又一条新的途径。 相似文献
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以质粒pT7-7和pBR322为载体,构建GlyA基因的重组质粒,继而得到12株基因工程菌(CWS系列)。其中,高表达菌株CWS-7的SHMT酶表达量占全菌可溶蛋白的47%,是其宿主菌的56倍;改善培养条件后,CWS-7中SHMT酶活力可达宿主菌的106倍 相似文献
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伪狂犬病病毒Fa株胸苷激酶基因缺失株的构建 总被引:10,自引:0,他引:10
采用外切除缺失法对已克隆于pBR322中包含伪狂犬病病毒(PRV)胸苷激酶(TK)基因的BamHI-11片段(pPB11)进行改建,经筛选获得4株TK基因缺失重组质粒(pDTK3-1.pDTK3-6,pdTK3-8和pDTK5-6)对其进行酶切鉴定和Southern转印杂交,结果其11片段迁移率均发生改变,缺失的碱基数分别约1250,1100,1250和200bp,用PRVFa-DNA或PRVFa 相似文献
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本文报道以人Epstein-Barr病毒的潜代膜蛋白基因BNLF-1作为目标基因,插入至逆转录病毒载体pZipNeoSV(x)的克隆位点上,由此获得重组逆转录病毒载体pZipNeoSV(x)-LMP及其反义载体pZipNeoSV(x)-anti-LMP,通过质粒DNA的电转染和G418培养基筛选,然后对10个抗性克隆进行基因整合分析、获得6个含MLV-LTR/BVLF-1融合基因的阳性克隆,采用N 相似文献
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采用基因定位突变的方法,在体外把来自pBR322 的四环素抗性(Tcr) 基因片段插入由pST1142 质粒所携带的阴沟肠杆菌nifL基因3’端的Sma Ⅰ位点,再经细胞体内同源基因片段的重组交换,选择获得了在染色体上nifL突变的阴沟肠杆菌E12 和E13 ,两者Tcr 基因插入nifL的转录方向相反。经分析显示,E13( nifL- ) 由于Tcr 基因插入后,在nifA上游产生具有启动子功能的核苷酸序列(TTTCATA) ,激活nifA 的表达。当E13 和E12 被引入多拷贝组成型nifA 质粒pBF101后,在有氨条件下nif 基因去阻遏表达,呈高的固氮酶活力,与野生型E26(pBF101) 比较,其比活力提高近1 倍 相似文献