异种动物免疫RNA对小鼠脾淋巴细胞cAMP和cGMP的影响

从免疫宿主的淋巴样细胞中提取的免疫核糖核酸(iRNA),能在体内外传递特异的免疫反应,使正常淋巴细胞转变为对特异抗原起反应的效应细胞。但是iRNA的作用机制目前还不十分清楚。经iRNA致敏后淋巴细胞内cAMP和cGMP水平的变化,目前也尚未见报道。为探讨iRNA的作用机制,本实验用异种动物iRNA使小鼠脾淋巴细胞致敏,然后测定致敏淋巴细胞内cAMP和cGMP水平的变     

钙离子作为细胞内化学信使的作用机制

在过去的十几年中,对于细胞内被称为“第二信使”的环腺苷酸(cAMP)和环鸟苷酸(cGMP)进行了广泛深入的研究,提出了第二信使——蛋白激酶系统的细胞控制论假设,在分子水平上阐明了一些细胞生物学受控活动.1970年Rassmussen提出了Ca~( )作为细胞内化学信使的假说。十年来的工作证明,Ca~( )与     

外源环化鸟-磷(cGMP)对蒜根尖细胞有丝分裂的生物学效应

1957年,Sutherland等发现环化腺-磷(cAMP),被看作是生物界的一件大事,随后,Price等在1963年从大鼠尿中分离出cGMP,并且逐渐了解到cGMP也是细胞生命活动的重要调节控制物质,其作用与cAMP相拮抗。一些研究证明:提高细胞内cGMP水平,可以促进有丝分裂。这两种核苷酸在细胞分裂、分化的调节控制中起重要作用。虽然在动物、细菌、真菌等中cGMP的研究方面已有不少报导,但对植物细胞cGMP的研究则较少。为了了解外     

S_(180)-V系细胞周期中cAMP,cGMP含量与细胞形态变化扫描电镜的观察

本实验用氚标记环磷酸腺苷(~3H-cAMP)及碘标记环一磷酸鸟苷(I~(125)-cAGP)的放射免疫法,测定了体外培养S_(180)-V系细胞周期中悬浮的M期细胞和其贴瓶细胞与均相细胞内cAMP及cGMP的含量,并对相应的细胞形态的变化做了扫描电镜观察。此外,对这三种群体细胞体积进行了测量,据此对这些细胞内cAMP及cGMP浓度进行了换算。实验结果表明:M期细胞体积的平均值接近其它时相细胞平均细胞体积的2倍,M期细胞的cAMP含量明显低于贴瓶细胞和均相细胞内cAMP含量,而cGMP含量略有提高,但差异不显著,但cAMP/cGMP比值与贴瓶细胞(非M期的其它时相细胞)及均相细胞(包括M期时相的混合细胞)相比,显著降低,相差2—3倍。用扫描电镜对上述测定的各类细胞组份进行了对应的观察,从其外形的变化表明,S_(180)-V系细胞的骨架系统很不发达,在cANP含量低的漂浮组(M期细胞)比贴瓶细胞的骨骼系统更不发达.     

创伤后抑制性T细胞对活化T细胞内白介素2及白介素2受体α基因表达的影响

研究了创伤小鼠抑制性T细胞(Ts)对白介素2(IL-2)及IL-2受体(IL-2R)α基因表达的抑制作用。结果表明,创伤后Ts细胞对正常活化T细胞内IL-2 mRNA及IL-2 RαmRNA水平的抑制作用增强,以伤后4天最为明显,伤后10天仍未恢复正常。创伤后Ts细胞还可升高正常活化T细胞内cAMP含量,降低cGMP含量,增加cAMP/cGMP比值。且可降低三磷酸肌醇(IP_3)含量、游离钙(Ca~(2 ))浓度、钙调素(CaM)、钙调素依赖性蛋白激酶(CaM-PK)及蛋白激酶C(PKC)的活性。去除创伤小鼠活化T细胞中的Ts细胞,则可使其IL-2mRNA及IL-2RαmRNA水平明显升高。并可使cAMP、cGMP、IP_3含量、Ca~(2 )浓度、CaM、CaM-PK及PKC活性的变化发生逆转。表明创伤后Ts细胞可通过影响T细胞内环核苷酸含量及磷脂酰肌醇代谢途径,进而抑制IL-2及IL-2 Rα的基因表达。     

单纯疱疹病毒感染细胞内环核苷酸含量的改变

用单纯疱疹病毒(HSV)Ⅰ型Sm44株和Ⅱ型333株感染非洲绿猴肾细胞系(Vero细胞),观察感染细胞中cAMP和cGMP含量的改变。病毒感染量均为0.5TCID50/细胞,观察周期为36小时(从接种病毒到CPE达++++),在感染后0、2、8、12、24、36小时分别收获细胞,以放射免疫法测定细胞内环磷酸核苷的含量改变。结果Ⅰ型、Ⅱ型HSV感染后在全部6个观察时期,细胞内的cAMP含量始终是升高的。HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ组的平均cAMP含量都明显高于正常细胞(P<0.05和P<0.02)。cGMP和cAMP/cGMP的变化不显著(表1)。     

三尖杉酯碱抑制脱氧核糖核酸生物合成机制的研究——Ⅰ.对DNA模板及其合成代谢的影响

本文应用吸收光谱移动法、萤光光谱移动法、~(3)H-药物与DNA 结合实验以及~(3)H-胸腺嘧啶核苷连续标记技术研究了三尖杉酯碱抑制L_(1210)细胞DNA 生物合成的机制。结果表明,DNA合成的受抑可能是由于该药干扰其代谢过程而非直接损伤其模板所致。     

真菌中一氧化氮生物合成、降解及功能的研究进展

一氧化氮是一个有较高活性的自由基气体分子,无论在动植物还是微生物中,作为一个细胞内和细胞间的信号传导分子,它在许多的生理和病理过程中都发挥着双向的调节作用.研究发现真菌细胞可以合成一氧化氮,适当浓度的一氧化氮在真菌细胞内发挥多种重要的生物学功能,一旦一氧化氮过量累积,这个自由基分子会对细胞造成伤害,导致细胞凋亡.一氧化氮介导生成的环鸟苷酸(cGMP)作为一种重要的第二信使分子涉及到真菌细胞内多种信号途径的调控,调节了整个真菌类群的生长发育、形态发生、孢子形成和萌发、繁殖和细胞凋亡的过程,影响了真菌整个生命周期的生理活动.到目前为止,尽管一氧化氮在动植物中作用的机制得到了广泛的研究,但一氧化氮在真菌中的研究报道很有限.关于一氧化氮在真菌中的合成和降解途径,一氧化氮介导的信号传导机制的研究还不透彻,它在真菌细胞内的功能和毒理还有待于更深入的研究.     

精氨酸加压素、神经降压素和强啡肽对神经母细胞瘤细胞cAMP和cGMP的影响

本文报道小鼠神经母细胞瘤细胞在无血清培养条件下,用cAMP和cGMP放射免疫测定方法,观察AVP、NT和DYN对小鼠神经母细胞瘤细胞内cAMP和cGMP水平及cAMP/cGMP比值的影响。结果发现:AVP使cAMP水平和cAMP/cGMP比值显著升高(P<0.01);DYN使cGMP水平升高(P<0.01),但cAMP/cGMP比值下降;NT使cAMP水平和cAMP/cGMP比值下降,同时又使cGMP水平升高。结果提示:这三种神经肽可以分别对神经母细胞瘤细胞内cAMP、cGMP水平和cAMP/cGMP比值产生影响。     

乳杆菌DM9811代谢产物中的RNA组分对宫颈癌细胞cAMP/cGMP影响

目的通过分析乳杆菌DM9811代谢产物中的RNA组分对宫颈癌细胞cAMP/cGMP影响,探讨乳杆菌对细胞作用的分子机制。方法采用细胞与分子生物学方法。结果乳杆菌代谢产物中的RNA组分对细胞的信息分子cAMP具有重要的调节活性。当除去代谢产物中的RNA分子刺激细胞时,细胞内的cAMP水平低于纯化后的RNA组cAMP水平,低了1.75倍,cGMP水平也出现了对应关系。结论乳杆菌DM9811代谢产物中的RNA组分对细胞内信息分子cAMP/cGMP具有调节作用。     

环鸟苷酸依赖的蛋白激酶对心血管功能的调节作用

环鸟苷酸(cGMP)依赖的蛋白激酶(PKG)是一氧化氮-cGMP的主要细胞内受体,在哺乳动物细胞中分为PKG-I和PKG-II两型。在PKG介导的血管平滑肌舒张作用中,其主要通过活化细胞膜上的钙活化的钾通道(BK通道),磷酸化肌质网上的受磷蛋白(phospholamban,PLB)和三磷酸肌醇受体相关的PKG-I底物(IP3receptor-associated PKG-I substrate,IRAG),降低细胞内Ca2 浓度。PKG还可通过活化肌球蛋白轻链磷酸酶及抑制Rho激酶降低肌球蛋白对Ca2 敏感性。PKG调节血管平滑肌细胞的基因表达和表型调变,调节细胞增生。PKG活化以后还具有抑制血小板聚集,抑制心肌细胞肥大等功能。最近的研究证明,PKG的表达水平和活性改变与动脉粥样硬化和再狭窄、高血压、糖尿病心血管病变以及硝酸盐耐受等的发病机制有密切关系。     

前列腺素E_2对四氧嘧啶处理的新生大鼠离体胰岛细胞内环核苷酸含量变化的影响

将分离的新生大鼠胰岛细胞,分别置入四氧嘧啶,PGE_2,PGE_2和四氧嘧啶以及高浓度葡萄糖和四氧嘧啶液进行孵育,用RIA 法测细胞内cAMP和cGMP的含量。结果表明,四氧嘧啶使胰岛细胞内 cAMP含量明显降低 cGMP含量升高cAMP/cGMP 比值比正常鼠低2.79倍,但 PGE_2预处理可以防止由四氧嘧啶引起的cAMP 的降低和 cGMP升高,使胰岛细胞内cAMP/cGMP 比值维持在接近正常水平。高浓度葡萄糖预处理虽不能防止由四氧嘧啶引起的cAMP 降低,但因能使cGMP 和cAMP 值均降低,故cAMP/cGMP 比值仍接近正常水平。单纯 PCE_2可使胰岛细胞内 cAMP含量轻度升高cGMP值略下降,cAMP/cGMP比值比正常值外高1.49倍。上述结果提示PGE_2可能是通过调节胰岛细胞内环核苷酸水平,实现其对胰岛B细胞的细胞保护作用的。     

钙离子与细胞的功能

1883年Ringer发现蛙心在含钙的液体中停止搏动,1947年Heilbum用显微穿刺法将氯化钙注入蛙和蟹的肌纤维观察到肌肉收缩,1952年Sandow等证实Ca~(2 )在骨骼肌的兴奋一收缩过程中起偶联作用,于是Ca~(2 )在细胞活动中的作用引起了人们广泛的注意。大量事实表明,Ca~(2 )的生理作用非常广泛,它不仅在细胞中起兴奋一收缩偶联作用,而且在一切细胞的运动、分泌、代谢、分化等基本过程中,它都起着偶联和/或第二信使的作用。目前认为,Ca~(2 )在激活细胞机能方面与各种环核苷酸具有同等的重要性,它和细胞内的cAMP、cGMP等第二信使共同调节着细胞的机能。本文仅就Ca~(2 )在细胞内的代谢和作用以及目前关于Ca~(2 )与环核苷酸在激活细胞机能中的相互关系的研究的某些新进展作一扼要介绍。     

一氧化碳可能是一种新型信使分子

近年研究表明,一氧化氮(nitric oxide,NO)是一种新型细胞信使分子,它通过激活靶细胞中可溶性鸟苷酸环化酶,使细胞内cGMP含量增多,引起一系列生物学效应,从而完成其在细胞间传递信息的功能。然而,十分矛盾的是在脑神经细胞中,NOS合成酶(nitric oxide synthase,NOS)却与鸟苷酸环化酶的分布不一致。最近,Snyder等应用原位杂交技术发现,一氧化碳合成酶(carbon monoxide synthase,COS)即血红素氧     

人B淋巴细胞分化的表面标志

抗人B细胞表面抗原单克隆抗体的制备促进了B细胞分化的表面标志的研究。迄今为止已发现的泛B标志有B_1、B_2、B_4、L_(23)、L_(25)、L_(27)、L_(30)、FMC_1等,与B细胞活化有关的标志有B_5、HB-5、L_(29)、BLAST-1、BLAST-2、Leu8、DR、DS、4F_2、5E_9、IL-2受体等。文中还就B_1、B_2、B_4、CALLA、胞浆μ链等与B细胞分化及功能的关系作了介绍。     

miR-17-92对急性白血病L1210/DDP细胞多药耐药性影响研究

目的:研究miR-17-92在白血病L1210/DDP细胞多药耐药形成中的作用.方法:首先构建L1210/DDP耐药细胞系,运用real-time PCR方法检测miR-17-92在L1210/DDP细胞与L1210细胞中的表达差异.利用脂质体Lipofectamine 2000将miR-17-92抑制物(miR-17-92sponge)及阴性对照(sponge vector)转染L1210/DDP细胞,构建miR-17-92表达下调的L1210/DDP细胞系.用MTS法检测转染后耐药细胞对顺铂和阿霉素体外药物敏感性.结果:miRNA-17-92在L1210/DDP耐药细胞系中高表达,上调倍数为(1.61±0.01)倍.体外药物敏感性实验表明,转染miR-17-92抑制物的实验组对顺铂和阿霉素的IC50分别为(3.29±0.51)、(1.35±0.13)g/ml,而转染阴性对照组对上述药物的IC50分别为(6.73± 0.82)、(2.66±0.42)g/ml,在耐药株中抑制miR-17-92在L1210/DDP细胞中的表达,显著增加细胞对顺铂和阿霉素的敏感性.结论:miR-17-92在白血病耐顺铂L1210/DDP细胞中高表达.抑制miR-17-92的表达可增加白血病L1210/DDP细胞对顺铂和阿霉素化疗药物的敏感性,部分逆转耐药.     

抗白血病药物三尖杉酯碱对L1210细胞着丝粒蛋白含量及CenpB基因表达的影响

以小鼠白血病细胞系L1210为对象,探讨了抗白血病药物三尖杉酯碱(Harringtonine,HT或Har)对细胞内着丝粒蛋白含量及着丝粒蛋白CenP基因表达的影响。间接免疫荧光(IIF)检测结果显示,随HT作用时间延长,L1210细胞着丝粒荧光斑点减弱;免疫印迹(Western blot)检测结果显示,所用的抗着丝粒抗血清(ACA 血清)能够识别8种不同分子量的着丝粒蛋白：140、80、70、56、37、34、32和17kD。受HT作用,细胞中这些着丝粒蛋白的含量不同程度地降低。在L1210细胞中识别17、80 and l40kD蛋白质的ACA抗体也分别与分子量相当的已知为CenpA、CenpB和CenpC的3种蛋白发生交叉反应。Northern和Dot blot显示,HT的抑制作用使细胞中CenpB mRNA表达水平较之对照细胞下降。结果表明,HT可(通过抑制基因mRNA的表达)降低细胞中某些着丝粒蛋白的含量;HT对细胞的杀伤及诱导凋亡作用可能与CenpB等着丝粒蛋白基因的表达抑制有关。     

酶细胞化学在电子显微镜术中的应用

电子显微镜术和细胞化学方法相结合,用来研究细胞内酶的分布,还是近十几年来的事情。由于细胞内酶定位和超微结构形态两者密切结合,可以用来观察在生理和病理情况中细胞内酶的分布及演变,也可用这些酶作为标记物(marker)来研究细胞膜及细胞器。这项技术在生物医学领域内目前受到很大的重视,迄今在细胞超微结构上能够定位的酶大约有40余种。尽管这一技术目前还局限在     

豚鼠耳蜗中ATP对一氧化氮/环磷酸鸟苷途径的激活作用

实验研究了豚鼠耳蜗中ATP和一氧化氮／环磷酸鸟苷途径(nitric oxide／cyclic guanosine monophosphate,NO／cGMP pathway)的关系。将40只耳廓反射灵敏的健康白色豚鼠随机分为5组,分别对其离体的耳蜗即刻灌流人工外淋巴基础液(artificial perilymph basic solution,APBS)以及溶于人工外淋巴基础液的ATP、一氧化氮合酶抑制剂左旋-N^G-硝基精氨酸(L-N^G-nitroarginine,L-NNA) ATP、可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂1H-[1,2,4]草酸重氮[4,3-a]喹恶啉(1H-[1,2,4]oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one,ODQ) ATP和A-23187(Ca^2 载体),收集耳蜗组织标本,利用放射免疫方法测定耳蜗组织中的cGMP的平均含量,比较各组之间耳蜗组织cGMF平均含量的差异。试验结果显示,向刚离体的耳蜗中灌流ATP和A-23187可以引起耳蜗组织中的cGMP含量升高,而灌流L-NNA和ODQ则可以抑制ATP所引起的耳蜗组织中cGMP含量的升高,提示在耳蜗组织中ATP可以通过升高细胞内Ca^2 浓度的作用而激活NO／cGMF途径。从本实验结果可以提出假说：耳蜗中ATP从神经末梢释放,通过提高细胞内Ca^2 的浓度,有激活NO／cGMP途径的作用,而NO／cGMP又能对ATP进行负反馈调节,两者共同调节耳蜗的生理功能,在耳蜗中存在ATP／Ca^2 -NO／cGMP通路。     

磷酸二酯酶5参与平滑肌功能调节的机制

磷酸二酯酶5(phosphodiesterase type 5,PDE5)又称对环鸟苷酸特异的磷酸二酯酶(cGMP-specific phosphodiesterase),广泛分布于机体的平滑肌细胞中,通过对细胞内特定区域的cGMP水平的调节,参与平滑肌(收缩、舒张)状态的快速调控.现对PDE5的基因表达和酶活性的调控方式,亚细胞分布,以及在平滑肌中的调节机制和药理应用进行综述.