苏云金杆菌超氧化物歧化酶的纯化和性质研究

苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）９１６５超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＦ－１００凝胶过滤及非变性凝胶电泳（ＰＡＧＥ）三步纯化,纯酶比活力为４３８８ｕ／ｍｇ,属Ｍｎ－ＳＯＤ,分子量为４７．９ｋｕ,由二个亚基组成,含１９种氨基酸。     

泥鳅铁超氧化物歧化酶的纯化及其部分性质

超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,EC.1.15.1.1,简称(SOD)是一种催化歧化反应的酶类,它能消除生物氧化时产生的超氧阴离子自由基(O2-)。它在自由基理论、辐射防护、疾病防止等领域有广泛的研究和实用价值。作者从泥鳅体内分离纯化得到Fe－SOD,并对其基本性质进行了研究。       

韭菜叶绿体超氧化物歧化酶纯化及性质研究

经硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ层析３个步骤将韭菜叶绿体ＳＯＤ纯化到均一程度。鉴定该酶是Ｃｕ．Ｚｎ－ＳＯＤ,测得其分子量约３２０００Ｄ,亚基分子量约为１６２００Ｄ,Ｎ－末端氨基酸为Ａｌａ。该酶在紫外与可见光区的吸收峰分别在２６５ｎｍ和６７５ｎｍ。实验表明该酶热稳定性良好。     

菠菜铁型超氧化物歧化酶的纯化及性质

用聚丙烯胺梯度凝胶电泳法检测出菠菜ＳＯＤ同工酶谱带中含３条Ｆｅ－ＳＯＤ活性带,菠菜叶Ｆｅ－ＳＯＤ粗提取液经硫酸铵分部沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素－Ａ５２和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析,纯化出单一的Ｆｅ－ＳＯＤ活性带,纯化酶的分子量为４２．６ｋＤ,亚基分子量为２１ｋＤ。对金属元素的分析表明,该酶每分子含２．６个Ｆｅ原子,该酶紫外区最大吸收峰为２７８ｎｍ,等电点为４．６,氨基酸组成和其它来源的Ｆｅ－ＳＯ     

苦荞叶片超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

从荞麦生化遗传以及器官衰老机理的研究目的出发,以苦荞叶片为材料,制备出活力较高的铜锌趋氧化物歧化酶。对其理化性质分析表明：该酶在２５９ｎｍ处有一特征吸收峰,分子量约为３１ｋＤ,含有３０８个氨基酸残基,同工酶电泳结果显示三条活性带。     

近江牡蛎铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

经６５℃加热,硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥ－５２柱层析,从近江牡蛎（ＯｓｔｒｅａｒｉｖｕｌａｒｉｓＧｏｕｌｄ）软体部分提纯了铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）．对其理化性质鉴定表明,用此法纯化的酶纯度均一．该酶系由两个相同亚基组成的二聚体,分子量２７．９ｋＤ．该酶的紫外吸收峰在２７２．５ｎｍ,红外光谱表现出其氨基酸组成特征,与猪血ＳＯＤ存在差异．该酶在不同的升温速率下及经不同浓度的Ｈ２Ｏ２处理后的稳定性与猪血ＳＯＤ不同．其氨基酸组成与不同来源的同类酶存在差异．     

意蜂蜂王浆超氧化物歧化酶的分离纯化及部分性质

以意蜂Apis mellifera蜂王浆为材料,经过硫酸铵分段盐析,DEAE-Sepharose 柱层析和Sephacryl S-200凝胶过滤,得到纯化的超氧化物歧化酶(SOD),纯化倍数104.00,比活力53.05 U/mg。该SOD经SDS-PAGE显示单一蛋白带。温度对该酶活力的影响较小。Cu、Zn、Fe和Mn等元素含量测定发现该酶只含有Cu和Zn。酶经圆二色谱测定后,其α螺旋、β折叠和无规则卷曲蛋白构型的含量分别为26.1%、53.8%和22.0%。等电聚焦电泳测得酶的等电点为4.69、4.85和5.01。NR/R单向和双向SDS-PAGE表明该酶含有链内二硫键。氨基酸组成分析发现该酶由约402个氨基酸残基组成,其中Asp、Gly、Leu、Ala、Glu和Val的含量较高。脲可抑制SOD活性,并使其紫外光谱发生变化,荧光发射峰强度变小。溴乙酸（BrAc）抑制酶的活力,使其紫外光谱发生变化,荧光发射峰强度变小。二巯基苏糖醇（DTT）使酶的活力发生变化,紫外吸收峰增大,荧光发射峰变小。     

贻贝（Perna viridis）超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

采用５５－６０℃热处理,硫酸铵分级深沉和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层析将贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ纯化到均一程度。每１００ｇ鲜贻贝肉可得到ＳＯＤ制品,总活力３６８９ｕ,比活力７８２ｕ／ｍｇ,回收率为２１％。测得该酶分子量为３２ｋＤ,亚基分子量约为１６．４ｋＤ,最大紫外吸收波长为２６８ｎｍ,,贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ具有一定的耐热性,较强的抗酸、抗碱及抗脲性。     

韭菜线粒体锰超氧化物歧化酶纯化及性质研究

经硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００凝胶过滤,将韭菜线粒体ＳＯＤ纯化到均一程度。从６０００ｇ韭菜叶片线粒体中纯化得到２．５ｍｇ酶,酶比活力达１２００Ｕ／ｍｇ蛋白。该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２都不敏感,热稳定性弱 外光区吸收峰在２８０ｎｍ,凝胶过滤法测得其分子量为８２００Ｄ,ＳＯＳ－ＰＡＧＥ法测定其亚基分子量的２２０００Ｄ,ＤＮＳ法测得其Ｎ－末端氨基酸为缬氨酸。上述结     

苏云金杆菌超氧化物歧化酶的纯化和性质研究*

苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）９１６５超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＦ－１００凝胶过滤及非变性凝胶电泳（ＰＡＧＥ）三步纯化,纯酶比活力为４３８８ｕ／ｍｇ,属Ｍｎ－ＳＯＤ,分子量为４７．９ｋｕ,由二个亚基组成,含１９种氨基酸。     

从酵母菌中分离纯化超氧化物岐化酶

超氧化物岐化酶(SOD)由于具有消除氧自由基的功能,在医药、保健品中具有重要应用价值。我国目前SOD产品主要是从牲畜血液中提取,这个方法所用原料有限,SOD质量不稳定。80年代后,美国和日本先后开发了用发酵法生产SOD,大大地降低了生产成本。但由于SOD为胞内蛋白,因而发酵法产生SOD后提取工艺极为复杂,至少需要六步,一般经过细胞破碎、离心、盐析、透析、离子交换层析(2～3次)和凝胶层析等才能达到比活>3000u/mg。由于细胞破碎主要为机械法(如球磨和超声波法),胞内所有蛋白都释放出来,SOD比活只有10～30u/mg,因而后续SOD纯化     

韭菜细胞溶质超氧化物歧化酶的纯化和性质

经硫酸按沉淀、SephadexG－200凝胶过滤和DEAE－Sephacel层析3个步骤,将韭菜细胞溶质SOD纯化到均一程度。从500g叶片中得到2·4mm酶,酶比活力达13000U／mm蛋白。鉴定该酶是Cu·Zn—SOD。测得酶分子量约为30900道尔顿,亚基分子量约为15900道尔顿,N一末端氨基酸为丙氨酸。该酶在紫外与可见光区吸收峰分别在260urn和680urn。实验表明该酶热稳定性良好。     

猕猴桃果实细胞中超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

本文采用硫酸铵盐析、Sephadex G-100、DEAE-纤维索层析,首次从猕猴桃果实细胞中提纯了超氧化物歧化酶。并从不同角度鉴定了酶制备物的纯度,认为它达到均一程度,酶比活力为每毫克蛋白质1340单位;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳为一条带,氨基酸末端为丙氨酸;酶亚基含氨基酸16种,大约由157种氨基酸残基组成;紫外可见光区最大吸收峰分别为270nm和676nm,同时,用金属Co和Zn对CuZn—SOD中金属离子进行了取代研究。     

棕色固氮菌含铁超氧化物歧化酶的分离提纯及性质研究

本文以改进的方法提纯了棕色固氮菌——230含铁超氧化物歧化酶。产品收率提高1倍以上。该酶在pH8.2时,5℃～60℃稳定。在25℃时,pH6～12稳定。NaN_3和H_2O_2是该酶的抑制剂,而KCN对此酶活力无影响。     

蚕豆种子超氧物歧化酶的纯化及性质

蚕豆种子粗提液经乙醇－氯仿混合物处理、丙酮沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素层析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ层析,获得比活性为２８５２单位ｍｇ－１蛋白的超氧物歧化酶．经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明酶已纯化到均一程度．该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２敏感,说明它为Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ．酶分子量和亚基分子量分别为３１０００和１４４００,说明它是由两个相同亚基组成。该酶在７０℃以下和在ｐＨ５—９条件下稳定．紫外区最大吸收峰为２７３．５ｎｍ。     

哈维氏弧菌铁超氧化物歧化酶基因表达及免疫作用研究

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是鱼虾等海水动物的重要病原菌。超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)通过催化超氧阴离子自由基(O2-)形成O2 和H2O2, 以保持细胞自由基产生和清除之间的平衡, 在病原菌适应环境及细菌致病性方面发挥重要作用。用PCR 从哈维氏弧菌基因组扩增得到600 bp 的目的片段, 序列分析表明与弧菌Fe-SOD 的序列相似性为91%—99%。将目的基因片段克隆到原核表达载体进行表达。SDS-PAGE电泳分析显示纯化的蛋白为单一条带, 分子量为27 kD。具有典型的Fe-SOD 吸收光谱, 对氯仿-乙醇和H2O2敏感, 表明纯化的蛋白属于Fe-SOD。用邻苯三酚自氧化法测得酶的最适pH 7, 最适温度20℃。该酶在pH6—8 的范围内稳定, 当温度超过40℃时酶的活力迅速丧失。纯化的重组蛋白免疫大菱鲆, 4 周后用致病性哈维氏弧菌进行人工感染试验, 对大菱鲆的免疫保护率为80.00%。Western blot 可以检测到免疫大菱鲆的血清中的特异抗体。