漆酶工程菌株的构建及其培养条件的研究

提取产漆酶白腐菌 (Fomelignosus)的总RNA ,利用RT_PCR的方法克隆到漆酶的cDNA ,并将其克隆到表达载体pPIC9k ,重组质粒经线性化、电激转化PichiapastorisGS115、通过底物显色反应筛选到漆酶生产工程菌株。其中 2 #工程菌株产酶活力较高。培养基、培养温度、诱导用甲醇浓度及培养基中铜离子浓度对该菌产酶活力均有一定的影响。在最适条件下 (用含 2 0 0 μmol LCu2 的BMMY培养基 ,于 2 0℃ ,2 5 0r min ;用 0 5 %甲醇诱导 )培养至第 6天时 ,该菌株产酶活力达到最高 (15 10U L)。     

萝卜溶菌酶诱导条件的研究

分别以不同浓度（Ａ４５０ｎｍ表示）的高压灭活白色葡萄球菌、大肠杆菌及水杨酸对萝卜溶菌酶进行不同时间的诱导。结果表明,诱导时间２４ｈ效果最好,白色葡萄球菌最适浓度Ａ４５０ｎｍ为０．９４,酶的活力提高了２．３４倍;大肠杆菌最适浓度是Ａ４５０ｎｍ为０．５５,诱导酶活力提高了０．７５倍,以０．２％的水杨酸为诱导物时,第４ｄ和第８ｄ的效果最好,酶活力分别提高了２．４和１．７倍。以酶作用产物进行田间叶面喷施和     

1,6—二磷酸果糖产生菌的筛选及最佳培养条件的研究

１,６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）广泛应用于治疗心血管疾病。本文进行了１,６－二磷酸果糖产生菌的筛选和最佳条件的研究。筛选出菌株ＨＹ２具有较高的产１,６－二磷酸果糖酶活力,高达１６０ｍｇＦＤＰ／ｇ ｗｅｔ ｃｅｌｌｓ,菌体生长的最适培养条件为：麦芽汁培养基糖度为１２柏林,培养温度为２８℃,ｐＨ６．０￣６．５,菌体收率达７．０％左右。     

L-天冬酰胺酶工程菌株培养条件及稳定性

L-天冬酰胺酶工程菌株的酶活和表达水平受菌体生物量和诱导时间的影响。在生物量Ａ６００03×１０左右,热诱导4h酶活力和表达水平可达到较高水平。葡萄糖对酶的生成有阻遏作用,当葡萄糖浓度大于025%时,对工程菌酶的合成造成阻遏。确定了工程菌培养的培养基、pH值、接种量等因素。重组质粒pASN在\%E.coli\% JM105,TG1和AS1357等宿主菌中具有很好的稳定性,工程菌培养50代以上重组质粒保留90%以上,在LB和M\|3培养基中也较稳定。     

累积番茄红素的大肠杆菌工程菌及其培养条件的研究

噬夏孢欧文氏菌番茄红素合成相关基因crtE, crtB, crtI同时克隆进表达载体pET-15b构建pET-15bcrtIEB,将该重组质粒转化E.coliBL21(DE3)构建工程菌,IPTG诱导工程菌累积红色色素,经HPLC和吸收光谱分析,工程菌中合成的色素为番茄红素。研究了碳源、金属离子、培养温度、诱导剂浓度、诱导时间等参数对工程菌生长及色素累积的影响,确定了合适的培养条件：培养基为改良LB培养基（蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、麦芽糖5g/L、MgCl2 0.1g/L,NaCl 10g/L）;起始培养温度为37℃;培养至OD600为0.6左右时加入IPTG,终浓度为0.5mmol/L,诱导温度降至30℃;诱导时间为14h。发酵完成后工程菌的生物量（干重）为3.45g/L,番茄红素的最高含量可达5.8mg/gDW。     

防烟叶霉变菌株培养条件的研究

为有效防治烟叶霉变．对防烟叶霉变最好的3个菌株B112、B329、JMB142的发酵条件进行了初步探讨,通过测定吸光度值计算孢子浓度,确定了3个菌株生长的最适pH值与最适培养基。结果表明菌株JMB142在pH为7．2到8．4时,生长较好,菌株B112和329在PH6.3到PH7.9之间生长较好;当PH小于4.2时,三个菌株均不能正常生长,PH大于9.0时,三个菌株的生长都呈下降趋势。通过方差分析,比较了7种培养基对3株防烟叶霉变菌株产菌量的影响,结果表明,B112、JMB142菌株最佳培养基分别为6^#、5^#培养基,而5^#、7^#培养基更适合B329生长。     

磷细菌PB12菌株的选育及培养条件的研究

以PB-1P为出发菌株,经紫外线诱变,获得1株解磷高产菌株PB12。在以磷酸三钙为惟一磷源的培养基中接种PB12菌株,28℃,振荡培养5d,培养基上清液中磷含量达61.21mg/L,是出发菌株的2.03倍。同时研究了各种理化因素对PB12菌株生长的影响,确定了最佳培养条件,即玉米粉1.0%,豆饼粉2.0%,pH7.0,装液量为100mL(500mL三角瓶),36℃培养42h,有效活菌数可达10.2×108cfu/mL。     

重组人溶菌酶研究进展

与其他来源的溶菌酶相比,人溶菌酶具有独特的优越性和多种多样的药理作用效果,在临床上具有多种重要应用价值。但天然人溶菌酶来源极其困难,利用重组DNA技术进行生产是解决这一难题的有效途径。迄今人们已利用化学合成或从人类细胞组织中制备cDNA等途径获取人溶菌酶基因,并在大肠杆菌、酵母菌和真菌表达系统中进行了表达,最高水平为40mgL,低于人乳中溶菌酶含量(50～250mgL),虽然距离工业化生产仍有一定距离。但重组人溶菌酶发展前景看好。     

嗜盐性低温海洋细菌碱性蛋白酶的研究 I.菌株分离和发酵条件

自海水、海泥和海洋鱼体取样,经2216培养基和酪蛋白培养基复合培养,初步获得产蛋白酶活力较高的海洋低温细菌,并对其进行不同发酵条件的试验,以了解菌株的生长、产酶和其它环境因子之间的相互关系。本试验证明在pH7.0,温度15-200℃,盐度30-40%。的情况下,菌株生长并产酶,培养48小时,产酶最高,最终pH为8.0-8.5。     

产葡萄糖异构酶工程菌工业发酵条件模拟研究

高效表达葡萄糖异构酶的大肠杆菌工程菌Ｋ３８／ｐＧＰＩ－２,ｐＴＫＤ－ＧＩ菌株,在玉米浆培养基中能高效合成葡萄糖异构酶,观察了细菌生长的细胞浓度（ＯＤ）、ｐＨ和酶产生的动态变化。玉米浆培养基成本低、制备工艺简单,在５０Ｌ发酵罐中酶活力为１４３ｕ／ｍＬ,比在ＬＢ培养基中高约１０倍。用超声波破碎细胞液作酶源吸附于大孔阴离子交换树脂制成固定化葡萄糖异构酶、其酶活力达到１０２００ｕ／ｇ（干）。     

工程菌人溶菌酶的纯化和性质

将人溶菌酶工程菌株在发酵培养、菌体经超声破碎、变性和复性后所得的粗酶液经ExpressIon S阳离子交换柱层析,得到电泳纯的酶,比活达到48KG*4]000u/mg。此酶的最适pH为6.5;等电点为8.91;对溶壁微球菌的米氏常数Km=0.0311mg/mL;60℃保温30〖KG*4]min,酶活力剩余48.3%。N末端氨基酸序列除了第一个Met,其余4个与预期相符。一些重金属离子对酶的活性影响不尽相同,在0.01     

富硒姬松茸液体培养条件的研究

采用液体摇瓶培养法 ,对姬松茸 (Agaricusblazei)富硒培养条件进行初步研究 ,结果表明 :富硒姬松茸液体培养的最佳培养基配方为玉米粉 30 g/L ,葡萄糖 2 0g/L ,硫酸铵 2 g/L ,酵母膏 3g/L ,KH₂ PO₄ 2 g/L ,MgSO₄ ·7H₂ O 1 g/L ,维生素B11 0 0mg/L ;采用 1mg/L亚硒酸钠驯化菌种 ,2 5 0mL三角瓶装量 80mL ,p     

禿杉组织培养研究

本文详细报道了从秃杉(Taiwania flousiana Gaussen)离体胚诱导不定芽、不定根及从无菌苗茎端培养再生植株的过程。诱导不定芽要求较低的蔗糖浓度(以3％最好);同时BA是必须的,在附加0.1—3 mg/1 BA的White培养基上,从离体胚的子叶或胚轴上诱导了不定芽的发生(以1 mg/1最好);NAA与BA结合使用,对不定芽诱导无促进作用;适当提高光照有利于不定芽的诱导。在诱导不定芽的同时,在子叶表面还观察到有许多无结构的“不定突起”。不定芽起源于子叶表皮下1—2层细胞。IBA对诱导离体胚上产生不定根效果较好。在有或无生长素的培养基上,从生长1月龄的无菌苗茎端培养获得了不定根的产生,在加有细胞分裂索的培养基上,从无菌苗上产生了腋芽。     

乳酸菌素片生产菌菌株特性及产酸条件的研究

对乳酸菌素片生产菌嗜酸乳杆菌菌株的某些特性如质粒、抗药性、遗传稳定性、β－半乳糖甘酶含量以及产酸条件进行了研究。最佳产酸条件为２０％脱脂乳,自然ｐＨ,３７℃发酵７２ｈ,产酸４４３°Ｔ。     

SOD高产菌株乳酸菌的选育及其产酶条件的研究

采用常规筛选方法从 200多株不同种属的乳酸菌中筛选出一株超氧化物歧化酶(SOD)产量较高的菌株 (Sn 898)作为实验出发菌株 ,经紫外线 (UV) ,硫酸二乙酯(DES) ,亚硝基胍 (NTG)复合诱变 ,选育出一株 (Lactobacillusplantarum-578简写L .plan-578)SOD产量高达6400u/g湿菌体的高产菌株。该突变株的SOD产量较出发菌株提高了3.5倍 ,并研究了影响SOD产生的最适温度 ,起始pH值 ,通气量 ,培养时间等因素。在优化     

曲酸菌选育及发酵工艺研究

筛选获得产曲酸菌株米曲霉（Aspergillusoryzae）MSA进行⁶⁰Co诱变,并进行了发酵工艺条件研究,以葡萄糖为碳源、豆饼粉为氮源,在pH3.0、33℃摇瓶培养,可达到5d产酸5％以上水平。发酵液采用直接浓缩结晶工艺,脱色与重结晶后获得无色针状晶体,红外图谱检测确证为曲酸。     

十字花科几种植物的胚培养研究

利用幼胚成功地培养出白菜型油菜、芥菜型油菜、甘蓝型油菜、埃塞俄比亚芥、诸葛菜的再生植株。通过研究表明：不同的植物在培养基中的反应不同。同一个材料,在不同时期,培养的效果也不同。白菜型油菜难形成愈伤组织,且愈伤组织也难以分化,但生根较易。其它几种芸苔属植物则易形成愈伤组织和分化。诸葛菜能够形成胚状体,胚状体极易萌发。除了白菜型油菜外,所有材料都表现出极强的再生能力。     

沼泽红假单胞菌培养条件的初步研究

就沼泽红假单胞菌Ｐ３．９菌株的主要培养条件进行了初步研究。Ｐ３．９菌株在厌氧光照条件下能利用多种类型的有机碳源物质;其细胞生长的最适ｐＨ为６．５—８,最佳光照强度为２０００—３０００Ｌｘ;培养基中添加酵母膏能明显促进细胞生长。在适宜的培养条件下,菌液细胞数可高达４８亿个／ｍｌ。