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用前染和后染两种不同的染色方法,研究比较SYBRGreenI和溴化乙锭(EB)两种核酸染料对凝胶中DNA的染色效果和灵敏度,及SYBRGreenI取代EB用于常规凝胶中核酸染色的可能性。结果表明,用前染法染色SYBRGreenI对琼脂糖凝胶中的核酸染色效果与EB相当;用后染法染色前者要优于后者,可显示5ng以下的DNA条带,在完全相同的操作条件下,其染色DNA条带背景清晰,灵敏度较高。因此,无致突变性新型染料SYBRGreenI可替代强致突变性染料EB用于检测凝胶中DNA片段大小、含量等,从而减少由于使用EB带来的环境污染和人体健康危害。 相似文献
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2种核酸染色方法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:比较前染和后染等2种核酸染色方法对凝胶中DNA的染色效果,及其对染料染色灵敏度的影响,并验证新型核酸染色剂SYBRGreenⅠ能否代替传统染料溴化乙锭(EB)用于常规电泳中DNA的染色。方法:分别用SYBRGreenⅠ与EB采用2种不同的方法对凝胶中的DNA进行染色。结果:前染和后染的染色效果无显著差别,2种染料都能显示出10ng以下的DNA条带。结论:前染和后染方法的染色效果相当,染料SYBRGreenⅠ和EB均可用于这2种染色方法;新型染料SYBRGreenⅠ可代替强致癌性染料EB,用于常规凝胶中DNA的染色。 相似文献
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目的:使用核酸染料Genefinder检测琼脂糖凝胶中的核酸,通过比较预染样品法、胶内染色法和后染法三种染色方法的染色效果,了解该染料的染色特性,以期找到性能稳定,染色效果好的染色方法.方法:在琼脂糖凝胶电泳中,以不同的染色方法使用核酸染料Genefinder进行染色,对染色结果进行比较分析.结果:使用电泳后染色方法染色效果较好,胶内染色法次之,预染样品法效果最差.结论:核酸染料Genefinder会干扰DNA的迁移效率,因此,使用Genefinder进行电泳后染色是一种较好的染色方法. 相似文献
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叶正祥 《中国生物工程杂志》1984,4(3):103-104
九、碱性琼脂糖凝胶 科学家们认为,琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的一种极好的方法。这种技术操作简单,快速,并且还能解决在密度梯度离心中所存在的DNA片段不能充分分离的难题。此外,还能直接确定凝胶中DNA的位置:其方法是先用低浓度的能发荧光的具有插入本领的染料(溴乙锭),对胶中DNA条带进行染色;然后,把电泳胶置于紫外光下进行直接检测,其灵敏度可达1毫微克(ng)。 相似文献
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目的:制备一种具有琼脂糖凝胶电泳定量功能的DNA分子量标准。方法:以pMD18-TSimple载体为基础骨架构建了长度为4.7kb的质粒,应用定点突变的方法,在载体上分别间隔100bp、200bp、400bp、800bp、1200bp处,加入了HindⅢ限制性内切酶的酶切位点,将该质粒扩增后并应用HindⅢ酶切后,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果:获得的分子量条带大小依次为100bp、200bp、400bp、800bp、1200bp和2000bp,每次使用4μl可获得质量范围为10ng、20ng、40ng、80ng、120ng和200ng的定量标准品。结论:应用该方法制备标准品,具有制备简单、成本低、定量快速等优点。 相似文献
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(续 2 0 0 1年第 3期第 43页 )实验三 生物化学试题 :DNA和染色剂样品的琼脂糖凝胶电泳注意 :3个学生使用 1个电泳电源 ,在加样以后除去电泳槽下的黑纸 (图 1)。图 1 引言 :电泳是用于分子生物学和医学的 1种分析方法。分子的净电荷在所应用的电场中影响它的迁移速度 ,电泳技术就基于这种原理。琼脂糖凝胶电泳用于提供如下信息 :·用于分离 DNA和 RNA的鉴定·用于检验 DNA的纯度·用于检验核酸的构型·用于鉴定 DNA的大小纯的琼脂糖是粉状的 ,在室温下是不溶于水的 ,为了溶解它 ,给 1个沸水浴。当开始冷的时候 ,它是 1个多聚体的… 相似文献
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SCP诱导人肝癌细胞凋亡与bcl-2基因表达的关系 总被引:4,自引:1,他引:3
目的探讨鲨鱼软骨制剂(SCP)诱导人肝癌细胞系(SMMC7721)凋亡的作用机制.方法以不同浓度SCP加入体外培养的SMMC7721细胞中,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33342/PI荧光染色,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率;流式细胞术进行细胞凋亡定量;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带;免疫细胞化学染色法检测Bcl-2蛋白的表达.结果 SCP明显抑制SMMC7721细胞生长,IC50值为1.25mg/ml;荧光显微镜下可见50%以上细胞为凋亡细胞的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA ladder);免疫细胞化学检测显示SCP诱导人肝癌细胞凋亡过程中Bcl-2表达明显降低.结论 SCP诱导SMMC7721细胞凋亡,可能与下调Bcl-2表达有关. 相似文献