我国首次发现的HIV—1和HIV—2双重感染样品中病毒部分基因的序列特 …

上海市卫生检疫局送检了一例ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２抗体检测均呈阳性的双重感染样品,对其感染的ＨＩＶ前病毒的ｇａｇ和ｅｎｖ基因区进行了序列分析,首次阐明我国发现的ＨＩＶ双重感染样品的ＨＩＶ部分基因特征。从ＨＩＶ感染者淋巴细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ,ＰＢＭＣ）中提取前病毒ＤＮＡ,分别使用ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２特异性引特用套式ＰＣＲ扩增ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２     

HIV－1外膜（env）基因在重组痘苗病毒中的高效表达

应用重组痘苗病毒作载体,在ＡＴＩ、Ｐ７．５突变型早期启动子控制下,高效表达了（经定点突变去除一处早期终止信号的）ＨＩＶ－１ｅｎｖ基因。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证明,晚期启动子活性强的ｐＳＦＪ２－３８能更高效地表达ｅｎｖ基因。经Ｌｅｎｔｉｌ－Ｌｅｃｔｉｎ提取以及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后的激光扫描测定结果,在１０７个感染细胞中可产生５０－７０μｇ的Ｅｎｖ蛋白。     

人免疫缺陷病毒HIV-1 gag和env基因片段在大肠杆菌中的表达

人免疫缺陷病毒ＨＩＶ－１ｇａｇ和ｅｎｖ基因片段在大肠杆菌中的表达祁自柏,谷金莲,李河民（中国药品生物制品检定所,北京１０００５０）由于引起艾滋病的ＨＩＶ－１病毒的多变性,使得艾滋病的预防和治疗遇到很大困难。我们从一株用艾滋病人外周血淋巴细胞感染的细胞...     

人类免疫缺陷病毒1型（HIV—1）核心蛋白（p24）在大肠杆菌中的表达,纯化…

在大肠杆菌中,利用新构建的含Ｔ７噬菌体ｇ－１０核糖体结合位点（ＲＢＳ）,以及λ噬菌体ＰＲ启动子的新型原核表达载体,通过表达ｇａｇ－ｐｏｌ基因片段,获得了具有天然序更的人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）核心蛋白Ｐ２４（ＣＡ）的高效表达,克隆的ｇａｇ－ｐｏｌ基因片段 在其阅读框架移位区域插入了４ｂｐ碱基,其的病毒蛋白酶在阅读框架上与ｇａｇ一致,从而实现了对ｇａｇ－ｐｏｌ融合蛋白有有效加工,产生成熟的核     

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白(p24)在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

在大肠杆菌中,利用新构建的含Ｔ７噬菌体ｇ－１０核糖体结合位点（ＲＢＳ）,以及λ噬菌体ＰＲ启动子的新型原核表达载体,通过表达ｇａｇ－ｐｏｌ基因片段,获得了具有天然序列的人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）核心蛋白ｐ２４（ＣＡ）的高效表达。克隆的ｇａｇ－ｐｏｌ基因片段在其阅读框架移位区域插入了４ｂｐ碱基,其表达的病毒蛋白酶在阅读框架上与ｇａｇ一致,从而实现了对ｇａｇ－ｐｏｌ融合蛋白的有效加工,产生成熟的核心蛋白ｐ２４及其它产物。重组ｐ２４以可溶形式存在,可以被抗ｐ２４的单克隆抗体特异识别。测定的Ｎ－端７个氨基酸序列与从病毒纯化的ｐ２４完全一致,在使用硫酸铵沉淀后,采用两步离子柱层析,可将重组蛋白纯化到９５％以上的纯度。ＥＬＩＳＡ分析表明,纯化的ｐ２４可以作为特异性很强的试剂而用于ＨＩＶ感染的诊断及病情的预后,并可用于ｐ２４的生化及结构分析。     

HIV—1长末端重复序列对重组痘苗病毒表达Gag蛋白的影响

将系列缺失的ＨＩＶ１长末端重复序列（ＬＴＲ）和全长的ｇａｇＯＲＦ置于痘苗病毒载体中,经同源重组和血球吸附试验,成功地构建了６株重组痘苗病毒。免疫印迹和免疫酶试验检测均表明,６株重组病毒的Ｇａｇ蛋白表达量因ＬＴＲ不同而有明显差异,表明ＨＩＶ１的ＬＴＲ及其下游基因置于痘病毒启动子控制下,在痘苗病毒中表达时有下述特点：（１）不同的痘苗病毒启动子与全长ＬＴＲ相互作用,对ｇａｇ基因表达有显著不同的调控效果;（２）ＮＲ序列对Ｇａｇ蛋白表达没有明显影响;（３）ＥＮ序列不能被重组痘苗病毒表达系统识别;（４）ＴＡＲ序列可提高Ｇａｇ蛋白的表达量;（５）Ｕ５区及下游非翻译序列不影响Ｇａｇ蛋白的表达。     

人T细胞白血病病霉Ⅰ型env基因的克隆与表达

本文通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）,从整合有人Ｔ细胞白血病病毒Ⅰ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）的ＭＴ－２细胞株中,扩增出ＨＴＬＶ－Ｉ外膜蛋白（ｅｎｖ）的全基因（１．４５ｋｂ）,并成功地克隆入ｐＵＣ１９载体,构建成ｅｎｖ基因克隆ｅｎｖ／ｐＵＣ１９．利用原核高效表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ,在大肠杆菌中有效地表达了与谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）融合的ｅｎｖ羧基末端抗原的重组蛋白,融合基因的转录由ｔａｃ启动子调控。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明,有一约５２ｋＤ的目的蛋白带,表达量占菌体总蛋白的１０％;ＷｅｓｔｅｒＮｂｌｏｔｔ及ＥＬＩＳＡ结果显示,表达产物能与ＨＴＬＶ－Ｉ多抗血清结合。本研究为研制ＨＴＬＶ－Ｉ的诊断试剂及进一步了解ｅｎｖ的免疫学和生物学性质打下了基础。     

牛泡沫病毒反式激活因子在内部启动子上应答元件的研究

泡沫病毒的基因转录依赖至少两个不同的启动子：ＬＴＲ调节病毒结构蛋白的表达,而内部启动子（ＩＰ）则起始调节蛋白ｍＲＮＡ的转录。牛泡沫病毒（ＢＦＶ）在ｅｎｖ与３’ＬＴＲ之间有两个重叠的开放阅读框架ｏｒｆ－１和ｏｒｆ－２,分别编码ＢＦＶ ＯＲＦ－１、ＯＲＦ－２等多种调节蛋白。这此蛋白中ＢＦＶ ＯＲＦ－１为转录激活因子,称为Ｔａｓｏ Ｔａｓ对ＬＴＲ及ＩＰ均有反式激活作用。ＢＦＶ中第二类启动子ＩＰ的存在反映     

牛泡沫病毒调节蛋白功能及其在LTR上应答元件的研究

牛泡沫病毒（ＢＦＶ）具有复杂的基因组结构,其基因组除编码反转录病毒共有的ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ三个结构基因之外,在其ｅｎｖ和３’ＬＴＲ之间有两个重叠的读码框（ＯＲＦ－１和ＯＲＦ－２）,编码Ｂｏｒｆ－１、Ｂｏｒｆ－２、Ｂｅｔ等多种调节蛋白,其中Ｂｏｒｆ－１（２４９ａａ）为ＢＦＶ反式激活因子（Ｔａｓ）。为研究Ｂｏｒｆ－１的结构与功能,Ｂｏｒｆ－１在ＬＴＲ上的应答元件及作用机制,Ｂｏｒｆ－２、Ｂｅｔ等调     

HIV—1 SF2株env基因（120）在大肠杆菌中的表达

运用基因重组技术,将ＨＩＶ－１ ＳＦ２株编码外膜蛋白ｇｐ１２０的ｅｎｖ基因片段与原核载体ｐＢＶ２２０进行重组,构建成质粒ｐＢＶＳＦ２ｅｎｖ,并在大肠杆菌（Ｅ．ＣｏｉｌＤＨ１０ｂ）中获得表达,经Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ反应证实,该重组蛋白与来自ＨＩＶ－１感染者的血清（含多克隆抗体）发生特异性反应。     

人免疫缺陷病毒1型TAT突变蛋白及反义TAT RNA对TAT反式激活作用的抑制

Ｔａｔ是人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）基因组编码的反式激活因子,突变分析表明它含有几个重要的功能域。为寻找控制ＨＩＶ复制的途径,构建了以ＨＩＶ－１ＬＴＲ（－１５８－＋８０）为启动子的Ｔａｔ ｃＤＮＡ全长反义表达质粒ｐＡＳ－Ｔａｔ,并用已经构建的ＨＩＶ ＬＴＲ－１５８到＋８０为启动子,具有不同突变点的突变Ｔａｔ基因表达质粒,以荧光酶基因为报告基因,共转染Ｊｕｒｋａｔ细胞,结果发现无论是反义Ｔａｔ表达质粒还     

多聚TAR-CoreRNA诱饵对人免疫缺陷病毒1型Tat蛋白活性的抑制作用

为了抑制Ｔａｔ蛋白的反式激活作用,在细胞内大量表达外源ＴＡＲＲＮＡ使其与Ｔａｔ蛋白结合,从而竞争性抑制其与ＨＩＶ－１ＬＴＲ的ＴＡＲＲＮＡ元件结合．构建了以ＨＩＶ－１ＬＴＲＹＬ１５８（－１５８～＋１８０）为启动子,分别含有４,８和１５个拷贝的ＴＡＲ－ＣｏｒｅＲＮＡ诱饵（ｄｅｃｏｙ）表达质粒;以荧光酶基因为报告基因,检测了瞬时共转染体系中含不同拷贝数的ＴＡＲ－ＣｏｒｅＤＮＡ转录产物对Ｔａｔ蛋白反式激活作用的影响．结果证明,ＴＡＲ－ＣｏｒｅＲＮＡ诱饵对Ｔａｔ蛋白活性具有很强的抑制作用,其抑制程度与ＴＡＲ－ＣｏｒｅＤＮＡ串联体的拷贝数有关．     

中国HIV-1 B亚型P55和嵌合的P55-V3病毒样颗粒候选疫苗免疫效果的研究

研究我国艾滋病病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）病毒样颗粒（ＶＬＰ）候选疫苗的免疫原性,为疫苗进行灵长类实验提供实验依据。将ｇａｇ和ｇａｇ－Ｖ３ ＶＬＰ不同剂量（５０μｇ、１０μｇ、１μｇ）在有佐剂（氢氧化铝）和无佐剂条件下皮下免疫小鼠,然后眼眶采血,用ＥＬＩＳＡ法观察免疫鼠血清中抗体与剂量关系,以及中和抗体滴度和抗体ＩｇＧ亚型ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ的水平。同时取鼠脾淋巴细胞,体外抗原刺激后收取淋巴细胞分泌上清     

反式激活HIV—1LTR的人疱疹病毒6型（HHV—6）基因片段的初步研究

艾滋病（ＡＩＤＳ）主要是由人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）侵入人体后,破坏人的免疫系统造成的。许多流行病学研究已证明,疱疹病毒与ＨＩＶ的共感染可以导致对ＨＩＶ－１启动子的激活,并加速细胞的病理性反应〔１〕,从而加大个体对ＨＩＶ感染的敏感和加快疾病的进程。人疱...     

HIV—1Gag蛋白在大肠杆菌和重组杆状病毒系统中的高效表达及通用型 …

将中国株ＨＩＶ－１Ｂ亚型ｇａｇ全基因序列,克隆杆状病毒表达载体ｐｆａｓｔｂａｃＩ中,构建了重组质粒ｐｆａｓｔＧａｇ,利用细菌／杆状病毒表达和筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞中高效表达ＨＩＶ－１Ｇａｇ蛋白。通过改造原核表达载体ｐＢＶ２２０和ｐＥＴ２８,构建了一种新的通用型温控原核表达载体质粒ｐＶＶ５,该载体携带ＰｒＰｌ串联温控启动子及Ｈｉｓ－Ｔａｇ纯化标签,利于目的的蛋白表达与纯化。     

BIV—1—gp120在重组杆状病毒系统中的表达

将中国株ＨＩＶ－１Ｂ亚型ｇｐ１２０全基因序列克隆到杆状病毒转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＩ中多角体启动子下游,构建成重组转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＩ－ｇｐ１２０,利用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ）表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞Ｓｆ９中高效表达了ＨＩＶ－１的外膜糖蛋白ｇｐ１２０,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果一致,证明表达了２种糖基化程度不同的ｇｐ１２０。     

Epstein-Barr病毒膜抗原基因免疫的研究

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因,插入含有ＣＭＶ启动子的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３下游ＢａｍＨＩ位点,构建成真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＭＡ。将纯化的ＤＮＡ注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗ＥＢ病毒ＭＡ特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ）,特异性Ｔ淋巴细胞增生性反应及细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤作用。基因免疫与基因－蛋白联合免疫效果相似。不同启动子控制下的ＭＡ基因,诱发小鼠免疫应答无明显差异。     

竹节花黄斑驳病毒启动了在棉花维管组织中是一个强启动子

用竹节花黄斑驳病毒（Ｃｏｍｍｅｌｉｎａ Ｙｅｌｌｏｗ Ｍｏｔｔｌｅ Ｖｉｒｕｓ,ＣｏＹＭＶ）启动子－ｇｕｓ嵌合基因和ＣａＭＶ３５Ｓ－ｇｕｓ嵌合基因通过根癌土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）ＬＢＡ４４０４介导分别转入棉花（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ Ｌ．ｃｖ．Ｊｉｎｇｍｉａｎ７,Ｊ７Ｇ）,诱导再生了棉花转基因植株。Ｇ     

汉滩病毒核壳蛋白（NP）在杆状病毒系统的表达及其免疫原性研究

应用杆状病毒表达载体成功地表达了汉滩病毒７６－１１８株（ＨＴＮＶ）核壳蛋白,将ＨＴＮＶＳ基因插入杆状病毒转染质粒ｐＡｃＹＭＩＢ的多角体基因启动子下游附近,与经Ｂｓｕ３６１酶切线性化的杆状病毒（ＡｃＶＥＰＡ）ＤＮＡ共同转染Ｓ１９细胞,经空斑筛选获得了高效表达ＮＰ的重组杆状病毒（ＡｃＶＨａｎＳ）。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实,表达产物与ＨＴＮＶ毒粒ＮＰ分子量均为５０ＫＤ左右,紫外扫     

广西壮族自治区HIV—1流行毒株的基因序列测定和亚型分析

使用ＰＣＲ技术对１４份广西ＨＩＶ－１阳性感染者外周血单核细胞（ＰＢＭＣｓ）样品进行扩增,获得ＨＩＶ－１膜蛋白（ｅｎｖ）基因的核酸片段,并对其Ｃ２－Ｖ３及邻区３５０￣４５０个核苷酸序列进行了测定和分析。结果表明,１４份样品中９份为泰国Ｂ（Ｂ＇）亚型,５份为Ｅ亚型毒株。其中Ｂ＇亚型毒株的基因离散率为４．２％,与Ａ－Ｅ参考亚型及部分Ｂ亚型代表株序列相比较,与包括泰国、缅甸及云南德宏在内的Ｂ亚型毒株序列十