一种体外分析亚洲玉米螟幼虫血细胞包囊的改进方法

包囊反应是昆虫清除侵入体内的外源物如病原物和寄生生物的一种非常重要的细胞免疫反应。由于受到不便于观察、操作复杂等问题的限制,很多包囊分析实验无法或难于在昆虫体内完成。体外包囊方法在一定程度上解决了这些问题。目前常用的体外包囊是在96孔板中加入昆虫血细胞和外源物,如凝胶珠进行培养观察,但这种方法存在着一些明显的缺陷。本文以亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)幼虫血细胞为研究对象,使用0.2mL的离心管(Eppendorf tube)代替96孔板,并将其固定在匀速旋转的载体上培养,极大程度的模拟了反应物在昆虫体内的状态。结果表明,改进方法后昆虫血细胞的体外包囊效果得到明显提高,且血细胞的状态也得到明显改善;而添加抗凝剂会减弱血细胞对外源物的包囊能力。     

应用Percoll梯度分离粘虫和亚洲玉米螟幼虫主要血细胞的类型

昆虫血细胞形态多样,变异复杂,不仅给血细胞的分类带来困难,而且还影响对其生理功能的研究(傅贻玲,1982a、1982b)。为了从细胞和分子水平研究各类血细胞的特性和功能,必须制备一定数量的、形态一致的血细胞样品。因此对昆虫各类血细胞分离技术的研究十分重要,但这方面的研究报道还很少(Cook等,1985;Mead等,1986)。     

一种体外分析亚洲玉米螟幼虫血细胞包囊的改进方法

包囊反应是昆虫清除侵入体内的外源物如病原物和寄生生物的一种非常重要的细胞免疫反应。由于受到不便于观察、操作复杂等问题的限制，很多包囊分析实验无法或难于在昆虫体内完成。体外包囊方法在一定程度上解决了这些问题。目前常用的体外包囊是在96孔板中加入昆虫血细胞和外源物，如凝胶珠进行培养观察，但这种方法存在着一些明显的缺陷。本文以亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）幼虫血细胞为研究对象，使用0.2 mL的离心管（Eppendorf tube）代替96孔板，并将其固定在匀速旋转的载体上培养，极大程度的模拟了反应物在昆虫体内的状态。结果表明，改进方法后昆虫血细胞的体外包囊效果得到明显提高，且血细胞的状态也得到明显改善；而添加抗凝剂会减弱血细胞对外源物的包囊能力。     

亚洲玉米螟幼虫血淋巴的免疫反应

本文报道在注射条件下亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis 5龄幼虫血细胞对侵入物的防卫反应.实验采用的侵入物包括大肠杆菌、苏芸金杆菌、酵母菌、白僵菌和人血细胞.实验表明颗粒细胞对异物有吞噬作用,还可与浆细胞共同形成结节进行防卫;解剖发现,结节可存在于脂肪体表面.注射异物半小时后;虫体内血细胞总数骤然下降,三种主要血细胞中颗粒细胞近乎消失,而浆细胞和小球细胞的数量则有明显上升.     

转Bt基因抗虫玉米对亚洲玉米螟幼虫取食行为的影响

室内研究了转cry1Ab杀虫蛋白基因的Bt抗虫玉米MON81 0和Bt1 1对亚洲玉米螟Ostriniafurnacalis初孵幼虫和3龄幼虫的取食行为、取食选择性和存活率的影响。在48h的非选择性试验中玉米螟初孵幼虫在MON81 0和Bt1 1玉米心叶组织上的幼虫取食率随时间的增加而下降,在对照玉米上的幼虫取食率随时间的增加而上升,两者间差异极显著。初孵幼虫接虫到MON81 0和Bt1 1玉米叶片48h的累计死亡率分别为67 .5 %和47 .5 % ,而在对照玉米上死亡率均为0. 3龄幼虫在Bt和非Bt玉米穗轴组织上的幼虫取食率随时间的增加呈上升趋势,第48h时在Bt和非Bt玉米上的幼虫取食率分别达到77 5 %和1 0 0 % ,差异极显著。选择性试验中,第4～48h内,初孵幼虫在Bt玉米上的幼虫取食率呈下降趋势,第48h时MON81 0和Bt1 1与各自非Bt对照的组合中初孵幼虫的累计死亡率分别为2 5 .0 %和1 7. 5 % ,二者差异不显著。3龄幼虫在Bt玉米和非Bt玉米上的幼虫取食率均随时间的延长而增加,但在非Bt玉米的幼虫取食率增加速度快,与Bt玉米差异极显著。Bt玉米对玉米螟幼虫取食有抑制和忌避作用。     

冷诱导亚洲玉米螟幼虫产生甘油的研究

本文以亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis末龄老熟幼虫为材料,研究了冷诱导对血淋巴、脂肪体和脂肪体体外培养液甘油含量的影响.结果表明,室内人工饲养的滞育幼虫和非滞育幼虫在冷处理后,血淋巴中甘油浓度和脂肪体培养液中甘油含量都随冷处理天数的增加而增长,但滞育幼虫高于非滞育幼虫.与此同时,培养前后的脂肪体中甘油含量却随冷处理天数的增加而下降,而且培养前与培养后无明显差别.冷诱导的非滞育幼虫血淋巴中甘油的积累不受颈部结扎的影响.初冬田间滞育幼虫血淋巴中甘油浓度与冷处理35天的室内人工饲养滞育幼虫的甘油浓度相近;冬末田间滞育幼虫血淋巴中甘油浓度与冷处理95天的室内人工饲养滞育幼虫的甘油浓度相同,比初冬增长了50％左右.但冬末幼虫脂肪体培养液和培养前后的脂肪体中甘油含量都明显下降.以上结果说明亚洲玉米螟滞育幼虫和非滞育幼虫都具有对冷诱导产生反应的能力,它们的脂肪体都能在冷诱导之后合成与分泌甘油;所不同的是,滞育幼虫比非滞育幼虫产生甘油的能力更强,因而抗寒力也更大.     

丁布对亚洲玉米螟幼虫中肠组织的影响效果

丁布对亚洲玉米螟幼虫中肠组织的影响效果阎凤鸣,许祟任,李松岗,林昌善（北京大学生命科学学院北京１００８７１）环氧肪酸是禾本科植物的一类重要次生代谢产物,丁布（ＤＩＭＢＯＡ）ＩＺ,４一二羟基一７一甲氧基一（ＺＨ）－ｌ,４一苯咏嗯埃一３－（４Ｈ）一酮Ｉ是...     

亚洲玉米螟幼虫应对大肠杆菌注射的血淋巴免疫应激反应

为研究大肠杆菌Escherichia coli侵染引发亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis Guenée幼虫免疫应激反应的机理,本实验测定了分别注射生理盐水以及3×10³,3×10⁴,3×10⁵和3×10⁶个细胞/mL大肠杆菌后亚洲玉米螟5龄幼虫血淋巴中血细胞总数（THC）、颗粒细胞和浆血细胞数量,血清中酚氧化酶（PO）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）、谷胱甘肽还原酶(GR)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的活性,通过流式细胞仪分析了血细胞活性氧自由基(ROS)水平的动态变化。结果表明：与对照组相比,注射3×10⁵和3×10⁶个细胞/mL大肠杆菌细胞后12 h,可引起亚洲玉米螟5龄幼虫THC及浆血细胞、颗粒细胞数量明显上升(P<0.01),同时应激产生大量ROS。3×10⁴,3×10⁵和3×10⁶个细胞/mL大肠杆菌3个不同浓度处理组均引起幼虫体内PO活性显著升高(P<0.01),诱导幼虫血清中GSH-px,GST及GR的活性上升(P<0.01)。这些结果表明, 亚洲玉米螟幼虫受到大肠杆菌侵染后,其血淋巴细胞免疫和体液免疫能力受到显著影响, 可诱导血清中GSH-px,GST和GR活性升高以清除过多的ROS, 防止其毒害。     

玉米螟卵期寄生性天敌调查

在玉米螟卵期的寄生性天敌中,玉米螟赤眼蜂占93．51％,其它寄生蜂仅占6．49%．玉米螟赤眼蜂是卵期的优势蜂种。年度之间玉米螟卵的被寄生草差异较大。逐步回归分析表明,第2代玉米螟卵的被寄生率与第1代玉米螟卵发生量(X1),6月份温雨系数(X2),第2代玉米螟卵发生量(X2),7月上旬雨量(X4)和7月中旬雨量(X3)有极显相关(X1、X4为主要影响因于)。第3代玉米螟卵的被寄生率与7月上旬雨量(X2)、7月下旬雨日(X2)、8月上旬气温(X3),8月上旬雨量(X4)和8月下旬雨量(X5)有极显相关。由此可见,第1代卵发生量大,上代次卵发生期多雨,当代次卵发生期前少雨,当代次卵发生期多雨,有利于赤眼蜂寄生,玉米螟卵被寄生率提高。     

亚洲玉米螟滞育关联蛋白的分离和纯化

用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳, 在亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis河南种群滞育幼虫血淋巴中发现了2种滞育关联蛋白, 它们的等电点分别为5.3和4.7; 而在亚洲玉米螟上海种群滞育幼虫血淋巴中发现了1种滞育关联蛋白,等电点为4.7。亚洲玉米螟河南种群滞育关联蛋白仅在滞育幼虫血淋巴中存在。亚洲玉米螟上海种群滞育关联蛋白在滞育和非滞育幼虫血淋巴中均存在,只是它们在滞育幼虫血淋巴中的含量明显高于非滞育幼虫血淋巴中的含量。用30%～50%丙酮沉淀、SephaDex G-100凝胶过滤和MONOQ RH 5/5阴离子交换快速液相法,纯化到了高纯度(≥98%)亚洲玉米螟上海种群滞育幼虫血淋巴中的滞育关联蛋白。     

甘肃陇东玉米螟生物学特性的初步观察

米螟性诱剂试验、形态鉴定表明 ,陇东发生的玉米螟 ,以亚洲玉米螟OstriniafurnacalisGuenee为优势种 ,也有少量的欧洲玉米螟Ostrinianubialis (H櫣ｂｎｅｒ)。有效积温计算 ,年发生 1 2 4代 ,其中蛹期3 3d ,产卵前期 7d ,卵期 1 2d ,幼虫期 46d。观察表明陇东玉米螟年发生基本 1代 ,局部 2代。 7月上中旬为蛾量高峰期。阶段性人工饲养表明 ,蛹期 2 1 8d ,产卵前期 2 8d ,卵期 1 0 1d。雌蛾寿命 7 9d ,雄蛾寿命 6 4d。影响发生的重要因素是降水量和天敌。     

螟长距茧蜂、玉米螟与春玉米间相互关系的初步研究

研究表明,螟长距茧蜂发生高峰期比玉米螟成虫高峰期大约推迟6-9天,与春玉米抽雄期相一致。玉米抽雄开花时绝大部分玉米螟幼虫处在易被螟长距茧蜂寄生的Ⅲ、Ⅳ龄。玉米开花后雄穗的形态结构和营养成分发生改变,致使幼虫下垂转移寻找更适宜的食物。螟长距茧蜂被取食玉米雄穗的玉米螟幼虫所吸引。其寄生与玉米螟幼虫的发育和玉米生育期密切相关。     

叉角厉蝽对亚洲玉米螟幼虫的捕食功能反应

叉角厉蝽Eocanthecona furcellata是一种在生物防治方面有重要作用和潜力的捕食性天敌昆虫,为探明叉角厉蝽对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis幼虫的控害潜力,在室内温度26℃±1℃、相对湿度65%±10%、光周期16 L∶8 D条件下,观察了叉角厉蝽4龄、5龄若虫和成虫分别对亚洲玉米螟3龄、4龄幼虫的捕食行为,测定了叉角厉蝽对不同亚洲玉米螟密度下的捕食量、搜寻效应以及自身密度和种间干扰对捕食作用的影响。结果表明,叉角厉蝽对亚洲玉米螟的捕食功能反应符合Holling-Ⅱ功能反应模型,叉角厉蝽3个虫龄对亚洲玉米螟3龄与4龄幼虫的理论最大取食量顺序均为：成虫（30.21头）>5龄若虫（24.69头）>4龄若虫（11.96头）,相同虫龄的叉角厉蝽对亚洲玉米螟3龄幼虫的最大取食量均大于对亚洲玉米螟4龄幼虫的最大取食量。在亚洲玉米螟相同虫龄内,搜寻效应与猎物密度的增加呈负相关。在生存环境和亚洲玉米螟幼虫密度固定的条件下,其平均捕食量和搜寻效应与叉角厉蝽成虫密度的增加呈负相关。叉角厉蝽成虫与亚洲玉米螟幼虫以相同比例增加时,叉角厉蝽成虫种间会产生干扰作用。结果表明了叉角厉蝽对亚洲玉米螟具有较好的控害潜力,为今后高效利用叉角厉蝽田间防治亚洲玉米螟提供了理论依据。     

Inheritance of photoperiodic induction of larval diapause in the Asian corn borer Ostrinia furnacalis

The Asian corn borer Ostrinia furnacalis (Guenée) enters facultative diapause as fully‐developed larvae in response to short‐day conditions. As a consequence of geographical variation in photoperiodic response, moths from Nanchang (28°46′N, 115°50′E) enter diapause in response to short day‐lengths (D strain), even at the high temperatures whereas moths from Ledong (18°47′N, 108°89′E) exhibit almost no diapause under the same conditions (N strain). In the present study, crosses between the two strains are used to evaluate the inheritance of diapause under different photoperiods at temperatures of 22, 25 and 28 °C. The moths, both reciprocal crosses and backcrosses, show a clear long‐day response, similar to that of the D strain, suggesting that the photoperiodic response controlling diapause in this moth is heritable. However, the critical day‐length for induction of diapause is shorter in hybrids than in the D strain. The N strain also shows a short‐day photoperiodic response at the lower temperature of 22 °C, indicating that the N strain still has the capacity to enter a photoperiodically‐induced diapause, depending on the rearing temperature. The incidence of diapause in all crosses is highest with D strain fathers or grandfathers and lowest with N strain fathers or grandfathers, indicating that the male parent has significantly more influence on the incidence of diapause of subsequent progeny than the female. The results obtained from all crosses under LD 12 : 12 h or LD 13 : 11 h photocycles at 25 °C show that inheritance of diapause in O. furnacalis does not fit an additive hypothesis and that the capacity for diapause is transmitted genetically in the manner of incomplete dominance.     

PROTEOMICS ANALYSIS OF OVEREXPRESSED PLASMA PROTEINS IN RESPONSE TO COLD ACCLIMATION IN Ostrinia furnacalis

Many insects in temperate regions overwinter in diapause. In these insects, one of the metabolic adaptations to cold stress is the synthesis of responsive proteins. Using proteomic analysis, an investigation aimed to a better understanding of the molecular adaptation mechanisms to cold stress was carried out in Ostrinia furnacalis larva. Proteins were extracted from the larval hemolymph collected from both control and overwintering larva. By polyethylene glycol precipitation, approximately 560 protein spots were separated and visualized on two‐dimensional (2D) gels after silver staining. Eighteen protein spots were found to be upregulated in overwinter larval plasma in different patterns. As an initial work, 13 of these proteins were identified using MALDI TOF/TOF MS. The differentially overexpressed proteins include heat shock 70 kDa cognate protein, small heat shock protein (sHSP), putative aliphatic nitrilase, arginine kinase, phosphoglyceromutase, triosephosphateisomerase, and glutathione transferase. Alterations in the levels of these proteins were further confirmed by qPCR. This study is the first analysis of differentially expressed plasma proteins in O. furnacalis diapause larvae under extremely low temperature conditions and gives new insights into the acclimation mechanisms responsive to cold stress. Our results also support the idea that energy metabolism, alanine and proline metabolism, and antioxidative reaction act in the cold acclimation of O. furnacalis diapause larvae.