O’Farrell电泳的显示方法

本文对O’Farrell电泳的显示方法做了比较,特别对荧光谱技术的实际操作步骤进行了探讨。在考马斯亮蓝染色、银染、放射自显影及荧光谱四种方法中,荧光谱是最为灵敏的方法之一,且其结果显示时间较之放射自显影又大大缩短。     

蛋白质组学研究中的对角线电泳

经典的蛋白质组学研究方法包括IEF/SDS-PAGE双向电泳和质谱技术的联用,但由于IEF的一些不足,限制了其应用范围。对角线电泳是蛋白质组学研究中的一项特殊分离技术,由于其原理与IEF/SDS-PAGE不同,正逐渐成为蛋白质组学中电泳分离技术的重要补充,特别是在膜蛋白和蛋白质相互关系的研究中将起到重要作用。本文综述了对角线双向电泳技术的特点、发展和在蛋白质组学研究中的最新进展,比较了双向电泳和对角线电泳的优缺点,展望了对角线电泳在蛋白质组学研究中的应用前景。     

低温对不同耐寒性橡胶树叶片抗氧化能力的影响

为了探讨低温胁迫对橡胶树耐寒新品种‘湛试327-13’和不耐寒品种‘文昌217’叶片抗氧化能力的影响,以橡胶嫁接苗为材料,模拟8℃/8℃(昼/夜)的低温胁迫,在4d内每天连续测定叶片抗氧化酶活性以及相关的生理参数,再通过激光共聚焦显微镜观察气孔保卫细胞H2O2荧光密度。结果发现:(1)低温胁迫使‘湛试327-13’和‘文昌217’叶片超氧阴离子产生速率、SOD、CAT和POD及APX活性均出现先升后降的趋势,且在整个低温胁迫中,‘湛试327-13’的各抗氧化酶活性均高于‘文昌217’;低温胁迫使‘湛试327-13’的H2O2含量在处理第1天后就达到最大值,‘文昌217’则在第3天才达到最大值。(2)两个品种叶片的H2O2含量和气孔保卫细胞的H2O2荧光强度在低温胁迫后的表现规律与上述指标基本一致。研究表明,‘湛试327-13’叶片超氧阴离子和H2O2快速积累,可能起到能促进抗氧化酶活性的提高,以及降低膜质氧化胁迫程度和TBARS含量的作用;且同时保持了较高的相对含水量和较低的相对电导率,从而提高了其对低温胁迫的耐性。     

果蝇亚群中六个种的求爱歌的研究：对ipi作用的探究

据认为果蝇求爱歌的脉冲间隔(ipi)在种特异性配偶认识系统(SMRS)中起着重要的作用。果蝇D.takahashii亚群中各物种求爱歌的ipi值和种间亲缘关系的相关性如何?迄今尚未见报道。我们测定了此亚群中能饲养存活的6个种的ipi,并用O’Farrell双向电泳方法及杂交实验研究了它们之间的亲缘关系。在近缘种D.takahashii和D.lutescens之间,D.takahashii和D.paralutea之间,D.lutescens和D.paralutea之间,其求爱歌的ipi值,不论平均数或众数都相差甚远。而D.paralutea和D.prostipennis是2个亲缘关系较远的种,两者不能杂交,但其ipi的平均数在统计学上无差异,众数亦很相近。本实验可导出这样的见解:ipi值在不同果蝇种群或亚群的SMRS中的作用可能并不相同。在D.takahashii亚群中ipi值对于杂交成败似乎不起支配性作用。     

消息

化学工业出版社书讯RNA 分离与鉴定实验指南R. E. 法雷尔(Robert E. Farrell)编, 金由辛等译 16 开估价: 80 元 2007 年 9 月出版 ISBN 7- 5025- 9625     

蝾螈原肠胚外胚层诱导处理后蛋白质的双向电泳

用O′Farrell根据蛋白质等电点与分子量的双向电泳法,分析东方蝾螈早期原肠胚外胚层诱导处理后,其蛋白质合成的变化。双向电泳上的蛋白质用银染法显色。结果表明,用豚鼠骨髓抽提液处理后向中胚层分化的外胚层,其蛋白质的图谱在诱导后二天内未见变化,五天出现较明显的变化,有新蛋白的形成。经缺钙处理向神经分化的外胚层,其蛋白质的图谱在处理后的二天和四天都未发现新的蛋白质点,但在4天组中有不少蛋白质浓度下降以及消失。结果说明,诱导分化过程中,在显示明确的形态学特征之前,蛋白质的量与质的变化或多或少就已经开始了,经过不同的诱导处理后,外胚层细胞向中胚层或神经分化过程中,蛋白质的组成是截然不同的。     

大脑中的GPS系统——解读2014年诺贝尔医学或生理学奖

<正>我们的大脑是如何感知空间方位的?它又是如何引导我们回家的?什么时候该转弯?什么时候该停下来?虽然这些问题时时刻刻都在发生着,但也许你从来都没有注意到或是问过自己这些问题。随着2014年诺贝尔医学或生理学奖授予了O’Keefe和Moser夫妇关于空间认知方面的研究工作,这些问题也引起了当下大众的兴趣。笔者顺水推舟,为大家解读一下今年获得诺奖的主要工作和贡献。空间认知领域的开辟1971年,John O’Keefe和Dostrovsky的一篇文     

光敏核不育水稻61kD特异性蛋白质的纯化和N—端序列分析

用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳和制备型等电聚焦纯化了曾报道的光敏核不育水稻 (Oryza sativa)农垦 58S叶绿体的特异性蛋白质 P2 ,得到 SDS- PAGE和等电聚焦 (IEF )纯的 P2。经 SDS- PAGE和 IEF测定 ,该纯蛋白质的分子量是 61 k D,等电点是 5.8。现称 P2为 P61。氨基酸序列分析表明 P61的 N-端氨基酸序列与水稻和大麦叶绿体 ATPaseβ亚基的 N-端氨基酸序列同源。     

新的水稻谷蛋白α—1亚基缺失突变体

从水稻受精卵MNU处理后代中获得4个谷蛋白α－1亚基缺失突变品系。SDS－PAGE和IEF分析表明这些突变体在共同缺失1条pI6.82多肽的同时,或形成新的多肽,或其他多肽表现量增加,这些突变体是由结构基因控制的,IEF分析同时显示2条多肽pI6.82和pI8.58源自同一条谷蛋白前驱体。这4个突变体对于改良水稻谷蛋白品质、研究谷蛋白生物合成遗传调控机制以及揭示谷蛋白基因功能是不可多得的研究材料。     

草酸氧化酶在水稻胚芽鞘衰老中的作用

草酸氧化酶（OxO）催化草酸氧化产生CO2和H2O2,其在植物发育及防御过程中可能具有重要作用。本文以水稻品种‘湘糯1号’（‘Xiangnuo 1’）为材料,对胚芽鞘中的OxO及其生理功能进行了研究。结果表明,胚芽鞘中的H2O2含量在其衰老时增加;OxO活性在浸种后96h时较低,之后也迅速增加,在240h达到最高;而可溶性蛋白、O2-·和草酸含量以及过氧化氢酶（CAT）活性则随着胚芽鞘的衰老迅速降低。由于H2O2能够诱导细胞死亡,推测OxO可能通过降解草酸产生H2O2参与胚芽鞘的衰老。     

白叶枯病菌胞内蛋白的提取及电泳分离方法的构建

水稻白叶枯病菌已成为研究植物-病原物互作模式的病菌。要利用蛋白质组学方法深入研究其生物学特性和致病机理,人们面临着其胞内蛋白提取和有效分离方法尚未建立的问题。本文采用TCA丙酮沉淀法和裂解液沉淀法提取白叶枯病菌胞内蛋白,利用两种等点聚焦程序(IEFⅠ,IEFⅡ)进行一向等电聚焦,用三种蛋白上样浓度(400μg,600μg,800μg)进行双向电泳,G-250烤染后,通过Imagemaster软件对双向电泳图谱进行比较分析。结果表明,裂解液沉淀法、等电聚焦程序Ⅱ(IEFⅡ)、600μg上样浓度三者相结合的方法是提取和分离白叶枯病菌胞内蛋白的理想方法,能获得较好的实验效果。该方法的建立为白叶枯病菌蛋白质组学研究奠定基础。     

干旱高温复合胁迫下sHSPs基因在不同耐旱性玉米中的表达差异及其对ABA和H2O2的响应

以4个玉米(Zea mays L.)品种——‘郑单958’(耐干旱)、‘浚单20’(耐高温)、‘隆玉602’(耐干旱高温复合胁迫)和‘驻玉309’(对3种胁迫均敏感)为实验材料,分别采用脱落酸(ABA)及其抑制剂氟定酮(F)、H2O2及其清除剂碘化钾(I)和丙酮酸钠(P)预处理,探讨干旱高温复合胁迫下小热休克蛋白(sHSPs)在不同耐旱性玉米品种中的表达以及ABA和H2O2对其表达的影响。结果显示:(1)高温、干旱高温复合胁迫诱导的sHSP16.9、sHSP17.2、sHSP17.4、sHSP17.5、sHSP22和sHSP26等6个sHSPs基因表达增加量明显高于干旱和对照。(2)在6个sHSPs中,sHSP17.2基因仅在‘郑单958’中表达;sHSP16.9、sHSP17.4和sHSP26基因在‘隆玉602’中表达增加量最高,在‘驻玉309’中表达增量最低;sHSP17.5和sHSP22基因在‘郑单958’中表达增加量最高,在‘驻玉309’中最低。(3)ABA、F、I和P预处理后,对干旱高温复合胁迫诱导的6个sHSPs基因表达增加量仅有略微影响,但显著影响了sHSP26的蛋白表达。研究表明,sHSPs在不同耐旱性玉米品种中的表达存在显著差异,ABA和H2O2仅稍微提高了sHSPs基因表达,但显著提高了sHSP26蛋白表达,这些结果为进一步研究植物在多胁迫条件下耐逆机理奠定了基础。     

NaCl胁迫对菜用大豆种子膨大过程中抗氧化系统及渗透调节物质的影响

采用蛭石栽培试验,在100mmol.L-1 NaCl胁迫下,对耐盐性不同的两个菜用大豆品种种子膨大、抗氧化系统及渗透调节物质进行了研究。结果显示:(1)耐盐品种‘绿领特早’种子干质量及大小的增加在NaCl胁迫15d时未受显著影响,而盐敏感品种‘理想高产95-1’种子的膨大受到了显著抑制。(2)NaCl胁迫导致菜用大豆种子超氧阴离子(O2.-)、过氧化氢(H2O2)及丙二醛(MDA)的过量积累,但‘绿领特早’种子的相对积累量均低于‘理想高产95-1’。(3)与‘理想高产95-1’相比,‘绿领特早’在NaCl胁迫期间维持了相对较高的超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)及谷胱甘肽还原酶(GR)活性,以及较高的抗坏血酸(AsA)、可溶性蛋白和可溶性糖含量;胁迫中期维持了相对较高的过氧化物酶(POD)活性,胁迫后期维持了相对较高的过氧化氢酶(CAT)活性;胁迫前中期维持了相对较高的谷胱甘肽(GSH)含量。研究发现,‘绿领特早’种子在NaCl胁迫期间能够保持较高且协调平衡的保护酶SOD、POD、CAT活性和较高的AsA-GSH循环效率,同时维持了较强的渗透调节能力,有效抑制了O2.-和H2O2的过量积累,进而有效降低了细胞膜质过氧化程度,这可能是其耐盐性较强的重要原因之一。     

薄层等电聚焦技术

等电聚焦(Isoelectrofocusing,缩写IEF或EF)是1966年由瑞典科学家Harry Rilbe和Olov Vesterbery建立的一种高分辨的蛋白质分离分析新技术.它的基本原理是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点的不同在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋白质的分离分析.     

桂花开花进程中花瓣色素、可溶性糖和蛋白质含量的变化

以软叶丹桂(O smanthus fragrans‘Ruanye Dangu i’)、柳叶银桂(O.fragrans‘Liuye Y ingu i’)和四季桂(O.fra-grans‘Sijigu i’)3个桂花品种为试材,研究了桂花不同品种开花和衰老过程中的花瓣色素、可溶性糖和蛋白质等的变化。结果表明:(1)从初花期到盛花期再到衰老期,类胡萝卜素和花青素的含量先升高再下降,与花瓣颜色深浅变化一致,表明不同时期花色的变化主要由色素的含量变化所引起。(2)3个桂花品种花瓣的含水量、可溶性糖和可溶性蛋白质的含量均呈下降趋势,而花期较长的软叶丹桂比柳叶银桂和四季桂降幅要低,而柳叶银桂和四季桂之间差异不显著。     

大肠杆菌新的O抗原组

1963一1964年在北京、天津地区,自44例婴儿腹泻患者大便中分离到344株大肠杆菌,经过血清学研究,证明为大肠杆菌新的O抗原组,暂称之为“pt’O抗原组。其O抗原与已知的大肠杆菌。抗原不同,仅与O 114的。抗原有关,它所具有的K抗原为B抗原,与已知的大肠杆菌K．K。。的B抗原亦不相同,为一新的B抗原。经过临床及流行病学观察,证明此。抗原组为我国致病性大肠杆菌肠炎的重要病原之一。     

大蒜叶片活性氧及保护酶系对白腐病菌粗毒素胁迫的响应

以大蒜抗病品种‘汉中红皮’和感病品种‘改良蒜’为材料,研究了它们在苗期用白腐病菌毒素处理后的叶片细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及超氧阴离子(O2-.)和丙二醛(MDA)含量的动态变化。结果表明,白腐病菌粗毒素处理后,2个品种大蒜叶片的SOD、POD活性均升高,而CAT活性降低;抗病品种的SOD、POD和CAT活性均高于感病品种,且SOD、POD活性峰值出现早,并以POD对毒素胁迫最敏感。2个品种在白腐病菌粗毒素处理后的O2.-含量始终高于同期对照,而感病品种O2.-含量在毒素处理24h后均高于同期抗病品种。MDA含量变化趋势与O2.-的变化基本相似。研究认为,大蒜叶片的活性氧含量和保护酶活性与其抗病性密切相关。     

桉树木栓形成层脱落期间抗氧化物酶活性与DNA动态分析

以桉树品种‘3229’和‘U6’的木栓形成层为材料,比较分析了其从形成到脱落期间,3种抗氧化物酶(POD、SOD、APX)和LOX的活性,以及叶绿素、MDA、H2O2和DNA含量的动态变化.结果显示:随着2个品种木栓形成层衰老的加剧,叶绿素的含量均下降,但MDA含量、H2O2含量和LOX活力均增加.品种‘3229’木栓形成层成熟期的SOD活性显著高于形成期和脱落期,但形成期与脱落期的酶活性却无显著差异;品种‘U6’木栓形成层成熟期SOD的活性也为最高,但各时期间的SOD活性差异不显著.品种‘3229’和‘U6’的木栓形成层从形成期到成熟期APX活性均呈显著增加趋势,但成熟期后活性均又呈下降趋势.品种‘3229’木栓形成层的POD活性在成熟期到脱落期期间显著增加,而品种‘U6’却在形成期到成熟期显著增加.两品种DNA的动态分析电泳结果表明,桉树木栓形成层的脱落很可能包括细胞程序化死亡过程(PCD).     

超级杂交水稻谷粒产量与叶光合速率的关系

在2000～2005年期间,通过测定几种超级杂交水稻与普通杂交水稻‘汕优63’的产量构成和叶片光合作用探讨了谷粒产量与光合作用的关系。结果表明:(1)4种超级杂交水稻‘培矮64S/E32’、‘P88S/O293’、‘金23A/611’和‘GD-lS/ RB207’的产量水平显著高于‘汕优63’,是对照的108%～120%。(2)与‘汕优63’相比,这些超级杂交水稻的株型好,上层叶片直立,穗大即每穗粒数多,是对照的125%～177%。(3)与‘汕优63’相比,这些组合第二叶的净光合速率显著提高,但第一叶即剑叶的未必都较高。(4)去半叶处理降低了‘GD-1S/RB207’的结实率,而去半穗处理显著提高了结实率。因此,这些超级杂交水稻的高产原因在于穗大、株型好以及群体光能利用效率高。增加单叶特别是剑叶的光合能力是克服谷粒产量的光合产物源限制和在未来的超级杂交水稻育种中实现产量潜力新突破的关键。     

不同施肥处理对桂花品种‘浦城丹桂’幼苗生长和生理的影响及施肥成本分析

采用L9(33)设置3因素(包括氮、磷和钾肥)3水平(N单株施用量分别为0、10和20 g,P2O5单株施用量分别为0、4和8 g,K2 O单株施用量分别为0、6和12 g)正交实验,在2015年3月和4月分2次施肥,对9个施肥处理组施肥前后2年生桂花品种‘浦城丹桂’( Osmanthus fragrans ‘Pucheng Dangui’)幼苗的生长和生理指标进行测定;并采用Pearson相关性分析法和回归分析法分别对各指标间的相关性以及各生长指标与施肥成本的关系进行分析。结果表明：与对照组( N、P2 O5和K2 O单株施用量均为0 g)相比,各处理组幼苗的株高和地径增长量及全株干质量总体上显著提高(P<0.05)。3月份至10月份,各处理组幼苗叶片的叶绿素a(Chla)和叶绿素b(Chlb)含量总体呈先升高后降低的变化趋势,并在12月份明显升高;而施肥后(6月份至12月份)各处理组叶片的Chla/Chlb比值总体呈先降低后升高的变化趋势,并且在12月份显著高于对照组。施肥后,各处理组叶片的SOD和POD活性及可溶性蛋白质含量也呈先高后低的变化趋势。相关性分析结果表明：施肥后,全株干质量与株高增长量和地径增长量呈极显著正相关(P<0.01),并与POD活性呈显著负相关;株高增长量与地径增长量和Chla/Chlb含量比值分别呈极显著和显著正相关;Chla含量与Chlb含量和可溶性蛋白质含量分别呈极显著和显著正相关。回归分析结果表明：单株施肥成本与幼苗的株高增长量和地径增长量及全株干质量均呈线性关系,且均呈极显著正相关;其中, A8(N、P2O5和K2O单株施用量分别为20、8和6 g)和A7(N、P2O5和K2O单株施用量分别为20、4和0 g)处理组的幼苗生长指标较高且差异不明显,但A8处理组的单株施肥成本高于A7处理组。研究结果表明：氮、磷和钾肥合理配施能够有效调节‘浦城丹桂’幼苗叶片的光合色素含量和抗氧化酶活性,并可促进幼苗生长。综合考虑施肥成本和生长指标,单株分别施用N和P2 O520和4 g较适宜‘浦城丹桂’幼苗的生长。