人心肌型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备及定量检测试剂盒的研制

目的：利用抗心肌型脂肪酸结合蛋白单抗,研制定量检测心肌型脂肪酸结合蛋白（ H-FABP ）的ELISA试剂盒。方法使用基因重组H-FABP免疫小鼠,以杂交瘤技术制备特异性抗H-FABP单抗,用这些单抗研制定量检测H-FABP的ELISA 试剂盒。结果筛选获得2株稳定分泌抗H-FABP单抗的杂交瘤细胞株,研制了定量检测H-FABP的ELISA试剂盒,灵敏度达到0．2 ng/mL,线性范围0．4～25 ng/mL,r2＝0．9967,回收率在97．2％～104．5％,精密度的变异系数（CV）≤6．72％;应用此试剂盒检测健康人血浆H-FABP,含量为1．87～8．50 ng/mL。结论所研制的ELISA试剂盒有较好的灵敏度及特异性,可用于人血浆中H-FABP含量的检测。     

三聚氰胺胶体金免疫层析试纸条的研制

通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的三聚氰胺抗原检测方法,对奶制品及饲料中的三聚氰胺残留水平监测提供参考。用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,标记纯化的三聚氰胺单克隆抗体,喷于试纸的金标垫。将MEL-OVA(三聚氰胺和卵清白蛋白的偶练物)和纯化的羊抗鼠IgG分别喷于试纸的T(检测线)处和C(质控线)处,通过挑选试纸条材料和调试工艺参数,并最终组装成试纸条。结果显示,制备的试纸监测体系方法检出限为50 g/L。试纸条对牛奶、奶粉和饲料中的三聚氰胺残留的检出限分别为100 g/L、100 ng/g和200 ng/g。将该法与LC-MS/MS法对比检测牛奶、奶粉和饲料样品,在试纸条检测范围内,与LC-MS/MS法检测结果一致性好,从而验证了该方法的有效性。制备的三聚氰胺胶体金检测试纸在常温干燥环境下至少可保质6个月,能够检测出三聚氰胺含量大于50 g/L的样品,适用于现场实际样品三聚氰胺残留水平监测,具有良好的应用前景。     

胶体金免疫层析法视黄醇结合蛋白检测试剂对肾小管功能损伤的诊断价值评价

目的:对胶体金免疫层析法的视黄醇结合蛋白(RBP)检测试剂诊断肾小管损伤的价值进行评价。方法:选择上海柏纳生物技术有限公司生产的视黄醇结合蛋白检测试剂盒(胶体金免疫层析法)与上海太阳生物技术有限公司生产的RBP含量测定试剂盒(酶联免疫法)进行对比试验,分别对临床选取的病例组和对照组的尿液样本进行检测。参考临床单位诊断标准,酶联免疫法结果浓度≥300ng/mL为阳性,<300ng/mL为阴性;胶体金免疫层析法检测结果检测线显色为阳性,不显色为阴性。对两组检验结果进行Kappa一致性检验,分析两种检测方法诊断结果的一致性,同时以临床通用诊断方法为参考,计算胶体金免疫层析法诊断肾小管功能损伤的灵敏度和特异度。结果:两种检测方法的诊断结果一致性良好(市一医院:K=0.9070,95%CI:0.8277～0.9863,P<0.01;市六医院:K=0.9391,95%CI:0.8714～1.000,P<0.01)。胶体金方法诊断肾小管损伤的灵敏度和特异度,市一医院:灵敏度=100%,精确95%CI为:92.45%～100.00%;特异度=91.80%,精确95%CI为:81.90%～97.28%;市六医院:灵敏度=100%,精确95%CI为:91.40%～100.00%;特异度=95.00%,精确95%CI为:86.08%～98.96%。结论:胶体金免疫层析法的视黄醇结合蛋白检测试剂与已批准上市的试剂等效,对肾小管功能损伤的诊断具有重大应用价值。     

抗心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体制备、鉴定和在侧向免疫层析方法中的应用

目的:制备抗心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),并建立侧向免疫层析方法检测血浆中H-FABP。方法:用H-FABP蛋白免疫纯系Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术建立能稳定分泌抗人H-FABP的单克隆杂交瘤细胞株。常规制备腹水,纯化后得到特异性抗H-FABP单克隆抗体,进行效价、特异性、亲和力的鉴定分析,并在ELISA平台进行抗体配对,用所筛选到的抗体对初步建立了检测H-FABP的侧向免疫层析方法。结果:成功获得12株稳定分泌抗体的阳性细胞株,并筛选出能相互配对,并应用于侧向免疫层析平台的抗体3D1和5F4,检测临床样品与对照试剂比较总符合率为100%。结论:筛选能稳定分泌抗体的细胞株,配对抗体应用于侧向免疫层析检测方法中,能快速、特异、灵敏的检测出临床样品中H-FABP,为临床应用快速检测H-FABP指标提供了方法和关键材料。     

人心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的临床评价

目的评价人心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)检测试剂盒(胶体金法)在急性心肌梗死(AMI)诊断中的价值。方法采用平行、盲法、对照的对比试验设计,比较其试验产品和对比产品对诊断AMI的敏感性、特异性、准确性。结果共测定240份临床血液标本。试验产品和对比产品的阳性符合率为100%,阴性符合率为96.15%,总符合率为97.92%。对比产品和试验产品结果不一致的5例标本以临床诊断结果为标准进行验证后,试验产品与临床诊断结果的阳性符合率为100%,总符合率为100%。采用Kappa检验考核两种产品测定结果的一致性,Kappa指数为0.958。经McNamara's test分析,两产品之间无差异,χ2=3.20,P>0.05。结论试验产品显示出较好的诊断价值,可以作为AMI早期诊断标志物,试验产品与对比产品等效。     

肝型脂肪酸结合蛋白研究进展

肝型脂肪酸结合蛋白（liver fatty acid binding protein,L-FABP）是脂肪酸结合蛋白（fatty acid binding proteins,FABPs）家族重要的成员,在肝脏、小肠、肾脏等组织中均有表达。L-FABP在不饱和脂肪酸、饱和脂肪酸、胆固醇、胆汁酸等转运过程中扮演重要角色。目前研究显示L-FABP在脂肪肝、肝硬化以及肝癌发生发展中起到重要作用,并有望作为肝损伤的早期检测指标。此外,新近研究发现尿中L-FABP水平还可以用于预测1型糖尿病患者的临床结局。在2型糖尿病中,尿中L-FABP与糖尿病性肾病的病程有密切关系。主要就L-FABP的特性、结构及其与疾病的关系做一综述。     

鲤疱疹病毒Ⅱ型抗体胶体金检测试纸条的制备和分析

【背景】由鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus-2, CyHV-2)引起的疱疹病毒性造血坏死病在鲫和金鱼中的暴发给水产养殖业造成了巨大的经济损失。【目的】开发一种快速、现场检测鲫是否感染过CyHV-2和监测鲫CyHV-2IgM抗体水平的胶体金检测试纸条。【方法】将CyHV-2与胶体金结合作为金标抗原、Protein A作为检测线、兔源rORF66多克隆抗体进行划线作为质控线,分析胶体金试纸条最佳制备及组装条件,确定胶体金标记最适pH、金标抗原最适浓度,以及检测线(test line, T线)、质控线(control line, C线)最适划线浓度等。【结果】本研究制备的CyHV-2抗体胶体金试纸条可以使用全血测试,与常见的其他鱼类抗体血清无交叉反应,如草鱼呼肠孤病毒抗体阳性血清、鳜虹彩病毒抗体阳性血清等。试纸条最低限度可以检测到1:100稀释的阳性血清抗体,由试纸条检测线的深浅可以初步判断鱼体中抗体水平。试纸条通过对10条鲫鱼血清样品检测并和金鱼造血器官坏死病毒检测方法(GB/T 36194—2018)进行Kappa分析,Kappa值为0.80,表明二者有较高的符合...     

肝型脂肪酸结合蛋白研究进展

肝型脂肪酸结合蛋白(liver-type fatty acid binding protein,L-FABP,FABPI)是脂肪酸结合蛋白家族的成员之一,主要在肝脏、小肠、肾脏及胰腺等组织细胞中有表达.研究发现,L-FABP与脂肪酸的摄取、转运、代谢调节有关.近年研究表明,肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)与肿瘤、肾脏疾病、脂肪肝、肥胖、糖尿病等多种疾病的发生发展密切相关.本文就肝型脂肪酸结合蛋白的分子结构、功能以及与疾病的关系作一综述.     

胶体金免疫层析试纸条技术在病毒检测领域的应用研究现状北大核心CSCD

胶体金免疫层析试纸条技术是一种快速、灵敏和精准的固相标记检测技术,胶体金免疫层析试纸条具有价格低廉、操作简便、检测快捷和特异性强的优点,具有在短时间内灵敏、准确地定性检测出相关病毒的潜在能力,有效解决传统检测方法在医学、兽医、动植物病毒检测和农药残留检测等领域存在检测时间长、设备不便和专业性强的弊端。目前在检测领域,该技术在检测细菌性疾病、病毒性疾病和预防传染性疾病大面积扩散等方面都有应用,因此,该技术在检验方面具有巨大的发展空间。文中主要对胶体金免疫层析技术进行综述,并对该技术在生物病毒检测方面进行总结和展望。     

人心脏型脂肪酸结合蛋白快速检测试剂盒的临床验证性研究

目的评价H-FABP快速检测试剂盒对急性心肌梗死(AMI)的早期诊断效果。方法比较H-FABP、CK、CK-MB和cTnT四种心肌标志物在AMI发作后6 h内的敏感性、准确性和时效性;比较H-FABP快速检测试剂盒对AMI患者和非AMI患者诊断的特异性。结果 H-FABP快速检测试剂盒的检测结果与临床诊断结果符合率为100%;在AMI发作后6 h内,H-FABP的敏感性和准确性优于CK、CK-MB,与cTnT相当。8例肾衰竭患者100%显示阳性,心源性疾病中主动脉关闭不全有1例(2.44%),房间隔缺损有2例(4.88%)显示阳性。结论 AMI发作后6 h内,H-FABP快速检测试剂盒对其具有较好的诊断价值。     

人心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)的原核表达、纯化和冻干品的制备

目的：获得重组人心型脂肪酸结合蛋白,分析其活性及制备冻干品。方法：从GenBank中检索人源H-FABP CDs 序列,合成基因后构建原核表达载体pET-28a（+）-H-FABP。将表达载体转入E.coli BL21（DE3）,摸索pET-28a（+）-H-FABP最佳诱导条件,表达并纯化重组蛋白。使用检测试剂检测纯化后的重组H-FABP活性,研究最佳冻干方案并考察冻干品的稳定性。结果：经过优化诱导条件,重组H-FABP在BL21（DE3）中以可溶性蛋白形式表达。诱导条件为OD₆₀₀≈0.6,IPTG终浓度0.4mmol/L,30℃诱导4h。通过Ni²⁺亲和层析纯化可得到纯度大于95%的重组H-FABP蛋白。重组H-FABP冻干品可以在37℃稳定保存12d,25℃、4℃稳定保存至少4个月。结论：本项研究中的重组H-FABP表达体系成熟、蛋白活性高,冻干品稳定性好,为后续研究提供了稳定高效的生物原材料。     

血清H-FABP和S-100B 在急性脑梗死患者早期诊断及病情评估中的应用

目的:探索血清心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和S-100B蛋白(S-100B)在急性脑梗死(ACI)患者早期诊断及病情评估中的应用。方法:选择自2012年9月至2015年3月我院收治的ACI患者91例作为观察组,根据Adama分型法、神经缺损程度和不同的病发时间进行分组,另外选取健康体检者73例作为对照组。采集受试者血液,应用酶联免疫吸附法检测血清中H-FABP和S-100B水平,并进行相关性分析。结果:观察组患者发病后第1、3、12 h血清中H-FABP和S-100B水平明显高于对照组(P0.05)。观察组患者血清中H-FABP水平发病第1 h开始升高,在第3 h达到最高水平,之后开始逐渐下降;S-100B水平变化趋势同H-FABP,发病第12 h达到最高水平,之后开始下降。病灶直径越大,患者血清中H-FABP和S-100B水平越高,且组间差异均具有统计学意义(P0.05);重度神经缺损患者血清中H-FABP和S-100B水平明显高于中度和轻度缺损患者,中度神经缺损患者血清中H-FABP和S-100B水平显著高于轻度缺损患者(P0.05);ACI患者血清中H-FABP和S-100B水平与病灶直径和神经缺损程度呈正相关(P0.05)。结论:ACI患者血清中H-FABP和S-100B水平可以作为疾病的早期诊断标准之一,同时可以准确评估病情发展,对于临床检测和确诊具有重要意义,值得在临床上广泛使用。     

Highly sensitive recombinant antibodies capable of reliably differentiating heart-type fatty acid binding protein from noncardiac isoforms

During recent times, heart-type fatty acid binding protein (hFABP) has gained increasing credence as a promising cardiac biomarker. This is largely due to its rapid myocardial release and subsequent clearance kinetics, which are superior to those of myoglobin and offer an earlier diagnostic window than the troponins. Realization of its full diagnostic and prognostic potential is dependent on accessibility to robust hFABP-specific assays. Here we describe a rational strategy for generation and screening of hFABP-specific avian-derived recombinant antibodies. These antibodies were confirmed to be exquisitely specific for hFABP, with no cross-reactivity observed in a representative panel of the most homologous non-heart-type FABP isoforms. All of the antibodies tested exhibited single-figure nanomolar affinities, and their analytical potential was demonstrated in a simple inhibition enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) format that returned an impressive limit of quantitation (LOQ) value of 1.9 ng/ml. The cumulative results underline the potential value of these antibodies as enabling reagents for use in a variety of immunodiagnostic configurations.     

H-FABP、cTnI及copeptin在老年急性非ST段抬高型心肌梗死患者早期诊断中的应用价值

目的:研究心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、肌钙蛋白I(cTnI)及和肽素(copeptin)在老年急性非ST段抬高型心肌梗死患者早期诊断中的应用价值。方法:选取2016年2月-2018年2月我院收治的老年急性非ST段抬高型心肌梗死患者60例为研究对象,记为观察组。另取同期于我院接受治疗的心绞痛患者50例记为对照组。分别比较患者H-FABP与cTnI阳性、阴性分布情况以及copeptin表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析H-FABP、cTnI、copeptin以及三项联合检测老年急性非ST段抬高型心肌梗死的早期诊断价值。结果:观察组患者H-FABP与cTnI阳性人数占比均高于对照组(P0.05)。观察组患者copeptin表达水平高于对照组(P0.05)。H-FABP、cTnI及copeptin等3个指标均具有一定的早期诊断价值,H-FABP+cTnI+copeptin联合检测的敏感度和特异度更高,分别为86.46%和87.15%。结论:老年急性非ST段抬高型心肌梗死患者H-FABP、cTnI、copeptin表达较高,联合检查上述三项指标水平可提高临床诊断价值。     

Increased glucose oxidation in H-FABP null soleus muscle is associated with defective triacylglycerol accumulation and mobilization, but not with the defect of exogenous fatty acid oxidation

Heart-type fatty acid-binding protein (H-FABP) is a major fatty acid-binding factor in skeletal muscles. Genetic lack of H-FABP severely impairs the esterification and oxidation of exogenous fatty acids in soleus muscles isolated from chow-fed mice (CHOW-solei) and high fat diet-fed mice (HFD-solei), and prevents the HFD-induced accumulation of muscle triacylglycerols (TAGs). Here, we examined the impact of H-FABP deficiency on the relationship between fatty acid utilization and glucose oxidation. Glucose oxidation was measured in isolated soleus muscles in the presence or absence of 1 mM palmitate (simple protocol) or in the absence of fatty acid after preincubation with 1 mM palmitate (complex protocol). With the simple protocol, the mutation slightly reduced glucose oxidation in CHOW-muscles, but markedly increased it in HFD-muscles; unexpectedly, this pattern was not altered by the addition of palmitate, which reduced glucose oxidation in both CHOW- and HFD-solei irrespective of the mutation. In the complex protocol, the mutation first inhibited the synthesis and accumulation of TAGs and then their mobilization; with this protocol, the mutation increased glucose oxidation in both CHOW- and HFD-solei. We conclude: (i) H-FABP mediates a non-acute inhibition of muscle glucose oxidation by fatty acids, likely by enabling both the accumulation and mobilization of a critical mass of muscle TAGs; (ii) H-FABP does not mediate the acute inhibitory effect of extracellular fatty acids on muscle glucose oxidation; (iii) H-FABP affects muscle glucose oxidation in opposing ways, with inhibition prevailing at high muscle TAG contents.     

Rapid analysis of fatty acid-binding proteins with immunosensors and immunotests for early monitoring of tissue injury

Fatty acid-binding protein (FABP) holds promise for early detection of tissue injury. This small protein (15 kD) appears earlier in the blood than large proteins after cell damage. Combined its characteristics of high concentration tissue contents and low normal plasma values provide the possibility of a rapid rise above the respective reference values, and thus an early indication of the appearance of tissue injury. A general review was presented on the current status of different types of FABP for the detection of tissue injury in patients with myocardial injury, brain injury and also in athletes or horses with skeletal muscle injury.

To take full advantage of the characteristics of the early marker FABP, rapid analysis is a crucial parameter. In this review, an overview of the development of immunoassay for the quantification of FABP in buffer, plasma or whole blood was outlined. The characteristics of different FABP immunosensors and immunotests were described. The feasibility of these immunoassays to be used in routine clinical practice and in emergency case was also discussed.

Nowadays, the improved automated immunoassays (e.g. a microparticle-enhanced turbidimetric immunoassay), less time-consuming bedside immunosensors and immunotests (e.g. a one-step FABP lateral flow immunotest), are the main advance technology in point-of-care testing. With these point-of-care tests, the application of FABP as an early tissue injury marker has a great potential for many clinical purposes.     

外源性铜对SD鼠脑内铜稳态与γ-氨基丁酸、谷氨酸含量影响的实验研究

目的：探讨脑内铜稳态与γ-氨基丁酸、谷氨酸含量之间的关联性,了解脑内铜代谢参与神经疾病的作用机制.方法：把实验动物分为8组：对照组,戊巴比妥组,腹腔注射CuCl2组（剂量分别为2 mg/kg、10 mg/kg、50 mg/kg）,CuCl2-戊巴比妥混合组（先腹腔注射CuCl2,再注射戊巴比妥）.检测SD鼠血清和海马内不同形态铜、γ-氨基丁酸和谷氨酸含量.结果：单一铜胁迫下发现随着外源铜升高血清和海马总铜及血清非蛋白结合铜和海马内谷氨酸含量显著升高,在50 mg/kg注射剂量下达到最高（P＜0.02）;海马非蛋白结合铜和神经递质γ-氨基丁酸含量在2 mg/kg注射剂量下达到最高（P＜0.02）,并随着外源铜浓度升高而降低.单一注射戊巴比妥后海马游离铜含量明显降低（P＜0.02）.铜胁迫1小时后注射1％戊巴比妥结果表明,戊巴比妥能明显降低铜胁迫下海马及血清总铜和游离铜含量（P＜0.05）.结论：外源铜能改变体内铜稳态;铜稳态失衡导致神经递质γ-氨基丁酸、谷氨酸含量变化,γ-氨基丁酸含量与非蛋白结合铜呈正相关.