肺炎克雷伯杆菌对抗菌药物耐药性变化的影响

目的:监测几种临床常用抗菌药物对肺炎克雷伯杆菌最低抑菌浓度(MIC)变化情况,在临床工作中帮助选择合理的初始化抗菌治疗方案。方法:本研究选择哌拉西林他唑巴坦、头孢哌酮舒巴坦、拉氧头孢钠、左氧氟沙星及头孢他啶5种常用的抗革兰氏阴性杆菌感染的治疗药物作为初始经验性治疗方案,使用随机法将5种抗菌方案分配到5个观察组,5个观察组于2011.07-2012.07间各自采集HAP患者痰标本,筛选出其中ESBLs(-)肺炎克雷伯杆菌资料,并于2012.08-2013.08间分别使用1种拟定的抗菌治疗方案进行HAP的初始化治疗。使用Crystal Ball软件进行蒙特卡罗模拟计算上述5种药物常用方案的两个阶段的累计反应分数(CFR),比较其效果。结果:(1)在按规定方案治疗1年后,头孢哌酮钠舒巴坦、哌拉西林他唑巴坦、拉氧头孢钠、左氧氟沙星组有效率改变均无统计学意义,头孢他啶组固定初始化治疗1年后有效率下降,有统计学意义(P=0.037);(2)对各科室初始化方案再次进行了蒙特卡罗模拟,对比后发现头孢他啶方案CFR较前下降明显,其余方案CFR差异小。结论:蒙特卡罗模拟法可计算出用药方案达到药效学指标的概率,以CFR为标准可以更为直观的选择经验性治疗方案,并有效的监测细菌耐药性的变化。     

碳青霉烯酶在碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯杆菌的分布及分子流行病学

目的了解碳青霉烯酶在碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯杆菌的分布及其分子流行病学。方法收集我院2010年1月至2012年12月分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯杆菌120株,采用改良Hodge试验及EDTA协同试验进行碳青霉烯酶表型的确认,用PCR方法扩增碳青霉烯酶基因(KPC、IMP、NDM、VIM、OXA-48),经电泳检测扩增产物后纯化测序。通过MLST及ERIC-PCR进行分子流行病学分析。结果120株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯杆菌中,95株CRKP菌株改良Hodge试验阳性,64株菌株EDTA协同试验阳性。经PCR及测序确认,83株主要携带KPC-2型碳青霉烯酶,占69.2%;其次为IMP-4型金属酶,占28.3%(34/120),NDM-1型金属酶15株,占12.5%,未发现VIM和OXA-48碳青霉烯酶。ERICPCR及MLST分型显示出20个基因分型,其中ST395-A型和ST11-B型主要流行于产KPC-2型菌株中,占43.88%;ST263-B型和ST15-C型主要流行于产NDM-1菌株中,占13.27%;而ST11-B型主要分布于产IMP-4和KPC-2菌株中,占24.49%。结论我院碳青霉烯酶耐药肺炎克雷伯杆菌存在多种碳青霉烯酶,主要以KPC-2为主,产不同种类碳青霉烯酶菌株存在不同的流行基因型。     

2007-2014年肿瘤患者分离肺炎克雷伯杆菌的分布特征及耐药性变迁

目的分析肿瘤医院患者中分离的肺炎克雷伯杆菌耐药性,为感染肺炎克雷伯杆菌的肿瘤患者的治疗提供依据。方法采用WHONET 5.6软件回顾性分析肿瘤专科医院2007-2014年间肺炎克雷伯杆菌的检出率及耐药性。并按标本来源作进一步的耐药分析。结果在2007-2014年的标本中肺炎克雷伯杆菌共分离出3 665株,其中痰液标本中分离出2 230株。痰液标本和非痰液标本的科室分布都以放疗病房最多。肺炎克雷伯杆菌对奈替米星、替加环素最敏感,对氨苄西林耐药率极高,八年中,头孢菌素类抗生素和复方新诺明在2009年耐药性达到最高,后逐渐下降,喹诺酮类及碳青霉烯类药物耐药率有一定波动,但总体较好。痰液标本和非痰液标本的肺炎克雷伯杆菌的耐药性之间的差异具有统计学意义。结论肿瘤患者肺炎克雷伯杆菌引起的感染耐药性较综合性医院低;放、化疗患者由于多种原因呼吸道更易被肺炎克雷伯杆菌感染;及时监控和掌握肿瘤患者痰液中肺炎克雷伯的耐药特点,合理使用抗菌药物,是控制和减少多耐药性肺炎克雷伯杆菌感染的关键。     

肺炎克雷伯氏菌毒力因子的研究进展

摘要:肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)可天然合成1,3-丙二醇、2,3-丁二醇和3-羟基丙酸等大宗化学品,是近年来的研究热点,但其致病性限制了工业应用。本文综述了该菌的毒力因子,包括菌毛、受体、荚膜多糖、内毒素、铁载体,以及近年报道的其他因子。具体内容涉及毒力因子的编码基因、表达蛋白、参与的代谢活动,以及侵染宿主和抗宿主免疫反应的机制。此外,根据近年来代谢工程和合成生物学领域的新进展,提出了消除或弱化该菌毒性的策略,并对这些策略的可行性进行了讨论。     

非产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌的耐药性分析

目的了解临床分离肺炎克雷伯杆菌中非产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株对18种常见抗菌药物的耐药性。方法CLSI表型确证试验-纸片增强法检测非产ESBLs肺炎克雷伯菌,K-B法测定非产ESBLs肺炎克雷伯杆菌对18种常见抗菌药物的敏感性。结果非产ESBLs肺炎克雷伯杆菌株对头孢唑啉、头孢呋辛的耐药率〉50．0％,对其余抗生素的耐药率均低于25．0％,对亚胺培南、美罗培南非常敏感,耐药率分别为2．3％和2．0％;痰标本的分离株对头孢唑啉、头孢呋辛的耐药率明显高于血、尿液标本分离株,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论非产ESBLs肺炎克雷伯杆菌对第一、二代头孢菌素耐药显著,对第三代头孢菌素、亚胺培南、美罗培南等抗生素比较敏感。     

肺炎链球菌5型发酵工艺的优化

目的:采用正交试验设计方法进行肺炎链球菌5型发酵工艺的研究。方法:根据正交试验设计表L9(34)设计的试验条件组合进行了9次肺炎链球菌5型的发酵,采用70升发酵罐进行发酵工艺的摸索,提取了肺炎链球菌5型荚膜多糖粗糖。结果:最佳的发酵培养条件组合为温度37℃、葡萄糖20克/升、大豆胨15克/升、pH值7.3,最佳的纯化条件组合为冷酚抽提三次、沉核酸乙醇浓度23%、超滤膜孔径50kD、最终沉糖乙醇浓度60%,在此筛选得到的最佳条件下,连续进行了5个批次肺炎链球菌5型的发酵与荚膜多糖提取,荚膜多糖粗糖的平均收率为808.6mg/L,相对标准偏差为3.84%。结论:上述发酵培养条件组合适合用于肺炎多糖疫苗的研究和生产。     

肺炎克雷伯杆菌对氟喹诺酮耐药的机制研究

目的研究肺炎克雷伯杆菌对氟喹诺酮类药物（FQNs）的耐药机制。方法筛选临床分离的对环丙沙星耐药的肺炎克雷伯杆菌共10株,采用微量肉汤稀释法检测菌株对5种氟喹诺酮类药物的MIC值;采用PCR方法检测菌株染色体和质粒携带的喹诺酮耐药基因（gyrA基因、parC基因和qnr基因）并测序;质粒接合试验验证qnr基因的转移性。结果 10株肺炎克雷伯杆菌对5种氟喹诺酮类药物均产生耐药性。扩增产物经测序发现10株肺炎克雷伯杆菌染色体的gyrA基因和parC基因均有突变;有2株菌株（K79和K107）携带qnrA基因,这2株菌的接合菌对喹诺酮抗菌药的MIC值上升了5～30倍;未检测到qnrB阳性的菌株。结论 gyrA和parC基因突变是肺炎克雷菌对氟喹诺酮类产生耐药机制的主要原因,质粒上qnrA基因的存在,也是产生喹诺酮耐药的一个重要因素。     

肺炎克雷伯菌研究进展

近年来由于各种抗菌药物的广泛使用,导致肺炎克雷伯菌多重耐药现象普遍存在,给临床治疗带来极大的困扰,造成医院获得性肺炎感染严重的现状。着重论述了肺炎克雷伯菌流行现状、耐药机制、致病因子及防治措施。     

小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌耐药性和基因型研究

目的探讨临海地区小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌产超β-内酰胺酶（ESBLs和AmpC酶）的耐药性及耐药基因型分布情况。方法采用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按CLSI推荐的确证试验检测ESBLs和K-B纸片法测定药敏结果;采用头孢西丁纸片扩散法筛选产AmpC酶阳性菌株,采用PCR检测AmpC酶基因,并对产物进行测序分析基因型。结果113株肺炎克雷伯杆菌ESBLs和AmpC酶总检测率分别为29．20％和18．58％,其中单产ESBLs、单产AmpC酶和同产AmpC酶＋ESBLs检出率分别为23．01％、12．39％和6．19％;AmpC酶阳性菌株的耐药基因型：16株为DHA-1型,5株为ACT-1型。药敏试验：所分离的肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南全部敏感,对喹诺酮类耐药率很低,对大多β-内酰胺类抗生素耐药率较高,并且产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同产ES-BLS和AmpC酶菌株中更为严重。结论临海地区小儿呼吸道分离的肺炎克雷伯杆菌产ESBLs和AmpC酶检出率较高;AmpC酶以DHA-1基因型流行为主,产酶株呈现出高度多重耐药性。     

克雷伯杆菌所致肝脏巨大气性脓肿一例报告

目的:分析克雷伯杆菌导致肝脓肿的的可能原因和发病机理,提高诊断的准确性,并对临床治疗提供帮助.方法:本文报道了本院收治的一例肝内罕见巨大气性脓肿,详细分析了其影像学表现特点及临床表现、辅助检查等情况.结果:本病例细菌培养结果为克雷伯杆菌.患者经积极治疗后病情好转.结论:肺炎克雷伯杆菌引起的肝脓肿发病率呈上升趋势,并已经成为细菌性肝脓肿最常见的致病菌.克雷伯杆菌所致的肝脓肿除了有细菌性肝脓肿的普遍表现外,还有其独特的特点.另外,糖尿病是克雷伯杆菌肝脓肿常见的基础疾病,糖尿病患者的肝脓肿往往进展迅速,且早期症状及CT表现多不典型,因此对于感染入院的糖尿病患者应该警惕克雷伯杆菌肝脓肿的发生.     

1,3-Propanediol oxidoreductase production with Klebsiella pneumoniae DSM2026

We report a Klebsiella pneumoniae DSM2026 fermentation procedure for the efficient production of a key enzyme of 1,3-propanediol formation: 1,3-propanediol oxidoreductase (E.C. 1.1.1.202). The fermentation process is composed of an aerobic batch phase on glucose and glycerol and an anaerobic phase on glycerol. The role of the aerobic phase is to produce sufficiently high cell mass (12.9–14.6 g/l dry weight) and to activate the aerobic branch of the Klebsiella glycerol pathway, whereas in the anaerobic phase there is a rapid initiation of 1,3-propanediol oxidoreductase formation. A fast change from an aerobic to an anaerobic environment led to a redox imbalance, which resulted in the abrupt activation of the anaerobic branch of glycerol utilization, with the occurrence of a high 1,3-propanediol-oxidoreductase activity. A mathematical model with substrate inhibition showed that the adequate glycerol concentration for enzyme production was 14–16 g/l. The combination of the optimal substrate concentration together with the subsequent use of glucose and glycerol resulted in 90.6 ± 11.6 U enzyme activity referred to 1 l of fermentation broth and 10.3 ± 0.9 U/(1 h) productivity.     

Production of 1,3-propanediol by Klebsiella pneumoniae from glycerol broth

Broth containing 152 g glycerol l⁻¹ from Candida krusei culture was converted to 1,3-propanediol by Klebsiella pneumoniae. Residual glucose in the broth promoted growth of K. pneumoniae while acetate was inhibitory. After desalination treatment of glycerol broth by electrodialysis, the acetate in the broth was removed. A fed-batch culture with electrodialytically pretreated broth as␣substrate was developed giving 53 g 1,3- propanediol l⁻¹ with a yield of 0.41 g g⁻¹ glycerol and a productivity of 0.94 g l⁻¹ h⁻¹.     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs检测及耐药性分析

由细菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）引起的细菌耐药性一直是临床相关感染性疾病治疗中的棘手问题。从不同病区患者标本中分离了96株大肠埃希菌和80株肺炎克雷伯菌,分剐采用双纸片协同试验和药物敏感试验检测了上述菌株产生ESBLs情况及对17种抗生素的耐药性。结果发现,27．1％（26／96）的大肠埃希菌株和22．5％（18／80）肺炎克雷伯菌株产ESBLs。ICU病房分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌株ESBLs总阳性率（46．0％）与介入科病房和烧伤科病房分离菌株ESBLs总阳性率（28．6％和25．0％）无显著性差异（P〉0．05）,但明显高于呼吸科、骨科、其他病房及门诊部分离菌株ESBLs总阳性率（6．3％～14．3％,P〈0．01）。不产ESBLs大肠埃希菌株和肺炎克雷伯菌株对17种抗生素耐药率明显低于产ESBLs菌株。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对氨曲南均敏感,对氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／棒酸、阿米卡星耐药率仅为15．8％-23．4％。上述实验结果提示,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床菌株中有较高的ESBLs阳性率,不同病区患者感染的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs阳性率有很大差异,氨曲南、氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／棒酸、阿米卡星可作为治疗产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌感染性疾病的首选药物。     

Microbial production of 1,3-propanediol from glycerol by Klebsiella pneumoniae under micro-aerobic conditions up to a pilot scale

1,3-Propanediol (1,3-PD) can be produced from glycerol by Klebsiella pneumoniae under micro-aerobic conditions. Recently, this fed-batch fermentation process has been successfully scaled up to 1 m³. The final 1,3-PD concentration, molar yield and volumetric productivity of 72 g l⁻¹, 57% and 2.1 g l⁻¹ h⁻¹, respectively, are close to those of 75 g l⁻¹, 61%, and 2.2 g l⁻¹ h⁻¹ under anaerobic conditions. This process would be suitable for the production of 1,3-PD on a large scale.     

Efficient production of ethanol from crude glycerol by a Klebsiella pneumoniae mutant strain

A mutant strain of Klebsiella pneumoniae, termed GEM167, was obtained by γ irradiation, in which glycerol metabolism was dramatically affected on exposure to γ rays. Levels of metabolites of the glycerol reductive pathway, 1,3-propanediol (1,3-PD) and 3-hydroxypropionic acid (3-HP), were decreased in the GEM167 strain compared to a control strain, whereas the levels of metabolites derived from the oxidative pathway, 2,3-butanediol (2,3-BD), ethanol, lactate, and succinate, were increased. Notably, ethanol production from glycerol was greatly enhanced upon fermentation by the mutant strain, to a maximum production level of 21.5 g/l, with a productivity of 0.93 g/l/h. Ethanol production level was further improved to 25.0 g/l upon overexpression of Zymomonas mobilispdc and adhII genes encoding pyruvate decarboxylase (Pdc) and aldehyde dehydrogenase (Adh), respectively in the mutant strain GEM167.     

一株肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析

【背景】随着抗生素的广泛使用甚至滥用,细菌耐药性问题日益显著,利用噬菌体治疗耐药致病菌的方法重新开始被人们关注。【目的】对一株烈性肺炎克雷伯菌噬菌体vB_KpnP_IME279进行生物学特性研究及生物信息学分析。【方法】以一株多重耐药的肺炎克雷伯菌为宿主菌,从医院污水中分离噬菌体,应用双层平板法检测噬菌体效价、最佳感染复数(Optimal MOI)、一步生长曲线以及裂解谱,纯化后通过透射电镜观察噬菌体形态;应用蛋白酶K/SDS法提取噬菌体全基因组,使用Illumina MiSeq测序平台进行噬菌体全基因组测序,测序后对噬菌体全基因组序列进行组装、注释、进化和比较基因组学分析。【结果】分离到一株新的肺炎克雷伯菌噬菌体,命名为vB_KpnP_IME279;其最佳感染复数为0.1,一步生长曲线显示潜伏期为20 min,平均裂解量140 PFU/cell,电镜观察显示该噬菌体属于短尾噬菌体科(Podoviridae)。基因组测序表明,噬菌体基因组全长为42 518 bp,(G+C)mol%含量为59.3%。BLASTn比对结果表明,该噬菌体与目前已知噬菌体的相似性较低,基因组仅70%区域与已知噬菌体有同源性。构建噬菌体主要衣壳蛋白的基因进化树,分析了噬菌体IME279与其他短尾科噬菌体的进化关系,结果表明该噬菌体是短尾科噬菌体的一名新成员。【结论】分离鉴定了一株新的肺炎克雷伯菌噬菌体,进行了生物学特性、全基因组测序和生物信息学分析,为研究肺炎克雷伯菌噬菌体与宿主之间的相互作用关系以及治疗多重耐药细菌感染奠定了基础。     

肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖表达量评价指标的建立及发酵条件优化

建立了特异性强的肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖全菌ELISA检测方法,检测结果与多糖表达量相关性好;以全菌ELISA值结合菌数为评价指标,对影响荚膜多糖表达的培养基组成及发酵条件进行了优化,优化后的摇瓶培养条件下发酵液活性和生物量分别比优化前提高72.7和33倍,并经7L罐放大实验,绘制发酵动力学曲线,为肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖进一步开发打下基础。     

肺炎克雷伯菌生物被膜的体外模型建立

目的研究临床分离的肺炎克雷伯菌在体外形成生物被膜的情况,为进一步研究生物被膜肺炎克雷伯菌的耐药机制奠定基础。方法采用改良平板法建立肺炎克雷伯菌生物被膜模型,用喷金法和扫描电镜观察鉴定,并对生物被膜的形成进行定量分析。结果23株临床分离的肺炎克雷伯菌菌株生物被膜形成能力不同,以强阳性生物被膜形成能力者为最多数。结论绝大多数临床分离的肺炎克雷伯菌菌株具有较强的生物被膜形成能力。应用改良平板法能够较好的在体外建立其生物被膜模型。     

不同pH调节剂对补料批式发酵产1,3-丙二醇的影响

对肺炎克雷伯氏菌（Klebsiellapneumoniae）发酵生产1,3-丙二醇（1,3-Propanediol,1,3．PD）的补碱策略进行了研究。分别利用NaOH、氨水、KOH三种溶液作为pH调节剂,优化三种pH调节剂并得到按一定比例混合的混合碱。当采用混合碱调控发酵pH值为7．0时,1,3-丙二醇的产量达到了55dL,比无pH调控（对照）发酵过程发酵水平提高了10．6倍。