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用T7 RNA聚合酶体外转录合成大鼠肝tRNAIle 总被引:1,自引:0,他引:1
采用PCR技术从rec-M13mp18中扩增出120 bp的大鼠肝tRNAIle合成基因片段,经限制性内切酶BstNⅠ酶切后作为模板,利用T7 RNA聚合酶在体外无细胞体系转录由T7启动子带动的大鼠肝tRNAIle基因,生成不含修饰碱基的tRNAIle,并对体外转录反应条件进行了优化,回收的tRNA产量可达DNA模板量的40倍. 相似文献
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用表达T7RNA聚合酶细胞系拯救麻疹病毒微复制子 总被引:1,自引:0,他引:1
构建稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系,用于提高拯救麻疹病毒微复制子效率.PCR扩增T7RNA聚合酶基因,克隆到真核表达载体,转染Vero细胞,用G418筛选到稳定表达的细胞株Vero/pcDNA3-T7.用Westernblotting证明了T7RNA聚合酶在细胞中的表达.将T7启动子控制绿色荧光蛋白表达的质粒转染该细胞后,绿色荧光蛋白在细胞株中得到表达.反向插入报告基因的微复制子转染感染麻疹病毒的Vero/pcDNA3-T7细胞后,细胞中能够检测到报告基因的表达.用细胞系取代痘苗病毒系统,可以提高拯救效率. 相似文献
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用PT7和pGP1—2质粒偶联表达系统,通过温度诱导(30~42℃),使温度敏感基因CI875失活;加入利福霉素选择性抑制E.coliRNA多聚酶的表达,从而使外源PEP羧化酶cDNA得到专一性的表达。产物经SDS—PAGE和Wesern杂交分析,表明该系统表达出两条PEP羧化酶带,分子量分别是78kD和80kD。 相似文献
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T7 lysozyme inhibits transcription by T7 RNA polymerase 总被引:40,自引:0,他引:40
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Mutagenic Specificity of a Novel T4 DNA Polymerase Mutant 总被引:1,自引:1,他引:0
The in vivo mutational specificity of a novel T4 DNA polymerase mutator mutant, tsM19, was determined. Two genetic tester systems were used to characterize the mutant. Results of our studies indicate that tsM19 promotes transition and transversion mutagenesis and, possibly, frameshift mutagenesis. Central G:C base pairs in runs of three or more consecutive G:C base pairs may be target sites for tsM19-induced transitions. 相似文献
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采用PCR技术从rec M1 3mp1 8中扩增出 1 2 0bp的大鼠肝tRNAIle合成基因片段 ,经限制性内切酶BstNⅠ酶切后作为模板 ,利用T7RNA聚合酶在体外无细胞体系转录由T7启动子带动的大鼠肝tRNAIle基因 ,生成不含修饰碱基的tRNAIle,并对体外转录反应条件进行了优化 ,回收的tRNA产量可达DNA模板量的 4 0倍 相似文献