细菌平板菌落计数的改进方法

细菌平板菌落计数是微生物教学、科研及生产实践中最常用的活细菌总数测定方法。由于它是根据固体平板上一个菌落代表一个细菌的原理而设计的,因此深层菌落的存在、菌落的大小及疏密程度等因素均影响观察者观察计数。为便于观察.提高菌落的检出率,对常规平板菌落计数法做如下改进: 在倒平板之前,向装有150ml牛肉膏蛋白胨固体培养基的三角瓶内加入1/1000浓度的氧化还原染料     

哺乳类基因工程的一些实验操作 实验10X噬菌体DNA 体外包装

一、需用的菌株及其特性鉴定 1.菌株及其基因型 (1）大肠杆菌E. coli BHB2688，基因型为：N205 rec＾一〔rimm"`9 clts, b2, red-, Earn, Sam/r.lo (2）大肠杆菌E. coli BHB 2690，基因型为： N205 recA- [rimm"9`. cIts, b2, red-. Dam, Sam/r]. (3）大肠杆菌E. coli K802，基因型为：hsdR+, hsdM+.} gal-, met-, SUPHO 2.鉴定clrs基因 (1) BHB 2688和BHB 2690各自接种在2只LB 培养基上。一只置32℃下培养，另一只置42℃下培 养。在32℃培养的平板上挑取单菌落，接种在LB培 养液中，32℃培养过夜。 (2）再将培养液中生长的细菌划线接种在2只 LB培养基上，分别置32℃和42℃下培养。如果细菌 只在32℃ 下生长，则可用于制备包装用的抽提物。 3.鉴定，cA基因 (1)在LB平板上，平行划线接种BHB 2688, BHB 2690和K802o (2）用厚纸遮住培养皿的一半，打开培养皿盖置 紫外线下照射。然后在犯℃下培养过夜。 (3）厚纸遮挡部分的培养基上，BHB2688和BHB 269。生长，紫外线照射的培养基上则不生长。K802 不受紫外线照射的影响都能够生长。     

一种改进的观察放线菌菌丝的方法

在进行放线菌形态观察时,常采用不同部位取材的方法分别制片观察气生菌丝、基内菌丝及孢子菌丝。欲在同一片内同时观察到这几种菌丝,按常规方法不太理想,笔者根据实验课教学体会,认为改用下述方法结果很好。取高氏一号培养基加热熔化倒平板,凝固后,无菌操作取灭过菌的盖玻片斜插入平板培养基上(每板分四排插10片)。灼烧接种环,烧红后迅速伸到培养基     

鸡嗉囊中内源益生菌的初步筛选分离

目的:利用酸性培养基(牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基)对鸡嗉囊内的内源益生菌进行筛选.方法:通过好氧、兼性好氧培养、划线逐层倒平板分离筛选,观察表观和一系列生化实验鉴定所筛选的益生菌.结果:初步确定益生菌有细菌的链球菌属、乳酸的杆菌属、真菌的酵母菌属.     

2003年国际生物学奥林匹克竞赛实验考试试题(4)

第三实验室微生物及生物工程实验在微生物及生物工程的实验室中你将回答2个试题:试题1:微生物的鉴定试题2:表达一定基因的微生物生长状态的测定这个实验室考试60min,最高得分是64分,你必须将你的结果和答案写在答案纸上,在考试完成后老师将收回答案纸。在考试卷上不必写任何答案。不能从实验室带走任何实验结果!在进行实验反应时要小心,不要将试剂和溶液弄到皮肤和衣服上!祝你好运!试题1微生物的鉴定材料和设备1)细菌菌株①有固体培养基的培养皿(平板GCO-1,平板蛋白酶-1,平板淀粉酶-1)②有固体培养基的试管(用作O/F试验)③有肉汤的试管(用…     

一种霉菌放线菌悬滴标本的制作方法

青霉(Penicillium)、曲霉(Aspergillum)和放线菌(Actinomycetes)是中学植物实验课必需的实验材料。本人经过摸索,为中学制作出霉菌、放线菌活体悬滴标本和永久装片,很受中学老师们的欢迎,在中学简陋条件下很易制作,效果极佳,现介绍如下。 1.悬滴活标本的制作方法 (1)倒平板 100毫升水中加2克琼脂,煮开使琼脂溶化,待凉至40℃左右(不烫手为度),将该液态琼脂培养基倒入直径90毫米的培养皿中,每皿倒培养基15—20毫升左右,约2—3毫米厚。待琼脂凝固(5—10分钟左右)     

实验9 λ噬菌体DNA的提取

一、平板扩增抽提法 1.LB培养基上划线接种宿主菌,37℃培养过夜。 2.挑取单菌落接种在LB培养液中,培养液含0.2％麦芽糖。37℃振荡培养过夜。 3.0.5毫升菌液;0.1毫升 Mg~++Ca~++溶液(10mM MgCl_2/10mM CaCl_2);噬菌体[10~5pfu(噬斑生成单位)],混和,37℃水浴中保温15分钟。 4.加入4毫升42—45℃含0.7％琼脂粉的LB培养液,迅速混匀,铺在直径为8.5厘米的含1.5％琼脂粉的LB培养基上。37℃培养过夜。铺有上层培养基的一面朝上培养。     

粉叶小檗愈伤组织单细胞克隆

以粉叶小檗愈伤组织为材荆,用B5液体培养基进行悬浮培养建立悬浮细胞糸。经3～4次继代培养即可得到悬浮的单细胞。悬浮细胞通过细胞平板克隆(一般B5培养基平板克隆、优化培养基平板克隆和条件培养基平板克隆),经5代连续继代培养观察和薄板层析-分光光度法分析,发现用优化培养基进行平板克隆植板率最高,且克隆最易成功,并且还筛选到一株小檗碱产率高且稳定的克隆CV-57,其平均生手速率为每天14．412mg／L,为原始株系的1．91倍,平均小檗碱含量为干重的2．17％,是原始株系的2．26倍。     

《土壤微生物生态研究法》选译(一) 固氮微生物的测定

1、好气性固氮细菌的测定:将1克土壤试料加到100毫升无氮基础培养基中※_1,于25～30℃振温培养,然后用稀释平板法或涂抹平板法等测定细菌。由于最初在培养基中含有非固氮菌,所以要反复多次地移接和培养。再用稀释平板法测定菌落。在固氮微生物中,特别是在对Azoto-bacter(自生固氮菌属)选择培养时,常使用1%的淀粉或鼠李糖。此外,蔗糖也     

筛选鸡嗉囊降解胆固醇的内源益生菌

目的:益生菌具有降低胆固醇作用,从鸡嗉囊内利用选择性培养基筛选和复选具有降低胆固醇作用的内源益生菌.方法:利用MRS培养基和以胆固醇为碳源的复选培养基分别进行好氧、兼性、厌氧培养,逐层倒平板划线分离,最终分离和筛选出纯的益生菌,观察描述其菌落形态特征和油镜下观察菌株的特征,并进行一系列生化实验,结合伯杰氏细菌鉴定手册初步确定益生菌种类.结果:筛选分离出1株好氧菌、1株兼性菌、1株厌氧菌,分别命名为DG-1、DG-2、DG-3;初步鉴定为乳酸菌属、乳杆菌属、消化链球菌属.结论:该试验方法简单易行,能够有效地从鸡嗉囊中筛选出生长良好的益生菌,为进一步研究内源益生菌降解胆固醇的特性及机理提供帮助.     

平板混合培养木质纤维素降解菌研究进展

微生物的混合培养已广泛应用于木质纤维素类物质的转化与降解领域.不同木质纤维素降解菌在混合培养时的相互关系在很大程度上影响混合培养的效果.目前对这种相互关系的研究主要依托平板混合培养展开,所用到的平板主要有基础培养基平板和改进培养基平板两种.其中基础培养基平板法主要根据菌落形态、菌丝体颜色、胞外挥发性有机化合物成分和典型胞外酶活性等进行研究,而改进培养基平板则是将基础培养基平板中的碳源更换为天然木质纤维素类物质进行对比研究.本文综述了采用平板混合培养不同木质纤维素降解菌菌株的研究现状和进展,并对该领域研究应重点关注的问题进行了展望.     

6种细菌菌数测定培养基的优化

考察平板计数琼脂(PCA)中不同来源的酵母浸粉对6种细菌总数测定的影响,并对培养基中酵母浸粉和胰蛋白胨的配比及含量进行了优化。优化后的培养基组分为胰蛋白胨3.0 g·L-1,酵母浸粉3.0 g·L-1,葡萄糖1.0 g·L-1,琼脂15.0 g·L-1。与市售平板计数琼脂相比,能检出的细菌总数提高6.9%。     

利用平板法获得高效价λ噬菌体悬液

我们研究了在平板上获得高效价λ噬菌体的方法,并将平板增殖的高效价λ噬菌体用于λDNA的简易制备。材料与方法1.菌株:λ噬菌体用E.Coli w1485(cI85757)经热诱导获得;指示菌为E.Coli 266 YMC Lac~-。由中国科学院微生物研究所提供。2.培养基:(1)BPY培养基:用于斜面     

食源性变形杆菌簇致病菌的检测

为建立食源性变形杆菌簇致病菌的检测方法,对富集培养基、选择性平板分离培养基和生化特性进行了筛选比较。结果表明,肠杆菌富集肉汤培养基更有利于变形杆菌簇致病菌的检出,平板分离培养基可用EMB琼脂培养基和SS琼脂培养基(或麦康凯琼脂培养基),初筛方法为革兰氏反应和苯丙氨酸脱氨酶实验,最后用其他生化反应进行确认。该方法检出率高,检测范围较宽,可为建立变形杆菌簇致病菌的检验标准提供实验依据。     

分离嗜热脂肪芽孢杆菌单个菌落的方法

本文研究了平板培养基的量、培养温度、培养湿度、培养基类型、培养时间对运动性较强的嗜热脂肪芽孢杆菌WF—146平板分离的影响。结果表明,控制好上述因素,嗜热脂肪芽孢杆菌WF—146在平板上培养可较好形成单菌落。     

盐度对稀释平板法研究红树林区土壤微生物数量的影响

在使用稀释平板法分离潮间带红树林及其对照光滩土壤微生物以及计数时,多数情况下使用陈海水制作培养基和稀释水,很少考虑培养基和稀释水的盐度对最终计数结果的影响.使用稀释平板法研究了盐度对福建九龙江口红树林区与深圳福田红树林保护区土壤微生物平板计数的影响,结果表明培养基与稀释水盐度对微生物数量有明显的影响.统计分析显示细菌的海水稀释效果优于淡水,而放线菌与真菌则刚好相反(P<0.05,一个例外).海水不适合配制红树林区土壤微生物平板计数的培养基,从0～35,高盐度的平板培养基会降低微生物的数量,尤其是放线菌的数量,尽管培养基的盐度对真菌影响无规律,但细菌数量在低盐度时比在高盐度和不加氯化钠时要多.根据盐度效应,提出了稀释平板技术应用于潮间带的红树林及其相应光滩时的优化方法,认为细菌应该用海水作无菌稀释水,而放线菌和真菌则应用淡水作稀释水;包括光滩在内的红树林区土壤微生物分离与计数的培养基宜控制较低盐度范围.     

肠球菌感染性心内膜炎中粪肠球菌毒力因子的作用

肠球菌是革兰阳性球菌。1984年,肠球菌作为一个新的菌属从链球菌属中独立出来,即肠球菌属(enterococcus)。肠球菌营养要求较高,在含有血清的培养基上生长较好。接种血平板35℃孵育18 h后,可形成灰白色、不透明、表面光滑、直径为0.5-1 mm大小的圆形菌落,在血琼脂平板培养基上主     

粉叶小檗愈伤组织单细胞克隆

以粉叶小檗愈伤组织为材料 ,用B5液体培养基进行悬浮培养建立悬浮细胞系。经 3～ 4次继代培养即可得到悬浮的单细胞。悬浮细胞通过细胞平板克隆 (一般B5培养基平板克隆 ,优化培养基平板克隆和条件培养基平板克隆 ) ,经 5代连续继代培养观察和薄板层析 -分光光度法分析 ,发现用优化培养基进行平板克隆植板率最高 ,且克隆最易成功 ,并且还筛选到一株小檗碱产率高且稳定的克隆CV 5 7,其平均生长速率为 14 .4 12mg .Fw/L .d ,为原始株系的 1.91倍 ,平均小檗碱含量为 2 .17%干重 ,是原始株系的 2 .2 6倍。     

培养基成分对口腔福赛类杆菌生长影响的研究

目的比较不同培养基成分对福赛类杆菌ATCC43037生长的影响,寻找一种有效促进福赛类杆菌生长的培养基.方法将福赛类杆菌ATCC430 37 接种到5种不同培养基(包括琼脂板和液体培养基)中,在厌氧培养箱内37℃厌氧培养7 d,观察平板上菌落生长情况,在λ=550 nm处每24 h测定液体培养菌液A值.细菌通过革兰染色和PCR法鉴定.结果1.生长在血平板上的福赛类杆菌ATCC43037菌落形态呈粉红色或白色小斑点状,在以BHI 为基础培养基中添加氯化血红素、维生素K3、N-乙酰胞壁酸的No2血琼脂培养基生长最好,而在无氯化血红素、维生素K3及血的No4琼脂板上不生长.2.福赛类杆菌ATCC43037在以TSB 为基础培养基中添加酵母提取物、植物蛋白胨、氯化血红素、维生素K3、N-乙酰胞壁酸和D TT的No1液体培养基生长最好,培养7 d后A值＞0.8,在缺乏N-乙酰胞壁酸的No5液体培养基中几乎不生长.3.菌落细菌革兰染色为G 梭状杆菌,PCR法鉴定为福赛类杆菌.结论福赛类杆菌在血平板和液体培养基中存在不同的生长特性,N-乙酰胞壁酸是福赛类杆菌在液体培养基中生长最重要的成分,DTT有益于细菌生长.     

一次性厌氧菌培养平板的制备与实验使用

我们设计并制作的一次性厌氯菌培养平板,经初步实验使用结果表明它对临床常见厌氧菌培养效果良好、较常用培养方法具有不用现配培养基,不用接种棒涂菌,可在有氧环境下进行操作等优点,故这是一种极其简单、有效的厌氧菌培养装置。