大鼠肝癌发生过程中NF-κB的表达

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)在大鼠肝癌发生发展中的作用和意义。方法应用免疫组织化学SP法,对二乙基亚硝胺(DEN)诱发的大鼠肝癌发生过程中NF-κB的动态表达进行了检测。结果 DEN诱发的肝癌为肝细胞癌,诱癌率为100%,大鼠肝癌癌变过程大致经过肝细胞损伤期、肝细胞增生-硬化期和肝细胞癌变期等三个阶段。在正常大鼠肝组织,偶见少量肝细胞呈阳性表达,随着肝癌发生发展,NF-κB阳性表达细胞逐渐增多,至诱癌晚期,可见大量NF-κB阳性表达细胞,均比正常肝组织表达高(P<0.05)。结论本研究表明肝细胞NF-κB的过度表达与肝癌的发生和发展密切有关。     

增殖细胞核抗原在低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞中表达

目的通过建立低氧性肺动脉高压大鼠模型,探讨增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在大鼠低氧性肺血管平滑肌细胞中的表达。方法将SPF级SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=10),通过间断常压低氧法建立大鼠低氧性肺动脉高压模型,肺组织切片经HE染色后图像分析技术定量检测大鼠肺小动脉的形态改变;免疫组织化学染色法测定肺血管平滑肌细胞内PCNA蛋白表达,并经图像分析半定量检测其表达强度。结果 4周后,模型组SD大鼠MT%、MA%与对照组比较,差异具有显著性(P<0.05);模型组SD大鼠肺血管平滑肌细胞内PCNA核蛋白表达(积分面积、累积光密度)与对照组比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论常压低氧4周可成功建立肺动脉高压大鼠模型,PCNA在肺血管平滑肌细胞中的表达量具有差异性提示其可能在肺动脉高压形成过程中起重要作用。     

人增殖细胞核抗原的表达调控

增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是一种生长调控蛋白,在DNA复制、修复、细胞周期调控、基因外遗传(epigenetic inheritance)等事件的协同机制中发挥重要功能。PCNA的表达调控发生在多个层次,涉及ATFl、CREB、RFXl、p53、E2F等转录因子以及内含子指导的反义RNA等等。     

Bax蛋白在大鼠肝癌发生过程中的表达和意义

通过动态观察Bax蛋白在实验性大鼠肝癌发生过程中肝细胞的表达,探讨Bax蛋白与肝癌发生的关系及其生物学意义。用DEN饲喂大鼠,分别于第4、8、12、16、18周处死大鼠,取其肝脏,石蜡切片,ABC法免疫组织化染色。结果显示：正常成年大鼠肝细胞均有中等程度Bax蛋白表达。至诱癌第4周大鼠肝小叶内有少数肝细胞呈Bax蛋白免疫阳性反应,随诱癌发展进程,呈Bax蛋白免疫阳性反应肝细胞进一步减少,第12周,只可见肝细胞增生结节的多数肝细胞呈Bax蛋白免疫阳性反应。诱癌晚期（第18周）,癌结节内肝癌细胞均呈Bax免疫反应阳性,其强度较正常肝细胞明显增强,Bax蛋白免疫反应产物为胞质内粗大的棕褐色颗粒。部争肝细胞胞质和胞膜均呈阳性,肝癌细胞最为常见。结果表明：Bax蛋白表达减少或缺失是肝癌发生过程中的早期事件,可能参与肝癌的启动过程。     

p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌发生过程中PCNA的表达及意义

[目的]探讨乙型肝炎病毒表面抗原定位整合(p21HBsAg/HbsAg)转基因小鼠肝癌发生过程中PCNA的表达及意义。[方法]分别选取2,6,12,18,24月龄的SPF级转基因小鼠,取肝脏及肝脏肿瘤组织,进行免疫组织化学S-P法染色。[结果]①阳性肝细胞核内可见棕黄色反应颗粒;②2,6月龄转基因小鼠肝脏有少量散在分布的肝细胞呈PCNA阳性表达,阳性率分别为2.5%,3%;12月龄转基因小鼠肝脏PCNA阳性表达主要出现在非典型增生的肝细胞,阳性率23.65%;18月龄转基因小鼠发生的肝细胞癌PCNA阳性率61.68%;24月龄的转基因小鼠发生的肝细胞癌PCNA阳性率63.56%。12月龄转基因小鼠PCNA阳性率高于2,6月龄转基因小鼠(p<0.01),18月龄和24月龄的转基因小鼠PCNA阳性率高于12月龄转基因小鼠(p<0.05)。[结论]①PCNA能准确反映乙型肝炎病毒表面抗原定位整合转基因小鼠肝细胞的增殖能力,PCNA与肝细胞癌的发生、发展密切相关;②非典型增生的肝细胞有较高的PCNA阳性表达,是一群具有肿瘤增殖潜能的癌前细胞群。     

大鼠肝癌发生过程中p53的突变和甲胎蛋白的表达

采用免疫组织化学ＡＢＣ和ＰＡＰ法,对二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌发生过程中突变型ｐ５３蛋白（ｍｐ５３）和甲胎蛋白（ＡＦＰ）在肝细胞中的表达进行了系统观察。结果显示：（１）ＤＥＮ诱发大鼠肝癌发生率为１００％;（２）正常大鼠及诱癌第４周大鼠的肝细胞均不表达ｍｐ５３,至诱癌第８周,可见少量肝细胞表达ｍｐ５３,诱癌晚期的癌结节内大部分肝癌细胞呈ｍｐ５３阳性表达,ｍｐ５３免疫反应阳性产物为胞核内棕褐色颗粒;（３）正常大鼠肝细胞不表达ＡＦＰ,诱癌早期（４～８周）的大鼠肝小叶内可见少量ＡＦＰ阳性肝细胞,多为小肝细胞,呈散在分布,此后ＡＦＰ阳性肝细胞逐渐增多,晚期的癌结节内大部分癌细胞呈ＡＦＰ阳性,ＡＦＰ免疫反应阳性产物为胞浆内棕褐色颗粒。结果提示,ｍｐ５３和ＡＦＰ可作为分析肝癌进展的病理学指标     

大鼠肝癌发生过程中转化生长因子-β1的表达及意义

为了进一步探讨转化生长因子-β1在肝癌发生中的作用和意义。本采用免疫组织化学ABC法,对二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌发生过程中转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）表达情况进行了观察。结果显示;在正常大鼠肝脏,TGF-β1的表达只局限于血窦内皮细胞或枯否细胞,汇管区血管内皮细胞及胆管上皮细胞,肝细胞呈TGF-β1阴性表达,诱癌早期（4-8周）,大鼠肝小叶内除血窦内皮细胞或枯否细胞呈TGF-β1阳性表达外,可见少量散在分布的肝细胞呈TGF-β1阳性表达,阳性肝细胞胞质内可见棕褐色阳性反应颗粒,随着肝癌发展,TGF-β1阳性肝细胞逐渐增多,至诱癌晚期（18周）,癌结节内的大多数肝癌细胞呈TGF-β1阳性表达。本研究显示TGF-β1与肝癌的发生和发展密切相关。至诱癌晚期（18周）,癌结节内的大多数肝癌细胞呈TGF-β1阳性表达,本研究显示TGF-β1与肝癌的发生和发展密切相关。     

用ribozyme抑制增殖细胞核抗原的表达对HeLa细胞增殖的影响

增殖细胞核抗的（ＰＣＮＡ）是ＤＮＡ聚合酶δ的辅助蛋白,它是细胞染色体ＤＮＡ复制所必需的。人工设计的ｒｉｂｏｚｙｍｅ具有可特异地切割ＰＣＮＡｍＲＮＡ的性质,将此ｒｉｂｏｚｙｍｅ的自剪体内表达质粒导入ＨｅＬａ细胞,从细胞决ＲＮＡ中分离相应部分能在体外切割靶ＲＮＡ片段,证明此表达质粒在细胞内能表达出有活性的ｒｉｂｏｚｙｍｅ分子。与对照相比,导入ｒｉｂｏｚｙｍｅ表达质粒的ＨｅＬａ细胞进入Ｓ期的时间从１２ｈ     

增殖细胞核抗原在小鼠肾小体发育中的表达

目的研究小鼠肾小体发生发育过程中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平.方法采用免疫组织化学方法结合光学显微镜技术.结果比较发育不同阶段肾小体PCNA表达时,处于原始阶段,即Ⅰ期和Ⅱ期肾小体内PCNA阳性率最高;而随着肾小体生长发育和成熟,即Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ期肾小体,PCNA的表达会逐渐减弱.在比较不同胚龄及生后日龄的同期肾小体时发现,Ⅰ期、Ⅱ期肾小体内PCNA阳性细胞率不因胚(日)龄的增加而变化;而Ⅲ期、Ⅳ期和Ⅴ期随着胚龄的增加,特别是生后日龄的增加阳性率逐渐下降.结论细胞增殖在肾小体发育的整个过程中是由高逐渐减低.生后龄肾内生长阶段肾小体的PCNA阳性率明显低于胚龄时生长阶段肾小体.     

用ribozyme抑制增殖细胞核抗原的表达对HaLa细胞增殖的影响

增殖细胞核抗原(PCNA)是DNA聚合酶δ的辅助蛋白,它是细胞染色体DNA复制所必需的。人工设计的ribozyme具有可特异地切割PCNA mRNA的性质,将此ribozyme的自修剪体内表达质粒导入HeLa细胞,从细胞总RNA中分离相应部分能在体外切割靶RNA片段,证明此表达质粒在细胞内能表达出有活性的ribozyme分子。与对照相比,导入ribo-zyme表达质粒的HeLa细胞进入S期的时间从12 h推迟到20 h,而突变ribozyme的对照表明反义抑制对细胞进入S期的影响较小(推迟到15 h)。证明该ribozyme能有效抑制He-La细胞DNA复制,同时亦证明PCNA对于细胞DNA复制及细胞周期进程的重要性。     

hTERT、PCNA在人宫颈癌组织中的表达

目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)、增殖细胞核抗原(PCNA)在人宫颈癌发生发展中的作用.方法采用免疫组织化学S-P法检测hTERT蛋白和PCNA在42例正常宫颈上皮、宫颈上皮肉瘤样病变(CIN)及宫颈鳞癌组织中的表达.结果随着宫颈病变加重,hTERT和PCNA表达逐渐增高;图像分析测定正常宫颈、CIN及鳞癌组织中hTERT和PCNA的平均吸光度值(A)分别为0.1426±0.0044、0.1586±0.0042、0.1747±0.0035和0.1444±0.0111、0.2286±0.0093、0.3218±0.0151,平均阳性面积(S)分别为1497.23±412.40、2658.08±250.73、3699.40±895.80和1149.76±458.41、3083.01±1407.66、5562.28±1681.51,差异均有极显著性. hTERT和PCNA的表达呈显著正相关性.结论 hTERT和PCNA的异常表达与宫颈癌的发生发展相关. hTERT和PCNA二指标可能在宫颈癌的早期筛查、诊断、治疗及预后判断中具有一定意义.     

多药耐药基因在肝细胞癌中的表达及与p53、PCNA表达的相关性研究

目的　研究肝细胞癌 (HCC)组织中多药耐药基因MDR 1与p5 3蛋白及增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的关系 ,旨在从基因水平进一步探讨预测化学治疗效果的可行性。方法　利用免疫组织化学方法 (S P法 )研究 30例肝穿活检的肝癌组织中MDR 1、p5 3和PCNA的表达。结果　 30例肝细胞癌中MDR 1的阳性表达率为 5 6 6 7% ,MDR 1阳性表达与组织学分级无关 (P >0 0 5 )。MDR 1表达与 p5 3、PCNA表达间无相关性 (P >0 0 5 )。结论　通过检测MDR 1基因可以对肝细胞癌病人进行化学治疗敏感性预测 ;肝细胞癌中MDR 1基因表达不依赖于 p5 3和细胞增殖这些因素。     

MOLECULAR CLONING AND EXPRESSION OF THE PROLIFERATING CELL NUCLEAR ANTIGEN GENE FROM THE COCCOLITHOPHORID PLEUROCHRYSIS CARTERAE (HAPTOPHYCEAE)1

The gene encoding proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was isolated from the marine coccolithophorid microalga Pleurochrysis carterae (Braarud et Fagerland) Christensen (Haptophyceae). Two mRNAs (Pcpcna1 and Pcpcna2) were identified and contained an identical coding region for 222 amino acid residues and an untranslated sequence of 302 base pair (Ut1) and 246 base pair (Ut2), respectively. Comparison between PCR‐derived genomic DNA fragments and cDNA sequences revealed five introns. The coding region of Pcpcna is similar to counterparts in other organisms and contains highly conserved functional domains. Phylogenetic analyses indicated clustering of Pcpcna with pcna in its haptophyte relative Isochrysis galbana Parke. A recombinant fusion protein of Pcpcna, overexpressed in Escherichia coli, was recognized by the PC10 antibody against rat PCNA. Using RT‐PCR and Western blotting, Pcpcna was found to be highly transcribed and translated during the exponential growth phase relative to the stationary growth phase, with a positive correlation between gene expression and growth rate. It can be concluded that the pcna is conserved in this coccolithophorid phytoplankton and that its expression is growth stage related.     

DETECTION OF PROLIFERATING CELL NUCLEAR ANTIGEN ANALOG IN FOUR SPECIES OF MARINE PHYTOPLANKTON1

Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) is an auxiliary protein for polymerase-δ and therefore is essential for cellular DNA synthesis. The synthesis and abundance of PCNA in the cell are cell-cycle-dependent, both increasing markedly during the S phase. Such a protein could be a useful cell cycle marker, which is required for estimating algal species-specific growth rates via the cell cycle approach. By using commercially available monoclonal anti-rat-PCNA antibody and an enhanced chemiluminescence technique, PCNA-like proteins were detected in four species of marine phytoplankton. The strong single band detected on western blots of Isochrysis galbana Parke, Thalassiosira weissflogii Cleve, and Dunaliella tertiolecta Butcher had an apparent molecular weight of 33–36 kDa. This molecular weight is within the range as observed for PCNA in a wide phylogenetic array of organisms (33–36 kDa). In the diatom Skeletonema costatum (Grev.) Cleve, the PCNA antibody detected a major band of about 19 kDa as well as a minor band of 38 kDa. The detected proteins were specifically recognized by the monoclonal anti-rat-PCNA antibody. The PCNA-like proteins in I. galbana, T. weissflogii, and D. tertiolecta were more abundant in the exponential growth stage and then decreased and became undetectable in the late stationary stage. Our results show that the detected antigens appear to be algal analogs of PCNA.     

狼疮性肾炎病变肾组织中bFGF、CD68和PCNA表达的研究

目的　通过对狼疮性肾炎 (LN)与肾小球轻微病变 (GML)肾组织中bFGF、CD6 8、PCNA的原位检测和相关分析 ,以了解它们在LN发病中的意义及其相互关系。方法　以 14例GML为对照组 ,采用ABC免疫组化法对 2 3例LN病例的肾穿刺组织 ,分别检测其bFGF、CD6 8和PCNA表达情况。结果　与GML病例相比 ,LN组肾小球bFGF表达明显增强 (P <0 0 5 ) ,CD6 8和PCNA表达的阳性细胞数也明显增多 (P <0 0 1) ;IV型LN组肾小球bFGF明显强于II型LN组 ;LN组肾小球内CD6 8+ 与PCNA+ 细胞数间呈正相关 (r =0 5 6 ,P <0 0 5 ) ,其中IV型LN组中有肾小球新月体形成的病例 ,CD6 8+ 与PCNA+ 细胞数间也呈正相关 (r =0 86 ,P <0 0 5 )。结论　LN病变肾小球bFGF、CD6 8和PCNA表达均明显增强 ,其表达在某种程度上可反映临床LN病变程度的严重性。     

大乳头水螅增殖细胞核抗原基因的克隆及再生进程中的表达分析

研究以增殖细胞标记物-增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)蛋白为切入点, 采用RACE(Rapid amplification of cDNA ends)方法克隆了大乳头水螅(Hydra magnipapillata)PCNA基因的cDNA序列。该cDNA序列包含1240 bp, 其中837 bp为编码区, 编码的蛋白质预测分子量为30.93 kD。把PCNA基因ORF中的部分序列克隆到原核表达质粒pET-28b(+)中, 重组质粒转化E. coli BL21 (DE3)菌株, IPTG诱导后成功表达重组PCNA蛋白, 再用该重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体用于PCNA蛋白的免疫印迹分析(Western blotting assay, WB)。采用实时定量PCR (quantitative Real-time PCR, qPCR)及WB方法检测水螅头部再生进程中其PCNA表达水平的动态变化, 结果表明在再生进程的中后期阶段水螅PCNA表达量呈现一定程度的上调。结果暗示水螅头部再生进程的中后期阶段其伤口及附近区域可能存在细胞分裂活动。     

雄激素受体在肝癌发生过程中的表达及意义

为了进一步探讨雄激素受体（ＡｎｄｒｏｇｅｎＲｅｃｅｐｔｏｒ,ＡＲ）作为肝癌标志物的意义,本文采用免疫组织化学ＡＢＣ法,对二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌发生过程中肝细胞雄激素受体（ＡＲ）的表达进行了系统观察。结果显示：正常大鼠的ＡＲ阳性肝细胞极少,ＤＥＮ诱癌第４周可见少量肝细胞呈ＡＲ阳性表达,细胞散在分布,胞质和／或胞核内可见棕褐色阳性反应颗粒。随着肝癌发展进程,ＡＲ阳性肝细胞数逐渐增多,呈簇状或片状分布。至诱癌第１８周,肝癌结节内肝癌细胞大多呈ＡＲ阳性表达。本实验结果表明,ＡＲ与肝癌的发生和发展具有密切关系     

INFLUENCE OF ULTRAVIOLET RADIATION ON THE EXPRESSION OF PROLIFERATING CELL NUCLEAR ANTIGEN AND DNA POLYMERASE α IN SKELETONEMA COSTATUM (BACILLARIOPHYCEAE)1

To evaluate the effects of UV radiation on the expression of DNA replication‐related genes in phytoplankton, the mRNA levels of DNA polymerase α and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in a marine diatom, Skeletonema costatum (Greville) Cleve, were studied using the methods of real‐time quantitative PCR. Treating the algal cultures with UVC radiation for 15 min caused severe mortality during the 24‐h period after treatment. A significant amount of thymine dimers was detected in the treated cultures, and the mRNA levels of DNA polymerase α and PCNA increased by as much as 140 and 23 pmol·(g total RNA)^?1, respectively, compared with the control experiments. In contrast, massive cell deaths did not occur in cultures receiving UVA/B radiation, and the formation of thymine dimers was inconspicuous. Also, UVA/B did not enhance the expression levels of DNA polymerase α or PCNA. Based on the calculation of biologically effective UV doses, daily exposure to sunlight may increase the expression of DNA polymerase α or PCNA genes in S. costatum by 12% at sea surface. This level of increase does not seriously affect the value of using these genes as growth indicators, but caution is needed in the extrapolation of this conclusion to all phytoplankton species.     

应用组织芯片技术研究MMP-9和PCNA在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的探讨MMP-9和PCNA在宫颈癌组织中的联合表达、相关性及其临床意义。方法采用组织芯片和免疫组化技术检测143例宫颈浸润癌(ICC)、20例癌旁正常宫颈上皮(NCE)中MMP-9和PCNA的表达,统计分析MMP-9、PCNA表达与病理分级、临床分期和淋巴结转移等临床病理因素的关系。结果 MMP-9、PCNA在宫颈癌组织中的阳性率分别为89.5%(128/143)和93.7%(134/143),较正常宫颈组织中的阳性率40.0%(8/20)和15.0%(3/20)显著增高(P=0.000)。MMP-9的表达与病理分级(r=0.342,P=0.000)、淋巴结转移(r=0.197,P=0.018)和间质浸润深度(r=0.203,P=0.015)呈正相关。PCNA表达与临床分期(r=0.228,P=0.006)、病理分级(r=0.330,P=0.000)呈正相关。MMP-9和PCNA在宫颈癌组织中的表达强度呈正相关(r=0.228,P=0.006),二者表达一致的比例高达87.41%(125/143)。结论MMP-9和PCNA在宫颈癌中的异常表达与肿瘤的分化、侵袭和发展密切相关,联合检测二者的表达对于进一步理解宫颈癌的生物学行为和判断预后有一定价值。