植物超薄切片制备技术

用电子显微镜(指透射式)来研究植物细胞的超微结构,必须把植物材料制成超薄切片,其厚度不能超过0.1微米,以0.05微米(500埃)以下更为适宜。这是由于电子束穿透能力弱和电镜分辨率高的特点所要求的。     

超薄切片套片法

超薄切片捞取方法很多,近年来,我们采用铂金丝环套片法,与目前采用的沾片法和水底捞片法相比,具有较多的优点。铂金丝环套片法操作简单,易于掌握,而且能使切片平整地铺在铜网中央。沾片法易将带状的连续切片打乱,切片也往往有皱折。水底捞片法,固然可以使切片保持平整,但操作不易掌握,对于缺乏经验的新手来说,很容易将切片捞偏,即使是熟练的操作者,     

电子显微镜超薄切片常规技术

本文将简要介绍国内电子显微镜(简称电镜)超薄切片的常规技术,供初学者便于了解和使用这种技术。表1介绍了人的眼睛借助仪器可以观察的范围。在电镜日常工作中,如何提高电镜的分辨率使之达到预期的目的,标本制备工作是十分重要的环节。也是电镜工作中最繁重、最艰巨的工作。这方面国内外均有专著出版。现结合前人的经验和国内一些实验室常用的方法和操作规程加以介绍。     

保持培养细胞原位、原形的超薄切片制备法

本文介绍先用环氧树脂Epon812包埋剂制成丘状膜,再在膜上培养细胞,直接将膜与细胞一起包埋,制备超薄切片。此种方法不仅能克服以往培养细胞需要离心成团,容易造成细胞破碎、变形的缺点;还能避免琼脂预包埋法悬浮细胞造成的抗原封闭;并能得到为数较多的连续超薄切片。它操作简便,较好地保持了培养细胞生长的原来位置及原有形状,为培养细胞进行免疫电镜的操作和提高制备培养细胞超薄切片的数量和质量提供了一种有效的途径。     

禾本科植物超薄切片应注意的问题

在透射电镜的生物样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术,一般来说,植物样品的超薄切片比动物样品难度要大,而在植物材料中,禾本科植物材料的制样又特别困难,因为禾本科植物(如水稻、小麦、玉米、高梁、甘蔗等)质地坚硬,细胞壁角质化,并且充满硅质,它们对固定液的渗透具有不可忽视的障碍作用,按常规的生物样品制备方法常常失败或效果不佳。样品制备的好坏,很大程度上依赖于操作者的经验和操作技术,作者近几年来对禾本科植物叶片做了一些超薄切片工作,体会到要获得较理想的超薄切片,必须十分认真地对待制样过程中的每一操作步骤,任何环     

生物样品冷冻超薄切片技术简介

电子显微镜超薄切片技术的发展开拓了组织学和细胞学的显微和亚显微结构的研究。但由于常规超薄切片术采用强烈化学囿定,有机溶剂脱水和塑料包埋等步骤所带来的结构损伤和分子活性散失等缺点,人们在光学显微冷冻切片和常规超薄切片基础上,近年来发展了冷冻超薄切片制样技术。七十年代初期,商品冷冻超薄切片装置先后问世,进一步促进了这一技术的发展。     

防止超薄切片铅污染的一种方法

采用密封的有机玻璃操作箱,以广口容器盛钠石灰长期置于操作箱内,利用钠石灰不断吸收CO_2(其吸收CO_2的能力可达钠石灰量的25％)。造成一个基本无CO_2的环境。铅染色时,临时打开箱盖,迅速送入样品,盖上箱盖。然后通过操作箱上的橡皮手套,按一般程序进行铅染色。我室CO_2浓度虽比一般环境为高,利用这种方法,自1973年以来,很少出现铅污染现象。钠石灰内加有指示剂,呈粉红色。色彩消褪表示吸收CO_2能力降低或消失,此时需要更换新的钠石灰。     

植物材料的冷冻超薄切片制作法

冷冻超薄切片法比常规超薄切片法步骤少、速度快,它不需接触到剧烈的化学试剂及脱水、包埋等,并能良好地保存细胞中的一些水溶性物质,在电镜下所观察到的细胞结构更接近于自然状态。因此,它比较适合于形态学、电镜细胞化学和元素的X-射线微区分析等研究领域。     

超薄切片用刀值得注意的几个问题

本文就超薄切片过程中玻璃刀的制作及使用玻璃刀和钻石刀切片时容易勿视的几个技术问题进行探讨,以期对提高超薄切片的质量有一定的帮助。     

利用蜡叶标本进行子囊超薄切片的方法

利用蜡叶标本为材料,对地衣型子囊菌石耳科子囊进行超薄切片实验。由于对蜡叶标本的充分活化与包埋是该方法的关键,因此,在活化剂和包埋剂等方面进行了选择和调整,从而使超薄切片获得了良好的效果。     

病理快速冷冻切片染色的质控切片制备

目的探索一种较佳的病理快速冷冻切片染色质控片的制备方法。方法随机抽取60例快速冷冻组织,每例取2块组织,随机分为A、B二组,在-25℃速冻后,A组(标准组)切片放入AAF液(由95%乙醇A、乙酸A、甲醛F按85:5:10的比例配制而成)固定30s后立即进行HE染色,B组切片放入AAF液固定30s后取出室温晾干后放进冷冻切片机内过夜。余下的A组及B组组织进行后续2种不同的操作。C组:得到A组切片后的组织不做任何处理,直接放冷冻切片机机箱内,并将冷冻切片机箱体温度调高至-10℃,第二天上午再次调至-25℃;D组:得到B组切片后的组织于组织上加包埋剂覆盖后放冷冻切片机机箱内,余操作同C组。C、D两组于第二天上午8点再次进行冷冻切片后同B组一同进行HE染色,以十分制评定切片有无裂隙、皱褶或冰晶,染色后组织结构、细胞核着色和核质对比清晰度等6项指标的得分,分别与A组的染色片进行比较。结果 A、B两组切片质量评价指标得分无明显差别,C组切片无裂隙指标得分低于A组,D组无冰晶指标得分低于A组;B、C两组的组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分与A组比较无显著差异;D组组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分均低于A组。结论新鲜的组织冷冻切片后,切片立即放入AAF液固定30s,随后取出,常温晾干后再次放进冷冻切片机机箱内过夜直至第二天上午放入全自动染色机内进行HE染色,观察染液的染色力,适用于每天快速冷冻切片工作开展前的全自动染色机的染色质控。     

超薄切片玻璃“废刀”的再用

目前国内外电镜实验室在制作超薄切片时,绝大多数用玻璃刀。一般在切过一个组织块后,玻璃刀就不能再用。因此,制刀玻璃的耗量较大,且不易寻找合用的玻璃。四川医学院电镜室用“废刀”制成重制刀,方法较简便。现将重制方法及效果介绍如下:1.方法(1)去蜡除去玻璃刀上的胶布,将刀立放在几层柔软的纸上(斜面向下),置于约80℃烤箱中,使熔化的蜡被纸吸去。取出后再用软纸除去玻璃刀上残留     

哺乳动物精子形成过程的研究——超薄切片和冷冻蚀刻

哺乳动物精子发生过程包括精原细胞有丝分裂、精母细胞减数分裂和精子形成。精子形成就是将子细胞发育为精子的过程,在细胞学和遗传学上都具有重要意义。本文报道采用冷冻蚀刻和超薄切片两种方法制备大白鼠、小白鼠、狗、人的睾丸样品,在电子显微镜下的观察结果,讨论精子头,尾的形成和内质网、高尔基复合体在精子形成中的作用。     

超薄切片染色后一种简易快速的洗涤法

超薄切片在电镜观察之前染色这一关是比较麻烦,也是比较重要的一关。现在LKB公司虽然已经生产出一种超薄切片自动染色器,每次同时能染色25个铜网,给超薄切片染色带来了很大的方便。但是该仪器价格昂贵(近一万美元),很不经济。因此目前大多数工作者仍以传统的方法进行染色,即液滴染色法。但用这种传统的方法染色是很麻烦的,尤其是在染色后     

徒手切片夹持物的制备

生物的细胞、组织,大都要切成透明的薄片,让光线透过,在显微镜下才能看清楚,徒手切片是中学常用的一种简易实用的切片方法,较硬的材料,如植物的根、茎、松树的针叶、动物的骨骼等可直接用刀切薄。但有很多细薄柔嫩、幼小的材料,如叶片、花瓣、各种组织等要用夹持物。材料可用: (1)植物茎的髓心,如接骨木、向日葵等。(2)地下茎、马铃薯、菊芋的块