农杆菌介导的携带egfp基因载体转化寡雄腐霉

【目的】寡雄腐霉(Pythium oligandrum Drechsler)是一种对动、植物和环境无害,兼具杀菌和增产效果的生防真菌。通过研究建立农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系。【方法】选用EHA105、AGL-1、LBA4404三种农杆菌菌株对寡雄腐霉进行遗传转化研究,通过对影响遗传转化效果的条件参数试验优化,确立适宜寡雄腐霉遗传转化的农杆菌菌株及转化条件,建立农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系。【结果】经研究发现,所选3种农杆菌菌株中EHA105菌株对寡雄腐霉的遗传转化效果最好,其次是AGL-1菌株,LBA4404菌株转化效果不好。EHA105菌株经IM(含300μmol/L AS)诱导培养至OD_(600)=0.6时,与浓度为10~6–10~7个/m L的寡雄腐霉孢子悬浮液以1–10:1的比例混合,在25–26°C以液体振荡的方式避光共培养72 h(pH 5.0,含300μmol/L AS),寡雄腐霉菌体液体振荡恢复培养24 h,涂布抗性选择平板筛选寡雄腐霉转化子,即可得到寡雄腐霉基因工程菌株,其转化率可达到130个转化子/106个孢子。【结论】本研究首次构建了农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系,研究结果可为寡雄腐霉的生防机制及分子育种研究提供技术支撑。     

抗生素和干扰素

931246定位于Laetoeoceu:lactis ATCC 11454染色体上的肚类抗生素乳酸链球菌肚前体的编码甚因〔俄〕/Rumer,L.M.…j Biotekhnologiya一1092,3一20~24〔译自DBA,1992,11(21),92一11798〕 通过接合作用将编码肤类抗生素乳酸链球菌肤的生物合成基因由Lae名oeoee翻s乙aet‘:ATCC11‘54转移到少质粒的 L.lac“s菌株(LMo23o、LPIT6)中。采用不同方法,从产乳酸链球菌肤的转接合体中分离出质粒的所有尝试均告失败。利用乳酸链球菌肚前体甚因的寡核普酸探针进行的印迹杂交实验表明,编码基因位于供体和转接合体的染色体上。(陶冶)931247卡那…     

生防真菌寡雄腐霉原生质体的制备及再生

寡雄腐霉Pythium oligandrum是一种对动、植物和环境无害,兼具杀菌和增产效果的生防真菌。本研究以0.8mol/L甘露醇与25mmol/L CaCl_2和10mmol/L Tris-HCl作为渗透压稳定剂,使寡雄腐霉菌丝体在含有裂解酶、纤维素酶、破壁酶的复合酶系中酶解得到其原生质体。此原生质体通过液体振荡培养的途径恢复再生1d后涂于平板上可生长为成熟菌体。本研究所述方法制备得到的寡雄腐霉原生质体数量超过1×10~9CFU/m L,活性超过80%;通过液体培养再生途径使得寡雄腐霉原生质体再生率达32.9%。此方法操作简便,稳定性好,获得的寡雄腐霉原生质体品质高、数量多,完全能够满足后期基因遗传转化、细胞融合培养等研究应用。     

食品上的应用

923847用甲醉利用菌进行高效发醉的方法〔英〕/Poehlan-d,H。D.…了Aeta Bioteehnol。一1091,11 (4)一303~314〔译自DBA,1992,11(7),92一03927〕 检验了嗜中性甲基营养菌万eth夕lobac宕11“s91,eoge.eo MB53(ZIMET 10776)在12升耐压金属发酵罐、40升玻璃发酵罐或250升耐压金属中试发酵罐中运转5个多月的单细胞蛋白(S CP)生产过程。在微生物组成稳定时,用不灭菌法仍可获得稳定的产率、生长率和产品质量。在pH6.了士0。1和34.8℃,以及相应的最低甲醇比消耗为2。069甲醇/克生物量时,发酵最佳。临界稀释率为O。68/hr,临界滞留时间为1。s…     

能源上的应用

、863409不需要“原料或食物”〔英〕/Phi卜1 ips,J.A.了Chemteeh一1985,15(6)一377一384〔译自CBA,1985,(9),3093〕 评论和讨论了用生物学方法从生物量生产燃料和化学制品。(王振江)863410上流厌气污泥覆盖层反应器中pH6时乙酸一丙酸混合物的产甲烷作用仁英〕/TenBruomeler,E.…声Appl.Environ Mier-obiol一1985,49(6)一1472~1477〔译自CBA,1985,(9),3094〕 可以应用上流厌气污泥覆盖层反应器高效率地进行厌气消化来处理各种废水。在上流厌气污泥覆盖层反应器中,污泥的滞留时间随自然固定化机制而增加了。当这种污泥在含酸废水中培…     

基因诱变、重组、克隆

、舀巧‘,‘...Jf护.口.曰口,今.二‘J舀函~....阅.侧尸‘J月..‘.924315用寡核普酸杂交检测非邻接短序列〔英〕/Borghesi一N ieoletti,C.…了BioTeehniques一1092-12(4)一凌74一475〔译自DBA,1992,11(11),92一06022〕 模型系统采用的寡核普酸互补于免疫球蛋白可变区基因3产侧翼保守性七聚体和九聚体序列的各区。单独的短核普酸(7 bp或gbP)不能作为杂交探针,但含有由电桥相连的两个保守序列的构建物能够杂交。通过降解碱基和保留七聚体与九聚体间的起始间隔物形成桥。这种桥连寡核普酸探针可用于Southern印迹和细菌基因文库筛选的杂交…     

酶和发酵工程

吕30774利用细菌产生酶学活性的真核过氧化物歧化酶的方法〔专,英叮H盯tman,R.…/US Patent US 4742004.Pub.阅.05.88.APPI.US 644105,filed 27.08.84〔译自CBA:1988,(8),3234〕 在含锌及含铜(非生一资抑制量2 ppm以上)的生产培养基中,通过培养转化细菌可以产生人体铜锌过氧化物歧化酶的酶活多肤类似物。(吴南君)890775凝乳酶组分的分离方法〔专,英〕/Birsehbaeh,P./US Patent US 4745063.Pub。17.05.88。field 27.08.87.〔译‘自CBA,1988,(8),3238〕 通过把混合物的pH和电导率分别降低到3.8~5.2和2 X 10“一19 x 20”微欧姆及…     

医药上的应用

抗生素和干扰素931958在始旋链,菌中诱导产生原始.案〔英万Paquet,V.…/Bioteehnol.Lett一1992,14(11)。-1065~1070〔译自DBA,1903,12(i),。3-00090] 利用若干内酩检测了始旋链霉菌非生产突变株 (C16/4)和高产突几变株(Prn)中原始霉素 (PM)生产的调节作用。将Prn置于含复合培养基(pHe.s)的21发酵罐内,于27℃、450~1000rpm搅拌和41/min通气条件下培养。再于含合成培养基的201发酵罐内搅拌(5。。印m)培养Prll (pH6.s、27℃、通气51/min),以生产诱导因子。温育48小时后PM产生达最大。具长侧链的内醋(0 .25产g/ml诱导浓度)均对PM生产有…     

寡雄腐霉发酵液对番茄生长的影响及对灰霉病的防治作用

为了研发对番茄灰霉病高效、稳定、安全的生物农药,试验利用自主分离获得的寡雄腐霉菌株制备发酵液,采用盆栽试验研究寡雄腐霉发酵液对番茄生长的影响和对灰霉病的防治效果及机制,并在大田生产中验证其生防效果。结果表明,盆栽试验中,寡雄腐霉发酵液促进健康番茄植株生长,植株总生物量和根系生物量分别增加9.5%和15.4%,提高了植株叶绿素含量、根系活力及氮、磷、钾吸收量,并使带病番茄植株的发病率和病情指数分别降低57.2%和60.3%,相对防治效果达60.3%,施用寡雄腐霉发酵液对番茄叶片细胞膜具有保护性,降低丙二醛含量,提高病原性相关酶""超氧化物歧化酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶活性。后续田间试验中寡雄腐霉发酵液对番茄灰霉病的防治效果达71.2%。说明寡雄腐霉发酵液能有效防治番茄灰霉病,还具有促进番茄生长的作用,并且可诱导番茄植株对病原菌的防御作用,应用前景广泛。     

基因工程

940470利用固粉寡dT引物分析cONA序列〔英〕/Thom“s,M .G.…泌Nueleie Aeids Res一1993,21(16)一3015~3916〔译自DBA,1993,12(19),93一10795〕 为提高poly(A/T)段的分辫率,研究出一种用PCR给DNA定序的好方法。利用载体侧翼引物(其中一个已用生物素化方法截短)直接从分离的入噬     

食品上的应用

872325使微生物粗制凝乳酶受热不稳定的方法〔专,英〕/Branner一Jorgensen,5.…IUS Patent US吐591565.Pub.27.05.86。ApPI.DK 791457,filed 09.04.79〔译自CBA,2986,(8),3219〕 用过乙酸及其盐类的水溶液处理米黑毛霉(Mucor,iehei)粗制凝乳酶,可以获得用于制造干酪的降低了热稳定性的微生物凝乳酶。(白田)8了2326脂质膳食和生物技术〔法〕/未署名了Biofutur一1986,(通5),一19~32〔译自CBA,1986,(s),3220〕 本文为评论,附有参考文献35篇。内容涉及生物技术将怎样回答饮食中的脂质所提出的健康问题。‘(白田)872327用猪胰磷酸脂酶A…     

组织与原生质体培养

924483链格抱原生质体释放和再生的最佳条件〔英〕/Car-y,J .W.…了Lett.Appl.Mierobiol一1992,14(3)一100一103〔译自DBA,1992,11 (11),92一06034〕 在含1.2M NaCI、MgCO‘或山梨醇的渗透介质(ZomM MgSO‘、iomM NaPO‘、pHS.s)中悬浮链格抱(AI￡e,:a,￡a alte,:a‘a)SRRC1109菌丝,以备生产原生质体。加入不同组合的水解酶后,将混合物在33℃下轻摇90分钟。从培养20小时的培养物中收集19湿菌丝,将之与Novozy-me234、Driselase和户葡糖普酸酶在1.2M KCI渗透介质中共同温育时结果最佳(4.56十/一。.33x10’原生质体/毫升)。优…     

农业其它

921944通过胚珠胚培并获得的属间杂种生产形态学和细胞遗传学〔英〕/Ahmad,F.”·了Theor.Appl.Genet一1991,51(6)一533~539〔译自DBA,1991,10(22),91一13002〕 将小麦(全r￡‘云c“仍a召t云。祝哪)ev.Fukuho与无融合生殖种E乙鲜饥。。scab,。s(syn.A夕ro夕-一83一歹,00 scab,。州)(Zn=6x=42)DZss3、D 2911、J6Cioi和J6Cios。杂交生产属间杂种。17。,朵,l’麦小花授粉,将4组杂交获得的1739个可能的受精胚珠离体培养。由此产生了9个(0 .52%)小型的、发育不良的、无结构胚,所有这些均来自授粉亲本J6Clo59。5个胚直接萌发形成5株小植…     

寡雄腐霉施用时期对设施黄瓜霜霉病的防治试验

寡雄腐霉是一种对多种植物病害有很好防治效果的新型生物农药。本文通过田间试验明确了寡雄腐霉在黄瓜霜霉病不同发病时期使用时的防治效果。结果表明,寡雄腐霉对黄瓜霜霉病预防效果达到68.9%,发病初期防治效果达到61.9%,发病后期防治效果只有23.5%。因此,在使用寡雄腐霉防治黄瓜霜霉病时一定要在未发病或发病早期使用才能达到理想的防病效果。     

食品上的应用

940806桔皮和酒厂葡萄梗在用高级真菌固态发醉后体外消化率的变化〔英〕/Nieolini,L.…了Biores。urc。Technol一1903,45(i)一17~20〔译自DBA,1993,12(19),93一1「1086] 检验了桔皮(OP)、酒厂葡萄梗(GS)和混合的OP GS在用糙皮侧耳(ple。,o￡。。o。‘,。a-t“s)、田头菇Ag:oc李     

抗生素

881187 OganomyeinE的生产方法〔专,英〕/Abe,M.…了European Patent Appl.EP 0226636 Pub 01.0遵.87,Appl.JP21一386/85,filed 24.09 .85〔译自CBA,1 987,(6),2577〕 通过一种醋酶的作用,从头霉素化合物中生产oganomycinE。头霉素可由细菌就地提供。酉旨酶活性由酵母菌提供。球拟酵母(ToruloPsl’s) YE一08叨7L株是一种具醋酶活性特点的代表株。(戴顺志)881188生理活性物质FO一8洲及其制备方法仁专,英〕/Mizoue,K.…了EuropeanPatent Appl EP 0216607.Pub.01.04.87.Appl.JP 205278/85,filed 19.09.85〔译自CBA,1987,(6),25…     

DNA分析与扩增

JJ,‘翻920422大片段定位缺失:缝合环聚合酶链反应〔英〕/5 ong,C.…/B ioteeh Forum Enr一1991,s(s)一130一132仁译自DBA,2991,10(12),91-06633〕 用缝合环聚合酶链式反应(PCPCR)在载体中的噬菌体T7启动子与菊花矮小类病毒(CSV)的cDNA序列之间制造缺失,这样,不含外源序列的CSV RNA即可通过T7的离体转录来合成。新方法应用超螺旋质粒pBCSU172作为PCR扩增模板,产生不含要删除区的线性DNA分子。采用与线性分子两端相配对的第三寡核昔酸来制备缝合环状DNA,并用于大肠、杆菌JM109的直接转化。用该法合成了与天然CSV序列一样…     

食品上的应用

923449重组体葡聚糖水解啤酒酵母菌株的构迷与分析〔英〕/Suihko,M.L.…了Appl.Mierobiol一B 1 oteehnol一1991,35(6)一751~757〔译自DBA,1992,11(5),92一02748〕 构建了4种不同类型的具纤维素酶活性底面发酵酿酒酵母(Saecha,o仍鲜ees ee:e‘s￡ae),方法为利用共转化和基因置换,使里氏木霉(T八-“hoder,a俨eese￡)vTT一D一50133的纤维素酶egll基因整合到酿酒酵母VTT一A一63015(A15)的PGKI或ADHI位点。用质粒pMA91和质粒pAAHS构建分别在PGKI和ADHI启动子和终止子之间携带egn基因的质粒pMN20和质粒pMN200。构建的单拷贝整合…     

酶和发酵工程

872026腺昔酸激酶及其生产过程〔专,英」/Imahori,K.…了US Patent US 4554272.Pub.22.04.86.APpl.JP 55一141405,川ed 09.10.50〔译自CBA,1986,(s)2991〕 通过培养一种杆菌产生抗热的腺昔酸激酶,在50℃下温育15分钟后,酶活性可保持80%。(高吉寅)872027发酵生产苯丙氨酸解氨酶的方法〔专,英〕/F inkelman,M.A…了US Pa-tent US 4584273.Pub.22.04.86.Appl.US 547239,filed 31.10.53〔译自CBA,1986,(8)·,2992」 一首先在促进有氧生长条件下,继而在厌氧静止条件下培养红酵母属(Rhodotorula)或红冬抱酵母属(RhodosPor‘d沁。)酵…     

基因标记、转化、表达与检测

922864降解的PCR引物的一个简单有效的纯化方法〔英〕//Fekete,A.…1 Bioteehnol.Teeh一1901,5 (6)一479~452〔译自DBA,2992,11(3),92一01226〕 引物是在一20~一9。℃下贮存过程中降解的。在8%的琼脂糖凝胶将引物电泳,通过对凝胶进行槽切使主带电析出来。电泳和电洗脱过程只需45分钟。用这种装置也可对PCR样品作这类分析。用异丁醇提取再用乙醇沉淀来回收引物。产率为20~40%,在26Onm的吸收值与在280nm波长上吸收值比率大于1.8。这样纯化后可得到好的扩增效果。使用本法可使流产布氏杆菌(B,”ee乙la abo,‘咎s)519 DNA的一个607bp的…