大豆异黄酮激活PPARγ抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖

目的：探讨两种大豆异黄酮主要成分染料木黄酮（genistein,GEN）和大豆苷元（daidzein,DAI）抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用与过氧化物酶体增殖激活物受体γ（peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ）信号途径的关系。方法：采用免疫细胞化学染色方法观察MCF-7细胞的PPARγ表达情况,PPARγ介导的荧光素酶报告基因检测大豆异黄酮和PPARγ配体罗格列酮（rosiglitazone,ROS）对MCF-7细胞PPARγ的激活作用,MCF-7细胞分别经8×10-5mol/L GEN、DAI和1×10-5mol/L的ROS单独或联合1×10-5mol/L的PPARγ特异性抑制剂GW9662联合处理24、48和72 h后,用CCK-8法检测细胞增殖。结果：MCF-7细胞存在有PPARγ表达,GEN、DAI呈剂量依赖性增强报告基因荧光素酶活性,且这种作用可被GW9662明显阻断;GEN、DAI和ROS呈时间依赖性明显抑制MCF-7细胞增殖（P〈0.05）,而GW9662可以显著削弱GEN、DAI和ROS对MCF-7细胞的增殖抑制作用（P〈0.05）。结论：大豆异黄酮可通过激活乳腺癌MCF-7细胞的PPARγ信号途径抑制其增殖。     

β-胡萝卜素抑制MCF-7细胞生长上调过氧化酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达

为了研究过氧化酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达在β 胡萝卜素影响乳腺癌MCF 7细胞活力中所起的作用,采用MTT法测定细胞活力、Western 印迹检测细胞中PPARγ的蛋白质水平,用RT-PCR从mRNA水平检测细胞内PPARγ、P21^WAF1/CIP1、COX-2和P27表达.研究发现,β 胡萝卜素显著抑制人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的生长,β-胡萝卜素对细胞生长的抑制作用呈现出时间和计量依赖关系;β-胡萝卜素能够呈现时间效应地从mRNA和蛋白质水平显著上调PPARγ的表达,β-胡萝卜素能够通过PPARγ调节P21^WAF1/CIP1和COX-2mRNA水平;PPARγ的抑制剂GW9662和抗氧化剂还原型谷胱甘肽（GSH）都能部分阻止由β-胡萝卜素引起的细胞活力下降.研究结果提示,激活PPARγ途径和调制细胞氧化状态是β 胡萝卜素对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制效应原因之一.     

毛蕊异黄酮抑制SIRT1促乳腺癌细胞MCF-7凋亡

目的:探讨毛蕊异黄酮促乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制。方法:MTT检测低、中、高(10μM,50μM,100μM)剂量的毛蕊异黄酮对细胞活力的影响;Tunel检测毛蕊异黄酮对细胞凋亡的影响;Western blot检测SIRT1,p53和cleaved caspase-3的蛋白表达;Real-time PCR检测caspase-3 mRNA的表达。结果:毛蕊异黄酮能够剂量依赖性地降低细胞活力,100μM剂量组的毛蕊异黄酮显著地促进肿瘤细胞凋亡并降低SIRT1,增加p53和cleaved caspase-3的蛋白表达。SIRT1抑制剂烟酰胺(Nicotinamide,NAM,300μM)组与毛蕊异黄酮处理组相比显著地抑制SIRT1的蛋白表达,p53和cleaved caspase-3蛋白表达水平进一步增加;SRT1720(SIRT1特异性激动剂)与毛蕊异黄酮共孵育组逆转SIRT1蛋白表达,降低p53和cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:毛蕊异黄酮促进肿瘤细胞MCF-7的凋亡,部分可能是通过降低SIRT1的表达水平,从而增加p53和cleaved caspase-3的蛋白表达促进细胞凋亡。     

槟榔碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察槟榔碱对人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度（0、10、30、50、100、300、500μmol/L）槟榔碱对MCF-7细胞增殖的影响,Hoechst 33342染色和流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax,Bcl-2和P53蛋白表达。结果：低浓度（0、10、30、50μmol/L）槟榔碱不影响细胞的增殖和凋亡;而高浓度（100、300、500 μmol/L）槟榔碱呈浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖、诱导MCF-7细胞凋亡、提高P53和Bax蛋白表达、降低Bcl-2蛋白表达。结论：高浓度槟榔碱抑制MCF-7细胞增殖、诱导凋亡,其机制可能与提高P53和Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达有关。     

PPARγ在心脏非心肌细胞增殖中的作用

目的：探讨PPARγ激活物对心脏非心肌细胞（cardia cnonmyocyte,CNM）增殖的影响及其可能涉及的PPARγ途径。方法：体外原代培养新生大鼠的CNM,以AngⅡ刺激,并分别给予不同浓度的吡格列酮和15-脱氧前列腺素J2（15d—PGJ2）。以MTT比色法和^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验检测CNM增殖情况,以瞬时基因转染CNM测定PPARγ活化后对靶基因的转录调控活性。结果：AngⅡ刺激后CNM明显增殖、^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷的掺入明显增加,经不同浓度的吡格列酮和15d—PGJ2作用后,呈剂量依赖性抑制CNM的增殖和^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入。将PPARγ表达质粒载体与含乙酰辅酶A氧化酶（ACO）启动子的过氧化酶体增殖反应元件（PPRE）表达质粒共转染CNM,其荧光素酶的表达量较非共转染显著增强;以吡格列酮和15d-PGJ2刺激后,荧光素酶的相对表达量呈剂量依赖性显著增强。结论：PPARγ激活物吡格列酮和15d—PGJ2在体外显著抑制新生大鼠CNM的增殖,这一过程可能与PPARγ的激活有关。     

PPAR??激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞生长 抑制及诱导凋亡作用研究

目的:观察氧化酶体激活物增殖受体(PPARγ)激动剂罗格列酮(ROZ)在体外激活PPARγ后对MCF-7细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法:MTT法检测ROZ对MCF-7细胞的生长抑制作用;集落形成实验观察ROZ对MCF-7细胞集落形成的影响;不同浓度ROZ作用72h,Hoechst33342染色观察MCF-7细胞的形态变化,流式细胞光度分析术(FCM)检测凋亡细胞百分率以及ROZ对细胞周期的影响;Western blot方法检测ROZ对MCF-7细胞Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:ROZ可呈剂量依赖性抑制MCF-7细胞的生长及集落形成。ROZ浓度为6×10-5M和3×10-4M时则G1期细胞数明显增加,S期相应减少。Hoechst33342染色经ROZ处理的肿瘤细胞染色质呈颗粒状,且有凋亡小体出现。FCM检测结果显示,ROZ作用72h凋亡细胞数达22.05%。Western blot提示ROZ可抑制Bcl-2表达,促进Caspase3表达。结论:ROZ在体外可抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡,这可能与其抑制Bcl-2表达、促进caspase3表达有关。提示ROZ有望成为乳腺癌治疗药或肿瘤治疗的辅助用药,PPARγ有潜力成为肿瘤治疗的新靶点。     

大豆异黄酮抗辐射损伤的作用

大豆异黄酮是大豆中的一类多酚化合物。近年来一些体外细胞培养及动物实验表明,大豆异黄酮通过抗氧化、抑制细胞凋亡、调节细胞基因表达等作用机制,对辐射损伤有一定的防护作用。     

大豆异黄酮抗辐射损伤的作用

大豆异黄酮是大豆中的一类多酚化合物。近年来一些体外细胞培养及动物实验表明,大豆异黄酮通过抗氧化、抑制细胞凋亡、调节细胞基因表达等作用机制,对辐射损伤有一定的防护作用。     

miR-200c抑制人乳腺癌MCF-7细胞糖代谢

为探讨miR-200c对人乳腺癌MCF-7 (Michigan cancer foundation-7)细胞糖代谢水平的影响,本研究使用miR-200c mimics转染MCF-7细胞,通过定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测各组细胞miR-200c的表达水平;利用细胞计数盒(cell counting kit-8, CCK-8)检测miR-200c mimics转染对MCF-7细胞增殖的影响;通过葡萄糖试剂盒检测各组细胞葡萄糖的消耗,乳酸试剂盒检测各组细胞乳酸的释放量;通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组细胞糖代谢相关酶己糖激酶(hexokinase 2, HK2)以及肌肉丙酮酸激酶同工酶2 (pyruvate kinase isozyme type M2, PKM2)蛋白表达水平。与miR-NC组相比,miR-200c mimics转染明显上调MCF-7细胞miR-200c m RNA水平;且miR-NC组和MCF-7组miR-200c mRNA水平没有明显差异;细胞计数盒(cell counting kit-8, CCK-8)检测结果显示,与miR-NC组和MCF-7组相比,miR-200c mimics转染不仅明显降低乳腺癌MCF-7细胞的细胞活力,而且显著减少乳腺癌MCF-7细胞葡萄糖的消耗;此外,Western blotting结果显示,miR-200c显著下调MCF-7细胞糖代谢相关酶HK2和PKM2的表达。综上结果表明,miR-200c会抑制人乳腺癌MCF-7细胞糖代谢。本研究成果为乳腺癌防治提供一定的参考价值。     

PPARγ在肿瘤中的双重作用

过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)是一种配体依赖的核转录因子,属于Ⅱ型核激素受体超家族成员.以前的研究主要集中于PPARy在调控脂质代谢、糖代谢、免疫炎症、细胞增殖和分化等方面的作用.随着研究的深入,PPARγ在肿瘤中发挥...     

白藜芦醇对乳腺癌细胞MCF-7 增殖的影响

目的:研究白藜芦醇体外活性,确定它的植物雌激素作用。方法:采用MTT法观察不同浓度白藜芦醇对MCF-7细胞增殖作用的影响。采用DNA ladder法和荧光显微镜观察高浓度白藜芦醇对细胞的影响。免疫组化法观察低浓度白藜芦醇对核增殖抗原PCNA表达的影响。结果:MTT结果显示白藜芦醇高浓度抑制MCF-7细胞增殖,IC50为8.70×10-5mol/L;低浓度(10-7~10-6mol/L)则对细胞有促增殖作用,最高促增殖浓度为1.0×10-7mol/L。DNA ladder和荧光显微镜可观察到高浓度白藜芦醇作用后细胞典型的凋亡形态。免疫组化结果显示低浓度白藜芦醇作用后,细胞核内PCNA表达明显增加(P<0.05)。结论:高、低浓度的白藜芦醇对MCF-7细胞分别表现为诱导凋亡和促增殖作用,呈现出植物雌激素对MCF-7细胞典型的双向调节作用。     

白藜芦醇对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的：研究白藜芦醇体外活性,确定它的植物雌激素作用。方法：采用MTT法观察不同浓度白藜芦醇对MCF-7细胞增殖作用的影响。采用DNA ladder法和荧光显微镜观察高浓度白藜芦醇对细胞的影响。免疫组化法观察低浓度白藜芦醇对核增殖抗原PCNA表达的影响。结果：MTT结果显示白藜芦醇高浓度抑制MCF-7细胞增殖,IC50为8.70×10-5mol/L;低浓度（10-7~10-6mol/L）则对细胞有促增殖作用,最高促增殖浓度为1.0×10-7mol/L。DNA ladder和荧光显微镜可观察到高浓度白藜芦醇作用后细胞典型的凋亡形态。免疫组化结果显示低浓度白藜芦醇作用后,细胞核内PCNA表达明显增加（P〈0.05）。结论：高、低浓度的白藜芦醇对MCF-7细胞分别表现为诱导凋亡和促增殖作用,呈现出植物雌激素对MCF-7细胞典型的双向调节作用。     

人乳腺癌MCF-7细胞在放射线处理的SCID小鼠中转移的实验研究

目的建立人乳腺癌MCF-7细胞SCID(Severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠转移动物模型。方法采用人乳腺癌细胞株MCF-7细胞悬液,分别接种于5只经放射线处理的SCID小鼠腋背部皮下。记录肿瘤生长情况,处死荷瘤鼠并做病理切片,观察各脏器转移情况。结果接种SCID小鼠后6～10d成瘤,成瘤率为5/5只,潜伏期平均(7.4±1.3)d。接种后5只鼠分别于第60～68天拉颈处死,检测荷瘤,平均直径为(26.6±2.2)mm,平均重量为5.28g。病理学检查,转移脏器有3个部位,出现肺转移的为4/5只、骨转移的为3/5只和淋巴结转移的为1/5只。结论建立了人乳腺癌SCID小鼠转移动物模型,该模型可为肿瘤转移研究提供重要的实验工具。     

Caveolin-1对乳腺癌细胞系MCF-7增殖和存活的影响

该文研究窖蛋白(Caveolin-1)对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖与存活的影响。运用蛋白质印迹方法(Western blot)检测发现,caveolin-1在5株不同细胞系均只有低表达。运用电穿孔转染方法在乳腺癌细胞系中高表达Caveolin-1,运用Western blot检测转染后Caveolin-1表达情况发现,转染后细胞内Caveolin-1表达上升,并具有生物活性。运用单核细胞直接细胞毒性测定法(MTT)检测发现,转染后乳腺癌细胞系MCF-7增殖速度降低。运用Western blot方法和免疫荧光(immunofluorescence)方法检测转染后细胞凋亡途径的变化,磷酸化的P38蛋白含量上升,Bax表达量明显上升。据此推测Caveolin-1抑制MCF-7细胞的增殖和存活,并诱导基于Bax途径的细胞凋亡。     

MCF-7 Human Breast Cancer Cells Form Differentiated Microtissues in Scaffold-Free Hydrogels

Three-dimensional (3D) cultures are increasing in use because of their ability to represent in vivo human physiology when compared to monolayer two-dimensional (2D) cultures. When grown in 3D using scaffold-free agarose hydrogels, MCF-7 human breast cancer cells self-organize to form directionally-oriented microtissues that contain a luminal space, reminiscent of the in vivo structure of the mammary gland. When compared to MCF-7 cells cultured in 2D monolayer culture, MCF-7 microtissues exhibit increased mRNA expression of luminal epithelial markers keratin 8 and keratin 19 and decreased expression of basal marker keratin 14 and the mesenchymal marker vimentin. These 3D MCF-7 microtissues remain responsive to estrogens, as demonstrated by induction of known estrogen target mRNAs following exposure to 17β-estradiol. Culture of MCF-7 cells in scaffold-free conditions allows for the formation of more differentiated, estrogen-responsive structures that are a more relevant system for evaluation of estrogenic compounds than traditional 2D models.     

长链非编码RNA SNHG3对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移与侵袭的影响 *

目的:探讨长链非编码RNA SNHG3对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移与侵袭的影响。方法:构建SNHG3过表达质粒,实验分别设置阴性对照组(pcDNA-3.1+)与SNHG3基因过表达组(pcDNA-3.1+/SNHG3)。将MCF-7细胞转染对照组质粒和SNHG3过表达质粒,采用实时定量PCR 方法检测 SNHG3 mRNA 转录水平,Western blot 检测MMP9及EMT相关蛋白质水平;集落形成实验检测MCF-7细胞增殖能力;划痕愈合实验检测MCF-7细胞横向迁移能力; Transwell 小室实验检测MCF-7细胞纵向迁移能力及侵袭能力。结果:过表达SNHG3后,MCF-7细胞中SNHG3的mRNA水平显著增高(P<0.001);MCF-7细胞的体外增殖能力明显增加(P<0.01),迁移(P<0.01)与侵袭能力(P<0.001)也显著增强,实时定量PCR, Western blot 结果显示SNHG3可激活EMT相关通路。结论:过表达SNHG3可能通过激活EMT通路促进乳腺癌MCF-7细胞的增殖,迁移与侵袭。     

GALNT14对人乳腺癌MCF-7细胞迁移的影响

构建真核表达载体pcDNA 3.1-Flag-T14,重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,利用脂质体将重组质粒转染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,经G418筛选并建立稳定转染GALNT14细胞株.应用半定量RT-PCR、Western blot检测稳定细胞株GALNT14 mRNA及蛋白表达水平,细胞划痕修复及穿膜试验检测GALNT14基因对MCF-7迁移能力的影响,同时RT-PCR检测GALNT14对MMP-2,MMP-9,TGF-β1及VEGF等肿瘤浸润转移相关因子表达的影响.结果显示成功构建了真核重组表达载体pcDNA 3.1-Flag-T14,经RT-PCR和Western blot检测显示成功获得了稳定表达GALNT14的MCF-7细胞株;GALNT14能够提高MCF-7细胞株的迁移能力,且能增加侵袭转移相关因子MMP-2,MMP-9,TGF-β1及VEGF的表达.结论:GALNT14可明显促进MCF-7细胞的迁移,可能在肿瘤侵袭转移中起重要作用.     

小干扰RNA抑制LRP16基因表达限制了MCF-7乳腺癌细胞增殖

雌激素雌二醇上调人乳腺癌细胞MCF 7中LRP16基因表达 ,该基因过表达促进MCF 7细胞增殖 .为进一步探讨LRP16基因不同表达水平对MCF 7细胞增殖的影响以及对雌激素的反应性增殖能力 ,采用针对LRP16基因特异的小干扰RNA策略 ,通过逆转录病毒介导及抗性筛选构建了LRP16基因被稳定抑制的 2个MCF 7细胞系 ,针对绿色荧光蛋白的干扰序列作为阴性对照 .Northern印迹实验检测了LRP16基因在各个细胞株中mNRA的水平 ,与对照组细胞比较 ,针对LRP16基因不同位置的 2个小干扰RNA可分别将该基因抑制 90 %和 6 0 % .细胞增殖试验结果显示 ,MCF 7细胞中LRP16基因表达抑制率越高 ,细胞增殖速率减慢越显著 (P <0 0 5 ) ;软琼脂集落形成试验结果显示 ,抑制LRP16基因在MCF 7细胞中表达 ,限制了细胞锚定非依赖性生长 ;细胞周期分析结果表明 ,LRP16基因抑表达使MCF 7细胞G1 S周期转换受抑 ;Western印迹结果表明 ,LRP16基因表达抑制的细胞中细胞周期蛋白E及细胞周期蛋白D1蛋白水平显著下调 ,但未检测到P5 3及Rb蛋白表达水平的影响 .雌二醇刺激的增殖实验结果显示 ,抑制LRP16基因表达没有消除MCF 7细胞的反应性增殖特征 .上述结果表明 ,LRP16基因表达量与MCF 7细胞增殖能力密切相关 ,抑制其表达可有效限制MCF 7细胞的增殖能力 ,提     

Cell Death of MCF-7 Human Breast Cancer Cells Induced by EGFR Activation in the Absence of Other Growth Factors

The Epidermal Growth Factor (EGF) Receptor (EGFR) plays an important role in the growth and progression of breast cancer. Overexpression of EGFR or the high activity of EGFR signal pathway has been related with increases in cell proliferation and a poor prognosis in patients with breast cancer. Several human breast cancer cell lines depend on estrogen for their proliferation. EGF may bypass the requirement of estrogen for the proliferation of breast cancer cells. To evaluate this hypothesis, MCF-7 breast cancer cells were stimulated with EGF and the effects on cell proliferation, signal pathways, and cell cycle progression were determined. The results demonstrate that EGF stimulation in the absence of others growth factors induced a modest effect on cell proliferation and the induction of a cellular arrest in the G1 phase of the cell cycle. Although phosphorylation of AKT and ERK proteins were detected, this phosphorylation was insufficient to support of cell cycle progression. Cellular arrest in G1 phase was accompanied by an increase in p21CIP1 protein, down regulation of the BCL-2 protein, induction of caspase-8, and ARHI/NOEY2 an imprinted tumor suppressor gene. These results indicate that EGFR activation by itself is not sufficient for the proliferation of breast cancer cells and suggest the existence of a mechanism that induces apoptosis upon EGFR activation.     

FUT8基因RNAi慢病毒载体的构建及对MCF-7细胞增殖的影响

旨在构建FUT8基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并观察其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。针对FUT8基因设计3组短发夹RNA序列,退火合成双链DNA,通过连接线性化的p GC-LV-GFP载体,构建mi RNA慢病毒载体质粒,并将其转化至感受态细胞DH5α;测序验证正确后进行FUT8基因慢病毒载体的包装及病毒滴度测定,将获得的重组慢病毒p GC-sh FUT8转染MCF-7细胞,利用Real time-PCR、Western blot分别验证转染后MCF-7细胞中FUT8 m RNA及蛋白的表达,MTT法及克隆形成实验检测sh FUT8对MCF-7细胞增殖能力的影响。测序证实成功构建针对FUT8基因的RNAi慢病毒载体;慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒悬液滴度5×108 TU/m L;荧光显微镜下观察各转染组细胞GFP的表达,转染效率达90%以上;Real-time PCR、Western blot结果显示干扰组FUT8的m RNA及蛋白表达水平较对照组显著降低,其中p GC-sh FUT8-2序列对FUT8基因的干扰效率可达80%,干扰效果最佳,FUT8沉默后MCF-7细胞增殖能力下降。