生物素标记核酸探针技术

通过缺口移位反应和多种化学标记方法合成生物素化核酸探针,并配以酶化学检测手段的新技术,可以代替放射性同位素标记探针作各种探测和分析。它具有灵敏,快速和安全、简便、经济的特点。     

核酸荧光探针新进展

核酸荧光探针新进展田少敏阮康成（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词核酸荧光探针核酸荧光探针作为核酸标记的工具,具有方便、快速、灵敏和安全等特点,近年来得到很大发展,不但种类明显增加,性质上也有进一步改善。下面就笔者得到的最新资料,...     

Digoxigenin标记核酸探针分子杂交技术探讨

Dig标记和检测试剂盒中的封阻试剂配制成0.05%、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%六种浓度,65～68℃温度时,溶解时间分别为10、15、20、35、40、45分钟;预杂交,在免疫测定中进行封阻,背景反应最小,其次是不预杂交,在免疫测定中进行封阻,再次是预杂交,在免疫测定中不封阻;标记探针保存在-20℃,至少可稳定18个月,同一探针重复使用三次可获得满意效果.以上结果表明,DigDNA标记和检测系统将代替~(32)p标记及其检测系统.     

生物素标记核酸探针的分子杂交技术及其应用

核酸分子杂交是基于核酸链间互补碱基对的特异性结合,测定核酸碱基顺序同源性的一种现代技术,是基因工程、分子遗传及医学诊断中常用的方法。该法较常规诊断法灵敏度高、特异性强,目前,已广泛应用于重组DNA的筛选、基因分祈、染色体基因定位及病毒病诊断等方面。     

核酸测定中的有机荧光探针

对历来利用荧光分析技术研究和定量测定核酸的情况加以简单的综合评述。介绍了截至目前用于核酸研究和测定的一些主要有机荧光试剂,并对新兴的如有机纳米探针和分子信标等荧光分析技术以及有机荧光试剂的发展前景进行评述。     

酶放大镧系元素发光法测定碱性磷酸酶

报告了应用酶放大镧系元素发光法测定碱性磷酸酶的方法.应用5-氟水杨酸磷酸酯作为酶底物,并对方法学中的多种因素进行了最佳比.用甲基硅油(I)改进了信/噪比的稳定性.方法的灵敏度为4 U/L.精密度为10%.精密度为10%的浓度范围是2.00～3.00×10² U/L.测量值的相对误差＜10%.测定了血清中的碱性磷酸酶浓度,回收率为93%～95%.     

纳米金标记核酸探针检测小反刍兽疫 病毒核酸的研究

试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针,一条探针5’端修饰生物素,另一条探针3’端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到纳米金颗粒上。靶核酸两端分别与两条探针结合,形成"生物素化探针-靶核酸-纳米金探针"复合物,该复合物通过生物素-亲和素系统,固定在固相载体上,最后银染放大信号。通过肉眼观察法、光镜观察法、分光光度法分析银染灰度,从而间接测定靶核酸的量。初步检测PPRV核酸最低浓度达10fmol/L,所需时间约为1.5h。该方法灵敏度高、操作简单,为临床检测小反刍兽疫病毒核酸提供实验数据和技术支持。     

时间分辩荧光分析法在DNA探针检测中的初步应用

应用时间分辨荧光技术进行核酸杂交分析,选用自制螯合剂异硫氰酸苯基ＥＤＴＡ将希有铕离子标中接于链霉亲和素分子中,通过光化学反应制备生物系标记ＰＵＣ１１８ＤＮＡ探针,与固定在聚苯乙烯微滴板中的靶ＤＮＡ杂交后,以铕离子Ｅｕ＾３＋标边霉亲和素为检测物,检测靶ＤＮＡ的含量,可检测到３０ｐｇ的靶ＤＮＡ。     

荧光探针研究新进展

自从Ｓｏｕｔｈｅｒｎ（１９７５）首次进行ＤＮＡ探针杂交后,至今核酸分子杂交已成为分子生物学的最基本方法。Ｍａｔｈｅｗｓ、Ｋｒｉｉｃｋａ总结了各种杂交方法,将其归为两大类;一是异相杂交（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ ａｓｓａｙ）即固相杂交,目的核酸结合于不溶性支持物上;二是同相杂交（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ａｓｓａｙ）即液相杂交,一般届时使用两个探针。为了检测杂交,寡核苷酸探针需要标记,探针的标记物有     

一种切口平移法制备生物素标记核酸探针的简便方法

用切口平移法制备生物素标记的核酸探针,其所用试剂质量稳定、可靠,标记重复性好,且制备的探针易长期保存.我们在制备人IL-6 cDNA等基因探针的实验中,对常规的切口平移法制备生物素标记核酸探针的方法作了简化改进,省略了分离步骤,经斑点杂交试验证明效果良好.     

核酸探针中放射性同位素的快速检测

利用尼龙膜作为介质,以0．4mol／L的NaOH为层析液,进行膜上层析,分离经放射性同位素标记的核酸探针和未掺入的放射性游离单核苷酸,再经放射性强度测定即可计算出标记后的核酸探针的放射性比活。方法简单快捷,产生的放射性废物少,完全可以替代经典的三氯乙酸沉淀法及滤膜吸附法。     

核酸探针的原理及应用

近年来核酸探针作为一种基因诊断技术逐渐被人们接受,综述了核酸探针的设计原理、制作方法及其在生物领域中的应用,为中学生物学教学提供参考。     

应用光敏生物素标记核酸探针鉴定分枝杆菌的研究

用光敏生物素标记非结核分枝杆菌临床分离株及标准分枝杆菌全染色体ＤＮＡ制成探针,与已知标准牛分枝杆菌（ＢＣＧ株）及不同种的非结核分枝杆菌ＤＮＡ杂交,可快速将分支杆菌鉴定到种,同时以大肠埃希氏菌做阴性对照,显示良好的特异性和准确性。此种方法具有鉴定速度快、操作简便、稳定性好及对人体无害等特点,适用于结核杆菌和非结核分枝杆菌的菌种鉴定。