测定Epstein-Barr病毒IgA/EA抗体的改进方法

用免疫酶法(IE)检查鼻咽癌(NPC)病人血清中IgA/EA抗体,阳性率为73％,几何平均滴度为25,将血清用马抗人IgG血清或葡萄球菌菌体A蛋白(SPA)处理后,以除去竞争性IgG类抗体后,阳性率可增高至92％,几何平均滴度提高到89,有15例NPC病人血清,经马抗人IgG血清处理前IgA/EA抗体为阴性,处理后均呈阳性反应。     

用重组Epstein-Barr病毒早期蛋白P83为抗原检测鼻咽癌病人血清中IgA抗体

以重组EB病毒早期蛋白P83为抗原,用Western blot检测了135份鼻咽癌病人和100份正常人血清中IgA/P83抗体,阳性率分别为96％和0,以常规的间接免疫酶法检测这两种血清中IgA/EA抗体,阳性率分别为71％和0。IgA/P83抗体的几何平均滴度较IgA/EA高4倍以上。这表明,用Western blot查IgA/P83敏感、特异,可替代用间接免疫酶法查IgA/EA用于鼻咽癌的早期诊断。     

抗人IgA多克隆抗体ELISA法的建立和应用

用马抗人IgA抗体ELISA法,结合血清预处理,检测鼻咽癌(NPC)患者,其他肿瘤病人和正常人血清中的IgA/EA抗体结果表明,95.1％NPC病人阳性(抗体几何平均滴度为294.1),而健康对照组仅2.4～4.5％,ELISA与免疫酶染色(IE)法测得的血清抗体滴度之间有一定的相关性。但前者比后者测得的几何平均滴度(GMT)高9倍,本法敏感、特异、快速、简便,适用于现场大规模普查。     

应用纯化的重组Epstein-Barr病毒早期抗原建立检测鼻咽癌病人血清IgA/EA抗体的ELISA方法

利用凝胶和离子交换柱(Mono Q)两次层析,将大肠杆菌表达的EB病毒早期抗原P138片段多肽纯化。以此P138为抗原,增加鼠抗人IgA单克隆抗体以扩大IgA的反应,建立了三步ELISA法。用本法检查了100例鼻咽癌病人和63例正常人血清中抗EB病毒IgA/EA抗体,病人血清的阳性检出率为86％,正常人有3例阳性(4.7％)。此结果表明,三步ELISA法较常用的间接ELISA法(阳性检出率为71％)敏感。     

血清中Epstein-Barr病毒膜抗原IgA抗体检测法的改进及应用

用萄葡球菌菌体A蛋白(SPA)预先处理被检血清,以去除抗体IgG部份的竞争性结合,提高了间接免疫荧光法检查鼻咽癌病人血清中EB病毒膜抗原IgA(IgA/MA)抗体的敏感性及特异性,检查48例鼻咽癌病人血清IgA/MA抗体,阳性率为100％,血清几何平均滴度为141;40例其它恶性肿瘤病人和46例正常人都检不出IgA/MA抗体,免疫荧光法测得IgA/MA抗体阴性的6例鼻咽癌病人血清,SPA吸收后呈阳性反应,此改进方法可用以追踪观察鼻咽癌病的病程及预后。     

应用基因重组Epstein-Barr病毒早期抗原P83蛋白检测鼻咽癌患者血清中的IgA/EA抗体

将pUCB质粒表达的P83蛋白应用于免疫印迹法(IB)和ELISA中,检测了85例鼻咽癌(NPC)患者和100例健康人血清,同时与免疫酶法(IE)作比较。结果表明,免疫印迹法对NPC患者血清阳性检出率为94％;ELISA法阳性检出率为88％;而IE法阳性率为64％。三种方法检测健康人血清出现低水平IgA/EA抗体的阳性率分别为4％、3％及2％。用IE法检测IgA/EA抗体为阴性的NPC患者血清,用IB法检测的阳性率达87％,ELISA法阳性检出率为77％。IB法与ELISA法之间具有较好的正相关(r=0.67,P<0.01)。     

检查Epstein-Barr病毒IgA/EA抗体的ELISA法

建立了检查鼻咽癌病人血清中IgA/EA抗体的、改进的ELISA法,用巴豆油,正丁酸钠和阿糖胞苷激活并处理HRIK细胞株,使之表达EA抗原,提取抗原时加蛋白酶抑制剂,以增加产量和稳定性;用鼠抗人IgA单克隆抗体和兔抗鼠IgG抗血清的三层夹心法。提高了敏感性,使阳性检出率达到97％,而免疫酶法的阳性率仅60％,所用抗体工作浓度的几何平均稀释度为免疫酶法的8倍,两法抗体滴度的分布呈平行关系,本法适用于大规模现场普查和鼻咽癌的早期诊断,具有快速、特异和敏感等优点。     

用改进的测定Epstein-Barr病毒早期抗原IgA的方法为2054人检查鼻咽癌

应用测定Epstein-Barr病毒(EB病毒)IgA/EA抗体的改进方法(见病毒学报,2:372,1986).将待检血清用与抗人IgG血清或葡萄球菌菌体蛋白(SPA)吸附,除去了竞争性IgG类抗体,增加了血清中IgA抗体与抗原相结合的机率,从而提高了免疫酶法的敏感性和鼻咽癌的检出率。用此法我们检查了来本实验室检查EB病毒相关抗体的2045人,大部份是进行体格检查、无自觉症状的健康人,其查出IgA/EA抗体阳性者42人,进一步做病理检查证实27人患鼻咽癌,其中属临床Ⅰ期者10人,Ⅱ期10人,Ⅲ期6人,     

Epstein-Barr病毒旱期抗原P138和P54基因的重组与表达

应用基因重组技术,将EB病毒早期抗原(EA)P138两个抗原部位的基因片段和早期抗原P54的完整基因重组,构建成质粒pUC B,转化大肠杆菌JM109获得高效表达。其产物为分子量83kD的P83。经Western blot检验证实,P83能与鼠抗P138和鼠抗P54两种单克隆抗体产生特异性反应。用P83检测30份鼻咽癌病人血清IgA类抗体100％阳性,30份正常人血清全部阴性。     

鼻咽癌患者血清中抗Epstein-Barr病毒早期和晚期膜抗原抗体的检测

对Epstein-Barr(EB)病毒抗原的研究,发现有淋巴细胞确定的膜抗原(Lydma)、早期抗原(EA)、壳抗原(VCA)、核抗原(EBNA)、早期膜抗原(EMA)和晚期膜抗原(LMA)。除了Lydma抗原外,鼻咽癌患者对上述抗原均产生相应的IgG和IgA抗体。因而研究这些抗体,对阐明EB病毒与鼻咽癌的关系及鼻咽癌的早期诊断都十分有价值。     

应用抗体捕捉ELISA法测定病毒特异性IgM抗体

本文以测定麻疹IgM抗体为模型,研究了应用抗体捕捉酶联免疫吸附法(Antibody capture ELISA简称ACELISA)测定病毒性疾病特异性IgM抗体的实验条件,结果表明;用于包被的抗μ链抗体、抗原,检测抗体的剂量对所测得的标本OD值都有不同程度的影响,其中以抗原的影响最大,不同株单克隆抗体(McAb)作检测抗体效果也有差别,最佳株与多克隆抗体(PcAb)相似,以本方法测定麻疹IgM抗体的敏感性和特异性很高,并不受类风湿因子的干扰。     

用间接免疫荧光法检测流行性出血热病人尿中特异性抗体的研究

用间接免疫荧光法检测110例不同病程、病期及病型的流行性出血热病人尿中及血清中特异性抗体。尿中IgM型抗体阳性率为62.7％。尿中IgG型抗体阳性率91.8％与血清IgG型者90.9％相似,而总阳性率(IgG或IgM有一项以上阳性者的总检出率)99.1％则高于血清IgG者。20例其它疾病及10例正常人尿抗体均为阴性。结果表明尿抗体检查法是特异且可靠的,它比血清学方法简便、灵敏、为临床诊断可早期快速得出结果,不用采血有利于病人。IgM型抗体阳性率受病程、病期、病型及尿蛋白量的影响较明显。     

ANTIBODY SELECTION AND AMINO ACID REVERSIONS

Pathogens adapt to antibody surveillance through amino acid replacements in targeted protein regions, or epitopes, that interfere with antibody binding. However, such escape mutations may exact a fitness cost due to impaired protein function. Here, it is hypothesized that the recurring generation of specific neutralizing antibodies to an epitope region as it evolves in response to antibody selection will cause amino acid reversions by releasing early escape mutations from immune selection. The plausibility of this hypothesis was tested with stochastic simulation of adaptation at the molecular sequence level in finite populations. Under the conditions of strong selection and weak mutation, the rates of allele fixation and amino acid reversion increased with population size and selection coefficients. These rates decreased with population size, however, if mutation became strong, because clonal interference reduced the rate of adaptation. The model successfully predicts the rate of reversion per allele fixation for an important human immunodeficiency virus type 1 (HIV‐1) antibody epitope region. Therefore, antibody selection may generate complex adaptive dynamics.     

一种可识别神经元特异微管蛋白的抗体

通过人工合成大鼠巢蛋白Ｃ－末端的一段２０肽,制备得到了抗巢蛋白的抗体－Ａｎｔｉ－Ｎｅｓ－２。我们发现该抗体除了能识别小鼠２４０ｋＤ的巢蛋白条带外,还特异性识别另一分子量约为５０ｋＤ的蛋白条带,蛋白印迹反应提示,该５０ｋＤ蛋白可能与神经细胞的增殖和分化相关。经分离纯化和Ｎ－端氨基酸序隐测定证实：该５０ｋＤ蛋白为微管蛋白。     

免疫后TCRVβ基因多态性与抗体产生的研究

研究了T细胞受体(TCR)Vβ在免疫后产生抗体个体和未产生抗体个体中的表达.运用RT-PCR及Southern blot杂交技术,对12例乙肝疫苗免疫前后健康成年人TCR Vβ1-20基因亚家族的表达水平进行半定量研究.并运用ELISA测定了血清HBsAb阳转率.试图寻找其对Ab产生的影响.提示免疫后诱导产生了HBsAg特异的T细胞应答,分析免疫后Ab(+)个体和Ab(-)个体的TCRVβ基因亚家族的表达水平,但从目前结果统计分析还未找到其内在关系,可在未来的研究中寻找真正的生物限制因素.     

一种新的抗人角蛋白单克隆抗体

本文报道了一种新的抗人角蛋白单克隆抗体。用于免疫的抗原来自人足胼胝,传统的观念认为,此部位的角蛋白属于“软”角蛋白。然而我们在免疫荧光定位时发现,此单抗不能与一般上皮、表皮和培养表皮细胞的“软”角蛋白相反应,却能与哺乳动物的多种组织的“硬”角蛋白相反应。