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一种简单、快速提取DNA的方法 总被引:5,自引:0,他引:5
随着分子生物学研究的迅速发展,提取DNA已成为一项常规实验。用经典方法提取DNA[1],先用蛋白酶K、SDS消化,然后用酚、氯仿抽提,乙醇沉淀,耗时较多,提取液需要多次转移,易引起交叉污染和DNA丢失。本文利用硅藻(diatom)能够特异性吸附核酸的... 相似文献
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限制性内切酶SCaI适用于多种质粒载体,尤其是融合蛋白表达载体,pGEX系统,因它具有二个SCaI酶切位点,因此用SCaI酶解图谱鉴定以pGEX系统为载体的重组子甚为便捷。简便碱裂解法提取重组DNA省时,省耗。本文探讨了SCaI对用常规和简便两种碱裂解法提取的重组DNA的酶解效率。结果表明:(1)简便碱裂解法抽提的重组DNA,用EcoRI、EcoRV、PstI、BamHI等限制性内切酶酶解,可以获 相似文献
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双裂解法提取血清HBV DNA技术的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
为进行PCR实验建立了一种两步裂解血清HBV提取其DNA的方法。该法首先用SDS及蛋白酶消化裂解病毒,随后再进行碱裂解,操作较酚提取法大为简化,而PCR实验进行的两法的灵敏性比较,说明双裂解法至少不低于酚法。 相似文献
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从河南省西峡晚白垩世的一枚奇特恐龙蛋化石提取DNA,经过^32P同位素标记和电泳分析,发现蛋腔内絮状物样品中有DNA片断存在,其分子量在几十至1000bp之间,且大多在400bp以下,用18SrDNA特异引物和恐龙蛋DNA片断为模板,进行PCR扩增。克隆PCR产物并进行序列分析和同源性比较,发现该序列与鸟类、两栖类、爬行类及人类等18SrDNA有75% ̄81%的同源性,与已知原核生物没有明显同源性 相似文献
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在以前工作中我们从人精子中分离纯化出一种与生育有关的糖蛋白,命名为BS-17。本文用其多克隆抗血清从人睾λgt11cDNA表达库中克隆了编码BS-17的cDNA片段。序列分析表明BS-17cDNA片段长791bp,开放阅读框架558bp,可编编码186个氨基酸。经数据库检索,该cDNA片段与人Calpastatin蛋白质羧基末端同源性为99.5%。用cRNA进行组织原位杂交结果表明,BS-17基因 相似文献
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常用实验用近交系小鼠粒体DNA遗传变异的分析 总被引:5,自引:0,他引:5
应用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术,研究了分析了国内常用的实验用近交系小鼠线粒体DNA(mtDNA)的品种间遗传变异。PCR-RFLP分析发现,小鼠mtDNA的D-loop、tRNA^Met Glu Ile及ND3基因核酸序列,在46个限制性内切酶酶切位点上均无差异;用PCR-SSCP分析方法对这些小鼠mtDNA的高变异区D-Loop的5′及3′端作进一步分析,亦未发现品种间遗传变异。结合mtDNA具有的母系遗传方式的特点,这一结果提示:常用的实验用近交系小鼠形成中可能只有1种雌性血统起了作用。 相似文献
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利用酸性异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法从人胚胎组织中提取总RNA,经Oligo(dT)纤维柱分离纯化出mRNA。用逆转录与聚合酶链反应相结合的RT-PCR法,扩增出人类胰岛素生长因子Ⅱ的cDNA片段,在限制性内切酶SmaI存在的连接体系中,将扩增出的cDNA片段克隆进PUC12的SmaI位点处。经限制性内切酶EcoRI,SalI,Eco47Ⅲ酶切鉴定其方向。以重组质粒的双链DNA为模板,用末端终止法测 相似文献
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在以前工作中我们从人精子中分离纯化出一种与生育有关的糖蛋白,命名为BS-17。本文用其多克隆抗血清从人睾丸λgt11cDNA表达库中克隆了编码BS-17的cDNA片段。序列分析表明BS-17cDNA片段长791bp,开放阅读框架558bp,可编码186个氨基酸。经数据库检索,该cDNA片段与人Calpastatin(Ca ̄(2+)依赖的半胱氨酸蛋白酶calpain抑制剂)基因3’端顺序具有99.7%的同源,与Calpastatin蛋白质羧基末端同源性为99.5%。用cRNA进行组织原位杂交结果表明,BS-17基因表达于人精子减数分裂后期单倍精细胞阶段。 相似文献
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抑瘤素M cDNA的克隆及表达研究 总被引:1,自引:0,他引:1
抑瘤素M是一种我功能的细胞生长调节因子,从PMA刺激后的U937细胞系提取总RNA,采用逆转录-PCR方法分离到了抑瘤素M的CDNA;将抑瘤素M的CDNA克隆到质粒PUC19中,筛选三个阳性克隆进行序列分析,与国外报导序列完全一致;将抑瘤素M的CDNA克隆到质粒PBV220后再转化DH5α进行模拟表达,SDS-PAGE分析表明有OSM表达,表达量约占细菌总蛋白5%,经过初步纯化的OSM能明显抑制A 相似文献
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从簇毛麦叶片中提取总RNA,进一步分离mRNA。以mRNA为模板反转录合成cDNA,两端经T4DNA多聚酶修平后加EcoR1接头分子,连接于质粒pGEM-7Zf(+)的EcoR1克隆位点,转化大肠杆菌JM103菌株建立了cDNA文库。用PCR扩增重组质粒的cDNA插入序列,用^32P标记后分别与HindⅢ或XbaⅠ酶切的小麦-黑麦附加系DNA进行Southern杂交。根据其杂交结果,目前已鉴定出4 相似文献
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大鼠卵巢促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体cDNA的克隆和在… 总被引:2,自引:0,他引:2
促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCF receptor)是一种与蛋白偶联的糖蛋白。本文报道了从大鼠卵巢cDNA库中筛选LH/hCG受体cDNA及其在昆虫细胞中的高效表达。LH/hCG受体cDNA全长2403bp,编码受体信号肽和成熟受体674个氨基酸。用多角体病毒表达载体pVL1393,LH/hCG受体cDNA在昆虫细胞中得到高效表达。在非还原和还原条件下的SDS-PAGE分析显示,用 相似文献
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大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因的cDNA克隆及序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
用RT-PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑神经元特异性烯醇化酶的cDNA,将此包括编码全长NSE433个氨基酸的DNA片段重组入pUC质粒,并用PCR方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Wistar大鼠与Forss-Petter报导的SD大鼠NSE基因顺序,有两处单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变,同时还对RNA的提取及长片段DNA的RT-PCR扩增进行了方法学的探讨。 相似文献
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用RT-PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑神经元特异性烯醇化酶(NSE)的cDNA,将此包括编码全长NSE433个氨基醚的DNA片段重组入pUC质粒,并用PCR方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Wistar大鼠与Forss-Petter报导的SD大鼠NSE基因顺序,有两外单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变。同时还对RNA的提取及长片段DNA的RT-PCR扩增进行了方法学的探讨。 相似文献
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RAPD分析用的犁DNA提取方法 总被引:31,自引:2,他引:31
RAPD分析用的梨DNA提取方法胡春根郝玉邓秀新史永忠(华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室,武汉430070)DNAExtractionMethodforRAPDAnalysisinPearsHUChungenHAOYuDENGXiuxinSHI... 相似文献
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免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲胎蛋白的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
免疫PCR是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ELISA法,若与抗体连接的酶用DNA片段代替,则该DNA片段可用于PCR扩增。以链酶亲合素搭桥将生物素标记的抗体与DNA相连建立了免疫PCR技术,并将其用于检测甲胎蛋白(AFP),其敏感性比ELISA法高104。因此,免疫PCR有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断 相似文献
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制备基因组DNAPCR模板一般都比较费工费时 ,研究人员尝试用微波炉提取真核生物基因组DNA ,然后做PCR扩增取得了较好的效果[1 ,2 ] 。本文描述了一个利用微波炉快速制备酵母质粒和基因组DNAPCR模板的程序 ,具有良好的重复性。1 材料与方法1.1 材料酿酒酵母菌种 1c163 6darg11,ura 3为比利时OrianeSoetens馈赠。酵母载体pYX13 3从美国康乃尔大学曹维国处获得 ,并由此构建了粗糙脉孢霉arg 13cDNA的酵母表达载体pYXA5。培养基为SD或YPD固体培养基。1.2 酵母质粒提取[3]取 1.5ml… 相似文献
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人巨细胞病毒的分子克隆及其特异性DNA探针的制备 总被引:6,自引:0,他引:6
从人巨细胞病毒(HCMV)培养物中提取HCMV并抽提其DNA,经限制性内切酶BamHI完全消化后,与质粒pBluescript-SK重组建立了HCMV的DNA文库,从此文库。中随机筛选出两个重组质粒(pCMV-1和pCMV-2),用BamHI分析证明其中所含的病毒DNA片段的大小分别为1.0kb和7.5kb,将这两种质粒大量扩增纯化后,用光生物素进行标记作为探针,证明其只与HCMV反应,与正常人细胞DNA及Ⅰ型和Ⅱ型单纯疤疹病毒DNA无交叉反应。 相似文献