虫草多型现象的5.8S rDNA和ITS2序列测定研究

新定名的甘肃虫草Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｇａｎｓｕｅｎｓｉ与冬虫草Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉ形态相似。蛹虫草Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ具有拟青霉型（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ－ｔｙｐｅ）和轮枝孢型（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ－ｔｙｐｅ）两类无性型。此研究对５．８Ｓ ｒＲＮＡ基因及ＩＴＳ２间区ＤＮＡ序列的分析结果表明,甘肃虫草和冬虫夏草的ＤＮＡ序列相同,属于同一种;蛹虫草的两类无性型具有     

虫草多型现象的5.8SrDNA和ITS2序列测定研究

新定名的甘肃虫草Cordyceps gansuensi与冬虫夏草Cordyceps sinensi形态相似。 蛹虫草Cordyceps militaris具有拟青霉型（Paecilomyces-type）和轮枝孢型（Verticillium-type）两类无性型。此研究对5.8S rRNA基因 及ITS2间区DNA序列的分析结果表明,甘肃虫草和冬虫夏草的DNA序列相同,属于同一种;蛹虫草的两类无性型具有分子水平上的遗传趋异性。     

蛹虫草（Cordceps militaris）无性型的多型现象

在萨氏琼脂和ＰＤＡ上,蛹虫草Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔｅｒｉｓ（Ｖｕｉｌｌ）．Ｆｒ无性型,蛹草拟青霉Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ（Ｋｏｂ）．Ｂｒ＆Ｓｍ．的一些单孢子株可自发产生突变,基于多型现象及其它形态特征可分为三种类型：（１）具野生型菌株特征,产孢结构拟青霉型（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ－ｔｙｐｅ）,稳定,菌落通常不自发产生角变,大多数单孢了株属此类群。（２）属此类群的单孢子     

虫草属分子系统学研究现状

近年来的分子系统学研究结果表明 ,麦角菌目 (Clavicipitales)与肉座菌目 (Hypocreales)以及虫草属[Cordyceps(Fr.)Link]与麦角菌科 (Clavicipitaceae)内的有关种属关系密切 ,但虫草属为一多系群 ,其中只有新虫草亚属的种类形成单系群。虫草属种类的进化与寄主有一定的关系 ,有关研究显示它们在亲缘关系相差很大的寄主之间多次转移。多个独立的ITS序列研究表明 ,阔孢虫草 (CordycepscrassisporaM .Zangetal.)、甘肃虫草(CordycepsgansuensisK .Y .Zhangetal.)、多轴虫草 (CordycepsmultiaxialisM .Zang&Kinjo)、尼泊尔虫草 (CordycepsnepalensisM .Zang&Kinjo)与冬虫夏草 [Cordycepssinensis(Berk.)Sacc.]为同一物种 ;RAPD和ITS序列分析还显示不同地理分布的冬虫夏草存在明显的遗传分化。分子生物学方法在确定有性型与无性型的关系上已经为多种虫草菌提供了有力的证据。本文主要对虫草属分子系统学研究现状进行了综述 ,同时就分子生物学研究中的取样问题、一些分子方法的适用范围以及有性型与无性型的关系等问题进行了讨论。     

蛹虫草(Cordycepsmilitaris)无性型的多型现象

在萨氏琼脂和PDA上,蛹虫草Cordycepsmilitaris（Vuill）Fr.无性型,蛹草拟青霉Paecilomycesmilitaris(Kob）Br.＆Sm．的一些单孢子株可自发产生突变,基于多型现象及其它形态特征可分三种类型：（1）具野生型菌株特征;产孢结构拟青霉型（Paecilomyces－type）,稳定,菌落通常不自发产生角变,大多数单孢子株属此类群。（2）属此类群的单孢子株,在PDA上可形成亮褐色至橙黄色的角变,它们典型的产孢结构为瓶梗轮生,分生孢子常聚集成头状的轮枝孢型（Verticillium－type）。在查氏培养基上则相反,拟青霉型的产孢结构占优势。单孢子株Cm-71是这一类群的代表。（3）单孢子株Cm－42是在所观察单孢子株中形态特征独特的菌株。在PDA上菌丝生长纤细,蛛网状,产孢结构轮枝孢型。蛹草拟青霉对氯酸钾（KClO3）不敏感,在浓度为6％（W／V）的KMM培养基上,23～24℃14天菌落的直径仅1～2cm,无气生菌丝生长。各单孢子株形成的不利用硝酸盐突变株（nit突变株）的途径和形态特征,也可分成类似于粉被虫草CordycepspruinosaPeteh不利用硝酸盐突变株（nit突变株）的三种类型。     

冬虫夏草和蛹虫草发酵液抗菌活性研究

研究了冬虫夏草和蛹虫草发酵液的抑菌特性,结果表明:两种虫草的发酵液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌均有较好的抑制作用,且对前两者的抗菌作用强于后两者;热稳定性试验表明发酵液中的抑菌物质具有较强的热稳定性;虫草发酵液与25%糖液和10%盐液协同作用可以增加对参试细菌的抑菌作用;对比试验得出蛹虫草发酵液的抑菌活性较冬虫夏草发酵液的抑菌活性强.     

蛹虫草(Cordyceps militaris)无性型的多型现象*

在萨氏琼脂和PDA上,蛹虫草Cordycepsmilitaris（Vuill）Fr.无性型,蛹草拟青霉Paecilomycesmilitaris(Kob）Br.＆Sm．的一些单孢子株可自发产生突变,基于多型现象及其它形态特征可分三种类型：（1）具野生型菌株特征;产孢结构拟青霉型（Paecilomyces－type）,稳定,菌落通常不自发产生角变,大多数单孢子株属此类群。（2）属此类群的单孢子株,在PDA上可形成亮褐色至橙黄色的角变,它们典型的产孢结构为瓶梗轮生,分生孢子常聚集成头状的轮枝孢型（Verticillium－type）。在查氏培养基上则相反,拟青霉型的产孢结构占优势。单孢子株Cm-71是这一类群的代表。（3）单孢子株Cm－42是在所观察单孢子株中形态特征独特的菌株。在PDA上菌丝生长纤细,蛛网状,产孢结构轮枝孢型。蛹草拟青霉对氯酸钾（KClO3）不敏感,在浓度为6％（W／V）的KMM培养基上,23～24℃14天菌落的直径仅1～2cm,无气生菌丝生长。各单孢子株形成的不利用硝酸盐突变株（nit突变株）的途径和形态特征,也可分成类似于粉被虫草CordycepspruinosaPeteh不利用硝酸盐突变株（nit突变株）的三种类型。     

互补交配型配对诱导蛹虫草有性子实体形成

前期我们获得了优良性状蛹虫草Cordyceps militaris野生菌株W141436,其子实体虫草素含量高达3.72 mg/kg干重,子实体多糖高达6.7 g/100 g干重,但在大规模应用中发现它发生退化。针对蛹虫草人工栽培退化问题,我们提出蛹虫草子实体形成是有性生殖过程,其两种交配型发生交配是蛹虫草子实体形成的必要条件。本文基于交配型基因分子标记研究了优良性状蛹虫草野生菌株W141436的退化机制。具体地,采用单孢子分离的方法对蛹虫草野生分离株W141436的子囊孢子进行分离,得到了72个单孢菌株。进一步采用PCR方法对单孢菌株及亲本菌株进行了交配型基因类型鉴定。在72个单孢菌株中,28株为Mat1-1类型交配基因型,31株为Mat1-2类型交配基因型,13株含有与亲本相同的交配型基因。根据鉴定结果,对2株Mat1-1型(SP28、SP33)和2株Mat1-2型(SP15、SP32)菌株进行了栽培实验。结果表明,形成子实体的栽培用亲本菌株同时含有Mat1-1和Mat1-2两种交配类型基因,即只有含不同交配型基因的菌株具有发育为子实体的能力,而含同种交配型基因的菌株则不能发育为子实体。本研究为防止蛹虫草在大规模种植中退化提供了理论依据。     

冬虫夏草菌和蛹虫草菌的研究现状、问题及展望

冬虫夏草菌和蛹虫草菌是两种最著名的虫草菌。从分类学地位、分布、生活史及有性生殖类型、寄主范围、遗传多样性、分子遗传学和基因组学、生态学、人工栽培及产品开发等方面对冬虫夏草菌和蛹虫草菌的研究现状进行总结,指出了研究中存在的一些问题,并对研究前景进行展望。     

蛹虫草胞外多糖的研究I．半乳甘露聚糖(CM-I)的纯化和结构研究

从蛹虫草菌体培养液中提取水溶性粗多糖经分离纯化,得一种含有少量蛋白的半乳甘露聚糖CM-I,分子量2．7×10’,[a]19d=十54．7°。糖组成摩尔比,半乳糖： 甘露糖=6：5。经高碘酸氧化,Smith降解,部分酸水解,半乳糖苷酶解,1H-NMR分析,完全甲基化与GC及GC-MS分析,证明：多糖CM-I具有高度分枝结构,其以β-(1→2)连接的甘露糖为主干,枝链由较大量的β-(1→6)半乳糖和较大最的β-(1→2)呋喃半乳糖构成,分别连接在主干的0-4和0一6上。     

中国拟青霉新种及其与虫草的关系

从虫草[Cordyceps sinenisis(Berk.),Sacc.]上分离到中国拟青霉新种(Paecilomyces isnenisisp.nov.),对它进行了培养和形态学研究。中国拟青霉与蛹草[cordyceps militaris(L·)Liak]的无性阶段形态非常类似,但在分生孢子形态,分生孢子和瓶梗的量度上有所不同,且两者的寄主及生境不同,故定为新种。不仅可从长子座的殭虫获得其纯培养物,也可从不长子座而长孢梗束的虫草纯化培养获得。纯培养物的形态和天然虫体的孢梗束完全相同,故认为它可能是虫草的无性阶段。     

冬虫夏草子囊孢子的发育

经光学显微镜观察,冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.]子囊孢子的发育可分为三个阶段:(1)原子囊孢子期:孢子近球形,椭圆形,卵圆形或长圆形,4.8—10×3.6—6μm。(2)孢子伸长期:从孢子一端突出,伸长生长,出现分隔,隔细胞较长,30—37.5μm。(3)子囊孢子形成期:孢子继续伸长并不断出现分隔,隔间长6—12μm。一般仅有两个孢子成熟,其余多数原子囊孢子败育,不萌发或形成极纤细的丝状物。基于子囊孢子发育的过程,讨论了冬虫夏草及其近缘种的分类地位。     

几种虫草属真菌的学名订正

本文合格发表虫草属两个变型的名称,即Cordyceps militaris f.albina(蛹虫草白化变型)和C.ophioglossoides f.alba(大团囊虫草白化变型),并提出新名称C.shimizui(清水虫草)以代替非法的晚出同名C.chichibuensis Kobayasi & Shimizu,同时也证实C.shanxiensis(山西虫草)的合格发表地位。Cordyceps purpureostramata f.recurvata是一个不合格名称,其模式标定可以从原白中提供的照片得到线索。虫草属下分类单元作者的准确引证和一些种或种下分类单元拉丁名加词的正确拼法也在此作了讨论。     

峨眉山自然保护区的虫草及其它昆虫病原真菌Ⅰ.

采自四川省峨眉山自然保护区的虫草及其相关昆虫病原真菌,其中除有常见的蛹虫草Cordycepsmilitaris（Vuill．）Fr,粉被虫草（CordycepspruinosaPetch）,蝉拟青霉Paecilomycescicadae（Miquel）Samson,球孢白僵菌Beauveriabassiana（Bals．）Vuill等昆虫病原真菌外,将主要描述峨眉虫草新种（CordycepsemeiensisA.Y.LiuetLiangsp.nov.）,龙洞虫草新种（CordycepslongdongensisA.Y.LiuetLiangspnov．）,暗绿虫草新记录种（CordycepsatrovirensKob．etShim．）和蛹虫草球头变种新记录种Cordycepsmilitarisvar.sphaerocephala（Schw）Fr．等几种虫草菌。     

蛹虫草菌产生的胞外多糖及其理化性能和抗氧化活性的初步研究

蛹虫草菌Cordycepsmilitaris在液体发酵条件下可产生胞外多糖,其粗多糖的蛋白含量在14．31％左右,氨基酸含量为13．8％,共有17种氨基酸,水分5％左右,多糖含量大约占80％。蛹虫草菌胞外多糖具有良好的增稠性、触变性、抗盐耐热和对广泛pH的稳定性能。蠕虫草菌丝体及其胞外多糖具有一定的抗氧化活性,在60℃的促进氧化条件下放置7天,0．05％含量的菌丝体及其胞外多糖降低油脂氧化率分别达到18．8％和19．8％。     

PHYLOGENETIC ANALYSIS OF THE LICHEN FAMILY UMBILICARIACEAE BASED ON NUCLEAR ITS1 AND ITS2 rDNA SEQUENCES

Abstract: The lichen family Umbilicariaceae is accepted by most lichenologists as consisting of two genera, Lasallia and Umbilicaria. The monophyly of these two genera was examined by phylogenetic analyses of nucleotide sequences of ITS1 and ITS2 rDNA. Sequences of these regions from three Lasallia and 17Umbilicaria species were aligned to those of seven representatives of the outgroup taxa including Eurotiales, Onygenales and Caliciales (Mycocaliciaceae) and subjected to maximum parsimony, maximum likelihood and neighbour-joining analyses. The resulting phylogenetic hypotheses supported the monophyly of the representative species of Lasallia. However, the species of Umbilicaria did not form a monophyletic sister-group to Lasallia due to the basal placement of otherUmbilicaria species in some analyses. Based on these analyses, if Lasallia is recognized as a separate genus thenUmbilicaria appears to be paraphyletic. Although further taxon sampling is required to resolve the monophyly ofUmbilicaria , for the present we recommend retaining the current treatment of Lasallia as separate fromUmbilicaria .     

应用5.8S rDNA及ITS区序列分析链格孢种级分类*

对9个链格孢小孢子种和3个大孢子种共20个链格孢菌株的5.8S rDNA及其两侧的ITS1区和ITS2区进行了序列分析。聚类分析结果表明形态差异大的种可以明确加以区分,而供试的9个小孢子种之间差异很小,不能根据对所选区段的序列分析加以区分。传统分类上的滨菊链格孢不属于Alternaria, 其分类地位需进一步研究。     

应用5.8S rDNA及ITS区序列分析链格孢种级分类

对9个链格孢小孢子种和3个大孢子种共20个链格孢菌株的5.8S rDNA及其两侧的ITS1区和ITS2区进行了序列分析。聚类分析结果表明形态差异大的种可以明确加以区分,而供试的9个小孢子种之间差异很小,不能根据对所选区段的序列分析加以区分。传统分类上的滨菊链格孢不属于Alternaria, 其分类地位需进一步研究。     

介形纲丽足目和速足目及相关类群18S rDNA分子系统发育的研究

文中分析现生介形类 (Ostracoda) 4目 2 1科 2 9属的 18SrDNA部分序列 ,采用最大似然法 (ML)、邻接法 (NJ)和最大简约法 (MP) ,尝试构建介形类的分子系统树 ;结合介形类的形态特征和化石记录 ,主要对速足目(Podocopida)、丽足目 (Myodocopida)及其超科级分类阶元的系统发生关系进行探讨。 3种分析方法均支持形态学上Podocopida ,Myodocopida和海萤超科 (Cypridinacea)的界定 ;但对Podocopida目土菱介超科 (Bairdiacea)的系统地位提出质疑 ,该类群可能不是单系发生的自然类群。上述分析显示 ,Podocopida,Myodocopida,Platycopida和Halo cypridina组成一个单系群 ;介形类在目、超科、科和属的水平上可能发生过多次辐射分化