浅谈植物细胞融合的方法

细胞融合是指通过组织培养的方法,在机体外将两个不同种、不同属、不同科,甚至不同界的生物体细胞混合培养在一起,使这两个细胞发生融合,形成具有两个亲本体细胞染色体的杂种细胞。杂种细胞经过再培养诱导成为杂种生物。所以,细胞融合即是体细胞的杂交。是一种无性杂交。细胞融合包括动物体细胞杂交、植物体细胞杂交、动物和植物间体细胞杂交等方面。因此,细胞融合是细胞水平的遗传工程,属于细胞工程。     

植物胞质杂交

体细胞杂交是植物杂交的重要途径。与有性杂交相比,它可以同时将双亲细胞核基因组和细胞质基因组结合在一起,形成体细胞杂种细胞。在其继代过程中,易产生遗传物质的部分丢失,从而形成不对称体细胞杂种。胞质杂种则属不对称体细胞杂种,因其会有一万余本的细胞核和双方亲本的细胞质。随着体细胞杂交技术的发展,现已能走向诱导一方亲本细胞核的丢失,通过原生质体融合的途径实现双亲细胞质的结合;获得胞质杂种。利用这种胞质杂交技术,并成功地转移了胞质基因控制的有关性状,在植物育种中发挥了一定作用。王植物胞质杂交技术的建立胞质…     

植物体细胞杂交及其杂种鉴定方法研究进展

植物体细胞杂交使远缘杂交不亲和的植物有可能实现遗传物质重组,创造和培养植物新品种乃至新物种,尤其在多基因控制农艺性状的改良上具有较大优势.随着原生质体融合技术和现代分子生物学的发展,体细胞融合再生植株的植物种属范围不断扩大,杂种鉴定的方法和手段也有了很大提高.本文就近年来植物体细胞杂交的技术手段、筛选体系和杂种检测方法进行了综述,并展望了其应用和发展前景.     

植物细胞杂交研究的现状

自两种比较有效的融合方法(高pH高Ca法和聚二乙醇法)确立以来,植物细胞杂交的研究进展迅速。至今巳有九个国家和地区的实验室得到了20多个细胞杂种植株。近年来植物细胞杂交的研究工作主要集中在异核体     

烟草种间体细胞杂种及其后代的研究

通过原生质体融合方法,获得了普通烟草与黄花烟草的种间体细胞杂种植株。对体细胞杂种及其后代进行了形态学、细胞学及酶学研究。它们有许多显著不同于两个亲本的性状。例如花的颜色,叶、花及蒴果的形状,气孔的大小,染色体的数目,同功酶谱及花粉育性。实验证明,通过体细胞杂交,可以克服某些种间杂交的困难,可以作为育种工作的有效途径之一。     

烟草试管

几德明等闭曾用嫁接方法获得茄子品种间 无忆绮扮种,Car'.son[61首次用原生质体融合方法 获得粉蓝烟草与郎氏烟草种间体细胞杂种。我 们试rw一种简易获得体细胞杂种（即无性杂种） 方法,即将不同品种烟草茎段进行无菌操作嫁 接,然后取嫁接愈合具有两种组织的茎段离体 培养再生植株,从中获得了具有两亲本特性的 无忆杂种再生植株。我们暂称此方法为“植物 试管无性杂交”。     

植物细胞杂交研究近况

从首次得到植物细胞杂种至今已有15年;本文简要综述这方面近年来的研究进展和问题。这几年植物细胞杂交有如下一些趋势: 1.通过原生质体融合得到的细胞杂种例证仍然在增加,但新组合的增加速度减慢。1983年已有70多个组合再生杂种植株,到1986年仅增至80多     

植物体细胞杂种及其选择

没有细胞壁的球形原生质体给体细胞杂交提供了有利体系,为克服远缘植物间有性过程中(包括授粉、授精)的不亲和性开辟了途径。同时也为携带外源遗传信息的大分子渗入列细胞创造了机会。从而打破了只依靠有性重组的界线,扩大了遗传重组的范围。近十年来已建立了体细胞杂交的一系列程序和方法,获得了许多体细胞杂种和胞质杂种。     

小麦体细胞杂交研究进展

小麦细胞融合的研究开展较晚,但近年来,由于小麦原生质体培养及植株再生技术的突破,已成功获得小麦与４种近缘间禾草不对称体细胞杂种再生植株及多个物种的杂种细胞系。     

花椰菜与黑芥种间体细胞杂种的获得和鉴定

利用非对称体细胞杂交技术,获得芸薹属花椰菜（Brassica oleracea var．botrytis）与黑芥（B．nigra）的种间杂种,实现了野生种质抗病基因向甘蓝类蔬菜作物的渗透。以具有良好再生能力的花椰菜下胚轴原生质体作为融合受体,具有抗黑腐、黑胫和根肿病优良性状的黑芥叶肉原生质体作为融合供体,用不同强度的UV射线处理后,利用PEG方法诱导供、受体原生质体融合。培养后获得170棵再生植株。选取来自40个不同愈伤组织的40棵单株进行形态学观察及RAPD和SRAP分子标记检测,结果表明其中30棵为体细胞杂种。染色体计数显示,约23％杂种植株的染色体数目小于供、受体染色体数之和。用流式细胞仪测定DNA含量显示,杂种植株DNA含量是受体的2—4倍,20％杂种植株DNA含量小于供、受体之和。     

花椰菜与黑芥种间体细胞杂种的获得和鉴定

利用非对称体细胞杂交技术, 获得芸薹属花椰菜(Brassica oleracea var. botrytis)与黑芥(B. nigra)的种间杂种, 实现了野生种质抗病基因向甘蓝类蔬菜作物的渗透。以具有良好再生能力的花椰菜下胚轴原生质体作为融合受体, 具有抗黑腐、黑胫和根肿病优良性状的黑芥叶肉原生质体作为融合供体, 用不同强度的UV射线处理后, 利用PEG方法诱导供、受体原生质体融合。培养后获得170棵再生植株, 选取来自40个不同愈伤组织的40棵单株进行形态学观察及RAPD和SRAP分子标记检测, 结果表明其中30棵为体细胞杂种。染色体计数显示, 约23%杂种植株的染色体数目小于供、受体染色体数之和。用流式细胞仪测定DNA含量显示, 杂种植株DNA含量是受体的2-4倍, 20%杂种植株DNA含量小于供、受体之和。     

柑桔种间原生质体融合植株再生及染色体数目变异的研究

为了获得具有抗病、优质丰产等优良性状的柑桔体细胞杂种,本研究应用当前推广良种朋娜脐橙胚性细胞原生质体和抗裂皮病、耐盐碱的红桔叶肉细胞原生质体作为亲本进行体细胞杂交研究。通过对原生质体分离,融合和培养过程中培养基调控等环节的研究,建立起原生质体融合及其后的胚状体再生系统,并从融合处理后的原生质体培养中获得了大最的胚状体,进而获得个别体细胞杂种植株。同时对融合后再生的胚状体染色体数目和同工酶分析,还揭示了在柑桔原生质体融合再生中,胚状体水平上存在淹广泛的遗传变异。其中有14.1%的胚状体为四倍体,近20%为超倍体的非整倍体,并讨论了变异发生及由胚状体再生植株困难的原因。     

普通烟草与黄花烟草体细胞杂种的花粉粒、果实、种子及气孔的观察

长尾照义[97对有性杂交不易成功的普通烟 草(Nicotiana tabacum）粉红花品种和黄花烟草 (N. rustica）利用体细胞融合的方法,获得了 体细胞杂种。我们利用了普通烟草的红花品种 (Copes yusuhe及u No. 4）和黄花烟草的黄花烟 品种进行了体细胞融合,获得了体细胞杂种植 株^[1,2]。对这些植株的花型、花色、叶型等形态 学的特征和根尖染色体进行了观察,并作了过 氧化物酶和细胞色素氧化酶同功酶的酶谱分 析^[3],证明我们获得了真正的体细胞杂种。在 杂种植株开花、结实时,又对体细胞杂种株及 其亲本的花粉粒、果实、种子和气孔进行了观 察和比较,以期找到一种简便易行的鉴定方 法。     

植物体细胞杂交和基因转移研究进展（Ⅰ）

现在,有多种农作物用原生质体培养和融合已获得成功,为农作物的改良找到了一种实用的方法。从20世纪60年代初期到现在,已经能使那些难于培养成功的、单子叶植物的原生质体植株培养成功。茄科植物的原生质体培养较多,如烟草属、曼陀罗属和牵牛属植物的成功杂交,而且也促使茄属和番茄属体细胞杂交成功,伞形科植物如胡萝卜与相关种的杂交已获得成功,芸香科中的柑桔属间体细胞杂种已获成功,豆科植物中,苜蓿、三叶草和百脉根等牧草,已     

原核微生物原生质体融合

引言微生物原生质体融合是在高等动植物体细胞杂交的基础上发展起来的。早在1838年Muller曾见到肿瘤多核细胞的融合现象,直到1962年才由Okada首次用仙台病毒诱导建立了细胞融合的基本方法。与此同时,植物的体细胞杂交也得以开展,去除细胞壁的植物原生质体融合获得杂种细胞,并再生成植株。1970年英国的Power等首次报道了高浓度NaNO_3诱导植物原生质体融合,1972年Carlson等用Na_2CO_3诱导融合。目前在植物原生质体融合中主要用的方法有两大类:keller等建立的高Ca~(2+)、高pH方法以及高国楠等发展起来的聚乙二醇诱导     

普通烟草和黄花烟草及体细胞杂种过氧化物酶同工酶等电聚焦电泳

日本学者长尾照义(1978)用原生质体融合获得普通烟草与黄花烟草的体细胞杂种植株。1980年陈家玉等在国内首先获得普通烟草(Copus Yeusuku No.4)和黄花烟草(Yellow Flower)的体细胞杂种植株。之后,中国农科院烟草所(1981)也得到相同的结果。陈家玉等(1983)对上述杂种进行了形态学、细胞学和同工酶的分析并取得一定的结果。Dlineee等(1975)分析比较了用等电聚焦技术分离的过氧     

胡萝卜体细胞遗传

引言 自从卡尔逊(Carson)报导了植物从组织培养分离突变体及产生体细胞杂种以后,人们对建立植物体细胞遗传系统方面具有浓厚的兴趣。在过去十年,已经在几个植物种获得了生化突变种,以及种间和属间的体细胞杂种。本章综述了胡萝卜体细胞遗传学的现状,同时强调使之作为对遗传学研究的一个合适的体细胞系统的那些属性。     

烟草种间体细胞杂种后代的遗传性状观察和选育

1980年,通过原生质体融合获得普通烟草与黄花烟草(N.tabacum + N.rustica)、普通烟草与粉蓝烟草N.tabacum + N.glauca)种间体细胞杂种植株。 对其后代连续七年进行了遗传性状观察和选育。结果表明：杂种一代呈典型的双亲中间型,杂种三代和回交二代开始分离,也有一直不分离的稳定株系和雄性不育株系。杂种后代育性差,回交能转育并逐步累积轮回亲本性状,染色体数目则逐渐减少。在杂种后代选育中,已选出了有一定应用价值的烟草新类型。通过体细胞杂交技术,有可能开辟出烟草育种新途径。     

花椰菜与黑芥非对称体细胞杂种的鉴定分析

选用兼具抗黑腐病、黑胫病、根肿病的野生种质黑芥(B.nigra)作为供体,具有良好原生质体培养能力的花椰菜(Boleracea var.botrytis L.)基因型"0307"作为受体,供体叶肉原生质体经不同剂量UV照射处理后,通过PEG介导,与不经任何处理的受体下胚轴原生质体融合,培养获得再生植株.形态学观察显示再生植株的表型多样,呈偏向受体花椰菜类型及中间类型分布:SRAP分子标记特征表明,杂种中受体的遗传信息较为完整,而来自供体的特异扩增带丢失量约为20.0%-97.8%,且不同杂种中存在热点丢失序列;约23.0%的再生植株其染色体数目小于供、受体染色体数之和;采用流式细胞仪对再生株的细胞DNA含量进行分析,结果显示,20%的植株其DNA含量小于供、受体DNA含量总和.对22棵再生植株进行了黑腐病人工接种抗性鉴定,17棵再生植株表现良好抗性,初步证明通过非对称体细胞杂交技术已将外源抗性基因转入花椰菜中.实验表明UV辐射处理,导致再生植株中供体遗传信息的部分丢失或者染色体在不同程度上的消减,获得了花椰菜与黑芥的非对称体细胞杂种,但UV的剂量效应不明显.     

植物体细胞杂交研究的进展

植物体细胞杂交是在七十年代兴起的一个研究领域。由于这项技术对于农作物改良具有重要意义,故在国内外引起了广泛的重视。十多年来,该领域进展迅速,成果引人注目。据不完全统汁,目前已经获得种内、种间和属间体细胞杂种共23种(见后表),此外还引进了大量细胞学、遗传学和分子生物