一种从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简单电洗脱装置

我们设计了一种简单电洗脱装置,从琼脂糖胶中回收ＤＮＡ。该装置由两个带旋盖的小管、两块透析膜和一个凝胶屏障组成。在电场作用下,ＤＮＡ从凝胶中迁移出来,通过凝胶屏障进入由凝胶屏障和透析膜组成的回收小仓。用微量吸样器收集ＤＮＡ,乙醇沉淀和清洗。该法ＤＮＡ的回收率约８５％;回收的ＤＮＡ可用于基因工程常规实验。     

一种分离回收DNA的简捷方法

一种分离回收ＤＮＡ的简捷方法崔晓江,彭学贤（中国科学院微生物研究所,北京１０００８０）从凝胶中分离回收ＤＮＡ有多种方法,如常用的低熔点胶法,普通胶液氮速冻法等。Ｂｉｏ１０１公司生产的Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ试剂盒使ＤＮＡ回收避免了苯酚抽提和乙醇沉淀,简单快...     

人琼脂糖电泳凝胶中回收DNA的几种简便方法

介绍两类从普通琼脂糖电泳凝胶中回收ＤＮＡ的简便,快捷,高效且廉价的方法,第一类为电泳洗脱法,方法ａ．利用１．５ｍＬ微量离心管,１ｍＬ吸头,尼龙网膜和透析膜做成的一个小装置,快速有效回ＤＮＡ,最终回收率为７０％左右,方法ｂ：不用ＤＥＡＥ－纤维素膜,而用透析膜在凝胶中作出横隔挡在ＤＮＡ条带前,最终回收率为５０％左右,第二类为冰冻融解法,最终回收率也在５０％左右,如果联合使用冰冻融解法和电泳洗脱法,回收     

从琼脂糖电泳凝胶中回收DNA的几种简便方法

介绍两类从普通琼脂糖电泳凝胶中回收ＤＮＡ的简便、快捷、高效且廉价的方法．第一类为电泳洗脱法．方法ａ：利用１．５ｍＬ微量离心管、ｌｍＬ吸头、尼龙网膜和透析膜做成的一个小装置,快速有效回ＤＮＡ,最终回收率为７０％左右．方法ｂ：不用ＤＥＡＥ－纤维素膜,而用透析膜在凝胶中作出横隔挡在ＤＮＡ条带前,最终回收率为５０％左右;第二类为冰冻融解法,最终回收率也在５０％左右．如果联合使用冰冻融解法和电泳洗脱法,回收率可进一步提高至９０％．     

一种从重组质粒快速提纯DNA插入片段的方法

本文介绍一种从重组质粒中快速提纯ＤＮＡ插入片段的方法。质粒ＤＮＡ的制备简单、快速、分离的质粒ＤＮＡ可用于限制性酶切和转化大肠杆菌等。从琼脂糖凝胶中提纯ＤＮＡ插入片段的方法操作简单,回收效率高,提纯的ＤＮＡ片段可用于连接和制备杂交探针等。     

一种改良的从银染的聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA的方法

ＣｌｉｎＣｈｅｍ,１９９８,４４（９）报道了Ｓｔｅｖｅｎ等介绍的从聚丙烯酰胺凝胶上将ＤＮＡ转移到ＤＥＡＥ膜上的技术。此技术能同时进行多个样品的处理和纯化,被纯化的差异显示法（ＤＤＡ）产物电泳条带单一,分离的范围为１００～７００ｂｐ的ＤＮＡ,回收的ＤＮ...     

人血小板生成素（hTPO）的cDNA克隆,序列测定及其在COS—7细胞中的表达

本文利用反转录ＰＣＲ技术从人胎肝ｍＲＮＡ中分别扩增出ｈＴＰＯ　Ｎ－端和Ｃ－端两个ｃＤＮＡ片段,然后经酶切分别连接重组到质粒ｐＵＣ１９中进行序列分析,在确证其序列与国外文献报道完全一致的基础上,酶切、回收、连接其Ｎ－端、Ｃ端ｃＤＮＡ,并以此为模板,用ＰＣＲ法扩增出全长ＴＰＯｃＤＮＡ片段,并将其重组到穿梭质粒ｐＳＶＫ３中,在ＣＯＳ－７中进行了瞬时表达并检测出表达产物的活性     

PCR产物直接分子克隆的比较研究

本文比较了ＰＣＲ产物的三种分子克隆技术,实验证明其中Ｔ４ＤＮＡ聚合酶切平和Ｔ－Ａ互补法较凝胶电泳回收加Ｋｌｅｎｏｗ酶切平法远为有效和简便。对这几种克隆技术的方法学还作了进一步的讨论。     

PCR产物直接分子克隆的比较研究

本文比较了ＰＣＲ产物的三种分子克隆技术,实验证明其中Ｔ４ＤＮＡ聚合酶切平和Ｔ－Ａ互补法较凝胶电泳回收加Ｋｌｅｎｏｗ酶切平法远为有效和简便。对这几种克隆技术的方法学还作了进一步的讨论。     

献血员巨细胞病毒感染的研究

用ＰＣＲ法和ＤＮＡ杂交法检测同一献血员的白细胞及血清中的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ,并用ＥＬＩＳＡ法检测血清中的ＨＣＭＶ－ＩｇＭ、ＩｇＧ（测四个不度）,连续两年共检测白细胞和血清样本各２００人份。ＰＣＲ法检测白细胞中的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率分别为６３％和７０％,ＤＮＡ杂交法检测的阳性率为４２％和５０％。ＰＣＲ法检测血清中的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的阳性率为４９％和５３％,ＤＮＡ杂交法检测的阳性率为３３％和３９％。Ｈ     

DNA芯片制作原理及其杂交信号检测方法

文章讨论了ＤＮＡ芯片的制作原理和杂交信号的检测方法。依其结构,ＤＮＡ芯片可分为两种形式,ＤＮＡ阵列和寡核苷酸微芯片。ＤＮＡ芯片的制作方法主要有光导原位合成法和自动化点样法。ＤＮＡ芯片与标记的探针或ＤＮＡ样品杂交,并通过探测杂交信号谱型业实现ＤＮＡ序列或基因表达的分析。适应于ＤＮＡ芯片的发展,同时出现了许多新型的杂交信号检测方法。主要有激光荧光扫描显微镜、激光扫描共焦显微镜、结合作用ＣＣＤ相机的荧光     

用DNA酶切小分子片段在非洲爪蟾卵提取物中实现非细胞体系核装配

用质粒ｐＢＲ３２２的ＤＮＡ酶切片段,长度分别为７５０、３７５和１８６ｂｐ作为外源ＤＮＡ在非洲爪蟾 卵提取物中实现了非细胞体系的核装配（核重建）。将分离纯化得到的 ＰＢＲ３２２ ＤＮＡ酶切后经低熔 点琼脂糖回收ＤＮＡ片段,长度为７５０、３７５和１８６ｂｐ,分别加入到爪蟾卵提取物再生系统中温育, 经ＤＡＰＩ染色、孚尔根染色及电子显微镜观察发现能装配大量的重建核。显微分光光度法研究表 明,ＤＮＡ片段在诱导形成重建核的过程中发生了明显的凝集－会凝集变化。α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ掺入重建核 的液闪计数结果表明,ＤＮＡ酶切小分子片段诱导形成的重建核具有较高的ＤＮＡ复制活性,而且复 制活性在一定范围内与加入的ＤＮＡ片段长度呈正相关。实验结果表明,非细胞体系中诱导的核重 建不仅与外源ＤＮＡ的种类无关,与外源ＤＮＡ的长度也没有关系。     

用DNA酶切小分子片段在非洲爪蟾卵中提取物中实现非细胞体系核装配

用质粒ｐＢＲ３２２的ＤＮＡ酶切片段,长度分别为７５０,３７５和１８６ｂｐ作为外源ＤＮＡ在非洲爪蟾卵撮以物中实现了非细胞体系的核装配。将分离纯化得到的ｐＢＲ３２２ＤＮＡ酶切后经低熔点琼脂糖回收ＤＮＡ片段,长度为７５０,３７５和１８６ｂｐ,分别加入到爪蟾卵提取物再生系统中温育,经ＤＡＰＩ染色,孚尔根染色及电子显微镜观察发现能装配量的重建核。     

鹅源腺病毒基因组DNA物理图谱的构建

将鹅源腺病毒Ｙ８１Ｇ４株全基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ酶切片段分别插入质粒ｐＵＣ１８,成功构建了全基因组ＤＮＡ文库。在此基础上,将重组质粒携带的插入片段切出、回收并分别用地高辛标记后作为探针,与经限制酶ＢａｍＨⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ、ＥｃｏＲⅤ消化的病毒基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ,杂交结果经比较综合后获得了该病毒基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ、Ｅｃ     

内皮素A型受体胞内区在大肠杆菌中的表达及其纯化

利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ体外重组方法,将内皮素Ａ型受体（ＥｎｄｏｔｈｅｌｉｎｔｙｐｅＡｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＥＴＡＲ）胞内区ｃＤＮＡ克隆到ｐＵＣ１８载体中进行序列分析。结果表明,ＤＮＡ序列与预期结果完全相符。然后用低熔点琼脂糖回收插入到ｐＵＣ１８载体中的ＥＴＡＲ胞内区ＤＮＡ片段,连接到ｐＧＥＸ２Ｔ融合蛋白表达载体的凝血酶位点下游,转化大肠杆菌ＪＭ１０３,得到的重组质粒命名为２Ｔ／ＥＴＡＲ。ＪＭ１０３（２Ｔ／ＥＴＡＲ）经３０℃培养、ＩＰＴＧ诱导明显表达出ＥＴＡＲ胞内区融合蛋白,表达产物主要以包涵体形式存在。包涵体经变性和复性后,用亲和层析一步纯化法获得了较纯的ＥＴＡＲ胞内区融合蛋白,为进一步研究ＥＴＡＲ胞内区的功能打下了良好的基础     

红树DNA的十六烷基三甲基溴化铵法提取及其随机扩增多态DNA反应

采用ＣＴＡＢ法提取了耐盐植物红树ＤＮＡ,所得ＤＮＡ样品的紫外吸收Ａ２５８／Ａ２８０比值为１．８９,纯度能符合限制性内切酶酶切、ＰＣＲ反应以及ＤＮＡ重组克隆等分子生物学操作的要求．方法简便,容易掌握,较普通的酚－氯仿法有明显的优点．还探讨了以ＣＴＡＢ法制备的红树ＤＮＡ为模板进行ＲＡＰＤ反应参数的优化组合     

大鼠催乳素基因真核细胞可表达性质粒的构建及应用研究

７３５ｂｐ的ＰＲＬｃＤＮＡ片段从质粒ＰＲＬ－ＳＰ６５＃１中回收后,用粘性末端连接法将其重组到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上,筛选出正向连接重组体ｐｃＤＮＡ３－ＰＲＬＳ和反向连接重组体ｐｃＤＮＡ３－ＰＲＬＡＳ。将重组体ｐｃＤＮＡ３－ＰＲＬｓ和空载体ｐｃＤＮＡ３分别转入ＮＩＨ３Ｔ３细胞系,用Ｇ４１８筛选出阳性细胞后与未转染的ＮＩＨ３Ｔ３细胞在加Ｅ２和不加Ｅ２的情况下,用原位杂交的方法,分别用ＰＲＬｃＤＮＡ探针和原癌基因ｃ－Ｈ－ｒａｓｃＤＮＡ探针进行检测,未转染的ＮＩＨ３Ｔ３细胞在加Ｅ２和不加Ｅ２时都几乎无催乳素基因的表达,同样,转入空载体的ＮＩＨ３Ｔ３细胞也无ＰＲＬ的表达,而转入重组体ｐｃＤＮＡ３－ＰＲＬＳ的ＮＩＨ３Ｔ３细胞则有大量的ＰＲＬ基因的表达,与对照组相比有显著差异（Ｐ＜０．０１）。正常和转入空载体的ＮＩＨ３Ｔ３细胞有一定程度的原癌基因ｃ－Ｈ－ｒａｓ的表达,当分别加入Ｅ２和转入重组体ｐｃＤＮＡ３－ＰＲＬＳ后,ＮＩＨ３Ｔ３细胞中的ｃ－Ｈ－ｒａｓ基因表达水平都显著升高（Ｐ＜０．０５）。     

用差异显示法从人胎脑基因文库分离一个编码序列

人１８周、２２周胎儿脑、肝肾组织总ｍ ＲＮＡ 用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ显示出差异的条带,回收胎脑和肝肾特异性表达的４８７条电泳条带．其中某些条带用３种组织的ｃＤＮＡ 探针作点杂交,筛选只对胎儿脑总呈阳性的ＤＮＡ 片段．以其中某一条带ＤＮＡ 为探针,从胎儿脑ｃＤＮＡ 文库筛选阳性克隆,得到ＧＣ５８．经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交和ＤＮＡ 测序,表明它是人脑表达的序列,与数据库中ＫＩＡＡ０５１５有同源性,并编码一个有２７４个氨基酸的蛋白质,该蛋白质序列尚未见报道．探讨了ＤＤＲＴ－ＰＣＲ的条件和假阳性问题．     

用做标记的两种酵母菌完整染色体DNA的简化制备法

已知分子量在小的染色体ＤＮＡ分子标记是脉冲电泳研究中用以估算样本染色ＤＮＡ分子大小必不可和的参照物。对用做标记的啤酒酵母和粟酒裂殖酵母完整染色体ＤＮＡ几种制备方法的比较研究以及改进研究表明,液氮冷冻研磨法,凝胶包埋法以及凝胶包埋破壁法效果均很好,都得到大量染色体ＤＮＡ,且彼此此间无明显差异。     

一种快速mRNA差异显示技术及用于分离辐射诱导转录子

介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速ｍＲＮＡ差异显示技术．其特点是不用同位素标记,操作简便,在普通琼脂糖凝胶电泳中就能分辨差异显示的ｃＤＮＡ带,便于ＤＮＡ回收和进一步重组克隆．用此方法成功地分离到电离辐射诱导转录子．