微波诱变结合化学诱变选育酸性蛋白酶高产菌

酸性蛋白酶是酶制剂工业比较重要的酶种,广泛应用于饲料、食品、皮革、医药和酿造工业中［１～４］,具有较大的市场潜力。本研究以宇佐美曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｕｓａｍｉ）白色突变株Ｂ１为出发菌株,通过微波诱变和亚硝基胍、硫酸锂复合诱变剂点试平板法诱变,选...     

耐热蛋白酶的特性及其潜在应用

<正> 在历史上,蛋白酶在对天然产品的加工中起了非常重要的作用。许多世纪以来,含有蛋白酶的培养物、提取物和废弃物已经应用在各个方面,如皮革鞣制和各种调味剂的生产。今天,蛋白酶很可能是工业酶类中最     

酱油曲霉蛋白酶活力的提高

蛋白酶在工业上被广泛地应用于皮革、毛皮、丝绸、医药、食品和酿造等行业。霉菌生产的蛋白酶在豆酱和酱油生产上的应用已经具有相当悠悠的历史。曲霉菌,例如米曲霉、黄曲霉、栖土曲霉等,一般能分泌2～3种蛋白酶(酸性、中性及碱性),其中以中性和碱性酶为主。黑曲酶则以产酸性蛋白酶为主。酱油曲霉所产的蛋白酶也以中性     

南京工业大学制药与生命科学学院

南京工业大学制药与生命科学学院（简称“生工学院”）是国家生化工程技术研究中心的依托单位,由生物工程系、制药工程系、药学系、食品科学与工程系组成,设有化学工程与技术博士后流动站,拥有五个博士学位授权点（生物化工、工业生物催化、制药工程,生物材料、发酵工程）、五个硕士学位授权点（生物化工、微生物、发酵工程、药物化学、食品科学）、二个工程领域工程硕士学位授权点（制药工程、生物工程）、五个学士学位授权点（生物化工、生物技术、制药工程、药物制剂、食品工程）。生物化工学科是国家重点学科建设培育点;生物化工专业是江苏省品牌专业;生物分离工程是国家精品课程。建有工业生物技术研究所、药物研究所、药剂研究所;拥有江苏省工业生物技术重点实验室。“生物工程与技术基础实验和工程实训中心”是江苏省高校实验教学示范点。     

米曲霉酸性蛋白酶基因在毕赤酵母中的异源表达及酶学性质

酸性蛋白酶作为一类重要的天冬氨酸蛋白酶,被广泛应用于食品、医药和皮革等领域。为推动酸性蛋白酶的研究及应用,通过对发酵豆制品样品进行宏基因组测序,从中获得米曲霉酸性蛋白酶基因pepA,在毕赤酵母GS115中进行异源表达,并对重组酶PepA进行酶学性质分析。结果显示毕赤酵母发酵上清液中酸性蛋白酶的活性为50.62 U/mL。SDS-PAGE验证PepA的分子量约为50 kDa,且发酵上清液几乎无杂蛋白。PepA的最适pH值为4.5,最适温度为50℃,Mn~(2+)和Cu~(2+)对其具有激活作用,而Fe~(3+)、Fe~(2+)与Ca~(2+)则具有抑制作用。上述研究结果可为米曲霉酸性蛋白酶的异源表达及其相关工业应用提供指导。     

烷烃溶剂对耐有机溶剂极端微生物地衣芽孢杆菌YPl产胞外蛋白酶的影响

考察了添加5％（V／V）浓度的正庚烷、正辛烷、正癸烷、十二烷、十四烷、十六烷等烷烃溶剂对耐有机溶剂极端微生物地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）YPl的生长及产胞外蛋白酶的影响。结果表明5％（v／v）浓度的各种烷烃瘩剂对YPl蛋白酶的稳定性及菌体生物量均无显著影响,正庚烷、正辛烷、正癸烷等溶剂显著抑制YPl产蛋白酶,而十二烷、十四烷、十六烷能提高YPI产蛋白酶1倍以上。发酵液中十四烷的浓度（1％-8％,V/V与蛋白酶的活力呈正相关性,添加十四烷后发酵过程中蛋白酶活力的显著增加出现在菌体生长的对数后期。培养过程中添加十四烷能导致YPl菌体形态显著变小。首次报道了烷烃溶剂对极端微生物产蛋白酶的影响。     

海带,裙带菜和紫菜蛋白酶谱的研究

采用复性电泳方法对海带（ＬａｍｉｎａｒｉａＬａｍｘ．）、裙带菜（ＵｎｄａｒｉａＳｕｒｉｎｇａｒ）和紫菜（ＰｏｒｐｈｙｒａＣ．Ａｇ．）３个属１１种海藻的蛋白酶进行了研究,分析了海带、裙带菜和紫菜在不同ｐＨ条件下,蛋白酶种类的分布情况和活性差异。结果表明：（１）蛋白酶种类和活性受ｐＨ的影响和制约,其最适ｐＨ为８．０,此条件下蛋白酶的种类最多,活性最强;（２）亲缘关系越近,蛋白酶种类和活性越相似,海带同属不同种之间存在相同的蛋白酶,而不同属的海藻中很难找到相同的蛋白酶带;（３）海带属不同种所共有的两种蛋白酶（分子量１９ｋＤ和１８ｋＤ）是其特征性酶带;（４）蛋白酶谱可作为海藻分类依据之一。     

4-甲酰苯基硼酸对蛋白酶MP的抑制作用及其抑制机制的分子动力学模拟

蛋白酶MP (marine protease)是海洋细菌来源的新型碱性金属蛋白酶,在工业中具有良好的应用前景。本文采用酶动力学方法研究4-甲酰苯基硼酸（4-FPBA）对MP的抑制作用,并结合分子模拟的方法,通过水溶液环境下分子力学 玻尔兹曼泊松表面积（MM-PBSA）和量子力学/分子力学混合方法(QM/MM)对其抑制机制进行了研究。结果表明,4-FPBA对蛋白酶MP的抑制过程属可逆的竞争型抑制,抑制常数Ki为0.57 mmol/L。在4-FPBA与蛋白酶MP的结合过程中,范德瓦尔斯相互作用对于其结合发挥了重要作用。明确了Arg59、Leu151、His190和His196的4个残基为蛋白酶MP中与4-FPBA结合的关键残基。该研究结果将为今后进行蛋白酶MP可逆抑制剂的筛选与设计提供理论基础,以提高其液态稳定性,从而拓宽蛋白酶MP在液体洗涤剂中的高效应用。     

小白鼠发育过程中胃和大肠蛋白酶活性的变化

采用活性电泳方法对小白鼠发育过程中胃和大肠蛋白酶活尾进行了研究。结果发现：（１）出生前、胃和大肠蛋白酶种类少、活性弱,出生后,胃和大肠蛋白酶的种类多,活性增加;（２）胃肠蛋白酶可能与其结构的构建和功能建立有密切关系;（３）食物 刺激可能对胃肠蛋白酶有显著影响。     

常规聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测胰蛋白酶抑制剂的方法

ＳＤＳ—ＰＡＧＥ－　明胶电泳是检测蛋白酶抑制剂的常用方法,基本原理为：聚丙烯酰胺凝胶中加入ＳＤＳ和明胶,　　ＳＤＳ使蛋白酶抑制剂发生可逆变性。电泳完毕,用　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－　１００恢复凝胶板中蛋白酶抑制剂的活性,凝胶板置于蛋白酶溶液里保温,含蛋白酶抑制剂部位的明胶不被蛋白酶水解而呈现蛋白染色带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ一明胶电泳检测蛋白酶抑制剂时,在同一块凝胶板上可同时检测酸性、碱性及中性的蛋白酶抑制剂,但电泳后处理（包括复性,酶解,漂洗和染色）时间长（约２０ｈ）,而且对于同一样品中分子量相近的蛋白酶…     

微生物酸性蛋白酶软化皮毛鉴定会在乌鲁木齐召开

在批林批孔运动的推动下,由新疆维吾尔自治区科委主持于1974年s月20日召开了微生物酸性蛋白酶软化毛皮鉴定会。参加会议的有轻工部、三部(轻工部、外贸部、商业部)毛皮研究小组、上海市工业微生物研究所、上海酒精厂、北京畜产品进出口公司、张家口第一制皮厂、宁夏工业设计研究所、3512厂、新疆自治区计委、自治区轻工局、外贸局、皮革公司、新疆化学研究所、新疆大学等三十个单位48名代表。     

FRET技术检测植物类caspase-3蛋白酶活性的质粒构建及其瞬时表达

植物细胞程序性死亡（programmed cell death,PCD）是一种由细胞内部程序控制的、主动的细胞死亡过程。在植物发育、逆境胁迫及超敏反应中,PCD都起着重要的作用。为检测植物PCD过程中类似动物细胞凋亡蛋白酶caspase-3的活性,构建了一个能够在活体植物细胞中实时检测类caspase-3蛋白酶激活的质粒PI—ECFP—EYFP。该质粒在植物细胞中可以表达出两端为青色荧光蛋白（ECFP）和黄色荧光蛋白（EYFP）的融合蛋白。这两个荧光蛋白通过含有caspase-3蛋白酶作用靶点DEVD的短肽相连,从而可以根据荧光共振能量转移现象检测类caspase-3凋亡蛋白酶的激活,以为实时检测植物PCD过程中关键蛋白酶的激活及其调控奠定基础。     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究 Ⅰ.碱性蛋白酶高产菌的筛选及产酶条件初探

从成都佳丰食品厂等处采集的样品中平板分离初筛到124株碱性蛋白酶产生菌,进一步复筛出一株高产,且稳定的碱性蛋白酶产生菌株B．L．JF-ld,初步鉴定为地衣穿孢杆菌（Bacilluslicheniformis）。该菌的最适产酶条件为：培养基（％）为麦芽糖7．5,酵母膏3,NaCl0．5,K2HPO4·3H2O0．53,NaHPO4·2H2O0．03,Na2CO30．056,MnSO4l×10－4mol／L,pH8．7,通气量为（1：0．5）～（1：1）（v／v）,37℃发酵40h,酶活力单位高达7180U／ml。     

海南近海水域产碱性蛋白酶菌株的分离筛选及发酵条件优化

【背景】微生物蛋白酶在工业生物技术上具有广阔的应用前景。在微生物蛋白酶中,碱性蛋白酶占全球酶总产量的50%以上,获取产碱性蛋白酶的新微生物资源意义重要。【目的】在海南近海贝类养殖基地海泥中筛选获得高产碱性蛋白酶的菌株,对其生长特性进行探究并优化菌株产酶条件,获得新的蛋白酶生产资源。【方法】以酪素培养基为筛选培养基,采用形态学结合系统发育分析鉴定菌株,通过响应面实验优化菌株的产酶条件。【结果】筛选获得一株高产碱性蛋白酶的菌株F3,鉴定为粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）。菌株在最优产酶条件下发酵酶活达到（339.36±4.30） U/mL。【结论】筛选获得的菌株粘质沙雷氏菌F3有较好的产碱性蛋白酶的能力。     

蛇毒丝氨酸蛋白酶多样性──底物专一性免疫化学及序列比较研究

本文报道烙铁头（Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓｍｕｃｒｏｓｑｕａｍａｔｕｓ）蛇毒纤维蛋白原溶酶（ＴＭＶＦｇ），眼镜王蛇（Ｏｐｈｉｏｐｈａｇｕｓｈａｎｎａｈ）蛇毒纤维蛋白原溶酶（ｏｈＳ１），竹叶青（Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓｓｔｅｊｎｅｇｅｒｉ）蛇毒专一纤溶酶原激活剂（ｓｖ－ｐＡ）对５种小分子多肽底物的底物专一性，及这些蛇毒丝氨酸蛋白酶对各种凝血因子（第Ｘ因子、凝血酶原、纤溶酶原、蛋白Ｃ）的作用，并和其它蛇毒丝氨酸蛋白酶如矛头蝮（Ｂｏｔｈｒｏｐｓａｔｒｏｘ）蛇毒凝血酶样酶（Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ）、铜头蝮（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｃｏｎｔｏｒｔｒｉｘｃｏｎｔｏｒｔｒｉｘ）蛇毒蛋白Ｃ激活剂ＡＣＣ－Ｃ、蝰蛇（Ｖｉｐｅｒａｒｕｓｓｅｌｌｉ）毒第Ⅴ因子激活剂ＲＶＶ－Ｖ进行比较研究。通过酶标偶联免疫反应研究了抗ｓｖ－ＰＡ抗体与各种丝氨酸蛋白酶的免疫交叉反应，并对蛇毒丝氨酸蛋白酶及相应功能的哺乳动物蛋白酶进行了序列比较分析。从底物专一性多样性及已知序列结构分化上对这一类蛇毒丝氨酸蛋白酶的结构与功能进行了探讨和研究。     

四川大学生命科学学院

四川大学生命科学学院的前身是1916年成立的国立成都高等师范学校博物部。1994年，原四川大学生物系、生物工程系与原成都科技大学生物医学工程部分研究所合并成立四川联合大学生命科学与工程学院。     

老年冠心病患者的颈动脉超声特征与胆红素血脂综合指数、斑块稳定性的相关性分析

摘要 目的：探讨老年冠心病患者的颈动脉超声特征与胆红素血脂综合指数、斑块稳定性的相关性。方法：选择2021年1月至2022年12月来我院诊治的冠心病患者120例。检测所有患者的TC、LDL-C、HDL-C、TBIL、血清I型前胶原羧基端前肽、组织蛋白酶K、基质金属蛋白酶-1、基质金属蛋白酶-9水平,并行颈动脉超声进行检查,确定颈动脉内膜中层厚度,同时行冠状动脉造影,确定冠状动脉病变支数及冠状动脉病变积分。分析不同冠状动脉病变组的颈动脉块数、颈总动脉的超声血流参数及生化指标水平,分析不同颈动脉内膜中层厚度患者的生化指标水平,分析不同冠状动脉病变积分患者的生化指标水平,分析120例冠心病患者颈动脉超声特征及胆红素血脂综合指数、血清斑块稳定性指标的相关性。结果：三支病变组的颈动脉内膜中层厚度、Gokmen积分、TC/（HDL-C+TBIL）、LDL-C/（HDL-C+TBIL）、I型前胶原羧基端前肽、组织蛋白酶K、基质金属蛋白酶-1、基质金属蛋白酶-9水平明显较单支及双支病变组高,双支病变组的以上指标明显较单支病变组高（P均<0.05）,单病变组的TBIL明显较双支及三支高（P<0.05）,其在双支及三支病变组间无统计学意义（P>0.05）。内膜正常组的TC/（HDL-C+TBIL）、LDL-C/（HDL-C+TBIL）、I型前胶原羧基端前肽、组织蛋白酶K、基质金属蛋白酶-1、基质金属蛋白酶-9水平明显较内膜增厚组及斑块形成组高,内膜增厚组以上指标明显较斑块形成组高（P均<0.05）,内膜正常组的TBIL明显较内膜增厚组与斑块形成组高（P<0.05）,而内膜增厚组与斑块形成组间对比无统计学意义（P>0.05）。冠状动脉病变积分≤5分组的TC/（HDL-C+TBIL）、LDL-C/（HDL-C+TBIL）、I型前胶原羧基端前肽、组织蛋白酶K、基质金属蛋白酶-1、基质金属蛋白酶-9水平明显较6~10分组及11~15分组高,6~10分组以上指标明显较11~15分组高（P均<0.05）,≤5分组的TBIL明显较6~10分组与11~15分组高（P<0.05）,而在6~10分组与11~15分组间对比无差异（P>0.05）。不同组间的TC、LDL-C、HDL-C水平对比无统计学意义（P>0.05）。颈动脉内膜中层厚度、Gokmen积分与TC/（HDL-C+TBIL）、LDL-C/（HDL-C+TBIL）、I型前胶原羧基端前肽、组织蛋白酶K、基质金属蛋白酶-1、基质金属蛋白酶-9水平均呈正比（P<0.05）;颈动脉内膜中层厚度、Gokmen积分与TC、LDL-C、HDL-C、TBIL水平无相关性（P>0.05）。结论：老年冠心病患者的冠状动脉病变越严重,其颈动脉超声特征、胆红素血脂综合指数、斑块稳定性不断恶化,颈动脉超声特征指标与胆红素血脂综合指数、斑块稳定性指标水平呈正相关。     

氨的厌氧氧化

氨的厌氧氧化王建龙（清华大学环境工程系、环境模拟与污染控制国家重点联合实验室,北京１０００８４）关键词氨氧化废水脱氮工业排放的含氮废水和农业施用的氮肥随雨水冲刷入江河、湖泊,生活污水排入受纳水体等,对环境造成的污染越来越严重,已引起人们的普遍关注。这...     

枯草杆菌碱性蛋白酶蛋白质工程进展

枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin,EC 3·4·21·14)一般是指枯草杆菌及其它芽孢杆菌产生的胞外碱性蛋白酶Subtilisin具有巨大的商业价值,被广泛应用于蚕丝工业、制革工业及洗涤剂工业。     

我国碱性蛋白酶的应用及研究进展

碱性蛋白酶（AkallneProteilse）指在PH值碱性范围内水解蛋白质肽键的酶类,最早发现在猪胰脏中。19门年R0dri首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用［1］。 1945年瑞士的Dr．Jeq等发现了微生物碱性蛋白酶［2］,使蛋白酶有可能广泛用于洗涤剂工业。近20年来对碱性蛋白酶的研究更加广泛［3］。我国碱性蛋白酶的研究近十年才有较大的发展,特别是近几年取得了可喜的成果,及时转化为生产力,具有很大的经济和社会效益。1我国碱性蛋白酶研究的近况及其应用1．且用于周性蛋白酶生产的主要微生物目前用于碱性蛋白酶的生产菌和研究对象主要是枯草…