艰难梭菌荚膜致病作用的初步研究

本文在我室先前研究的基础上,以3株艰难梭菌的荚膜多糖提取物、全菌悬液以及全菌免疫血清分别在小鼠中进行半数致死量和保护试验等动物实验,以探讨艰难梭菌荚膜的致病作用。结果测得其中一株艰难梭菌的荚膜多糖对小鼠有致死毒性,其LD50为2.83mg,特异性抗血清保护试验证实艰难梭菌免疫血清对动物有保护作用。实验结果可能为进一步研究艰难梭菌荚膜的致病作用提供了参考资料。     

艰难梭菌荚膜多糖的提纯和分析

本文采用改进的丙酮法制备了艰难梭菌荚膜多糖。制备的荚膜多糖纯品含荚膜多糖达72％,在Sepharope-4B凝胶层析中,该英膜多糖的分配系数(Kd)为0.77。经对流免疫电泳法鉴定,纯化后的荚膜多糖仍保持着原性,用制备的艰难梭菌荚膜多糖免疫小白鼠,经间接法ELISA检测,未见抗荚膜多糖抗体明显增高。     

艰难梭菌荚膜的研究

本文采用提取细菌荚膜多糖的三种方法,提取艰难梭菌(Clostridium difficile)的荚膜多糖,经鉴定证实,该菌荚膜是由多糖和蛋白质两种成份组成。这不仅证明该菌存在荚膜,而且为进一步研究该菌的生物学特性提供了有利条件。     

含CD自杀基因腺病毒载体的构建及其应用

构建了含ＣＭＶ启动子、大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ｃｄ）基因的复制缺陷型重组腺病毒载体（ＡｄＣＭＶＣＤ）。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ鉴定证实,ｃｄ基因已克隆进入ＡｄＣＭＶＣＤ,并在受染细胞中表达。经氯化铯密度梯度离心法纯化的病毒滴度达１×１０１５ｐｆｕ／Ｌ。经１００ｍ．ｏ．ｉ．的ＡｄＣＭＶＣＤ感染的ＨｅＬａ和Ｃ６细胞株在１００μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,细胞存活率＜２０％。同时也观察到ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统有很强的旁杀伤效应,将３．３％的ＡｄＣＭＶＣＤ受染细胞与９６．７％的野生型细胞混合,经５０μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,＞６０％的细胞被杀死。ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统的建立为肿瘤基因治疗的研究提供了新的手段。     

一种测定艰难梭菌荚膜多糖分子量的简便方法

本文采用两种规格的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ凝胶层析柱,测定了艰难梭菌荚膜多糖的分子量,并建立了一种较为简便、敏感的测定方法,对进一步研究英膜多糖的生物学特性提供了有利条件。     

稀土对肌质网Ca~（2＋）－ATP酶活性的影响

研究了镧、轧、镱及四种配合物对Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活性的影响．结果表明,低浓度的Ｌａ~（３＋）,Ｇｄ~（３＋）和Ｙｂ~（３＋）对肌质网Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶有激活作用;随着其浓度的增加,它们对酶活性的抑制程度增大;而Ｌａ~（３＋）,Ｇｄ~（３＋）和Ｙｂ~（３＋）对纯化的Ｃａ２~（＋）－ＡＴＰ酶则只有抑制作用;Ｇｄ─Ｎ─乙酰─缬氨酸和Ｙｂ─丙氨酰代丙氨酸配合物对肌质网膜和纯化的Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活性的影响与Ｇｄ~（３＋）及Ｙｂ~（３＋）类似,但其激活程度和抑制程度比Ｇｄ~（３＋）及Ｙｂ~（３＋）小;Ｇｄ─ＤＴＰＡ和Ｙｂ－ＤＴＰＡ对Ｃａ２~（＋）－ＡＴＰ酶活性基本无影响。     

淀粉污水处理工程的设计和运行

淀粉污水采用厌氧－接触氧化－气浮综合处理,在水温２０℃、ＣＯＤ为９１６７ｍｇ／Ｌ条件下,厌氧段的容积负荷为９．２ｋｇＣＯＤ／ｍ＾３·ｄ,ＣＯＤ去除率为８４．７％好氧段的容积负荷为１．９ｋｇＣＯＤ／ｍ＾３·ｄ,ＣＯＤ的去除率为６４．１％,ＣＯＤ总去除率为９４．６％、ＢＯＤ的总去除率为９７％。工程总投资约为３００万元,日处理浓污水４００ｍ＾３,污水处理费为１．０￣１．２元／ｍ＾３。     

鸡胚骨骼肌组织M-CAT结合因子的初步鉴定

采用偶联ＣＡＴＴＧＣＴ寡核苷酸的ＤＮＡ亲和层析柱从发育１３ｄ鸡胚骨骼肌核抽提物中分离到两种核蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明,被ＤＮＡ亲和柱滞留的两种核蛋白分子量分别为３０ｋＤ和３２ｋＤ．凝胶阻滞结合竞争分析显示,纯化的核蛋白可与Ｍ－ＣＡＴ共有序列ＣＡＴＴＣＣＴ特异结合．Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术确定仅３０ｋＤ分子可直接识别、结合ＣＡＴＴＣＣＴ元件,但３２ｋＤ分子却不能．结果提示,３０ｋＤ分子为依赖ＤＮＡ的Ｍ－ＣＡＴ结合因子,３２ｋＤ分子属性有待进一步研究证实     

丙型肝炎病毒E2基因DNA免疫实验动物研究

将编码丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２蛋白４１７～７５０位氨基酸的ＤＮＡ片段　克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ　３．１（－）中的ＣＭＶ　ＩＥ启动子下游,构建成ＨＣＶ　Ｅ２重组真核表达质粒　ｐｃＥ２。ＥＬＩＳＡ法检测ｐｃＥ２　ＤＮＡ免疫兔血清中的Ｅ２抗体变化和维持规律,结果显示免疫２０ｄ已有　抗体产生,３０ｄ后开始进入高峰,４０ｄ时达到最高值,至第９０ｄ抗体水平保持平稳,抗体滴度　达到１∶１６００左右。流式细胞计数仪（ＦＡＣＳ）检测ｐｃＥ２　ＤＮＡ免疫鼠ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞变　化情况,与注射空载体ｐＣＤＮＡ３．１（－）的阴性鼠相比,ＣＤ４＋淋巴细胞水平略有上升,ＣＤ８＋　细胞水平有较大升高,增幅达３５．４６％。免疫组化检测结果显示注射ｐｃＥ２的小鼠组织中有明显　的阳性着色,而注射ｐｃＤＮＡ３．１（－）的对照组小鼠免疫组化结果为阴性。以上结果表明：ｐｃＥ２　在实验动物内表达出的ＨＣＶ　Ｅ２蛋白可以引起免疫动物的体液免疫应答和细胞免疫应答,尤其　是ＭＨＣ－１限制性杀伤性ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞水平的提高对清除　病毒是十分有利的,因此ＨＣＶ　Ｅ２　ＤＮＡ免疫有可能成为预防和治疗ＨＣＶ感染的一条新途径。     

外周炎性刺激条件下大鼠脊髓背角PPE mRNA及L-ENK样品和μ阿片受体样阳性结构的变化

以鹿角菜胶（ＣＡＲ）注射到大鼠一侧后爪的足底皮下作为伤害性刺激模型,分别于ＣＡＲ刺激后６、１２ｈ和１、３ｄ处死动物,对照组动物仅将盐水注入一侧后爪足底皮下,用原位杂交法和免疫组织化学法观察前原脑啡肽（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ阳性神经元、亮氨酸脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）和μ阿片受体（ＭＯＲ）样阳性结构在大鼠脊髓背角（ＳＤＨ）的分布和变化。对照组大鼠ＳＤＨ内可见到大量ＰＰＥｍＲＮＡ阳性神经元,这些阳性神经元主要分布于Ⅰ、Ⅱ层和Ⅴ、Ⅵ层,ＣＡＲ刺激后６ｈ,刺激侧ＳＤＨ中ＰＰＥｍＲＮＡ阳性神经元的数量明显增多,１２ｈ和１ｄ达到最高水平,３ｄ时略有下降,但仍高于正常水平。Ｌ－ＥＮＫ样阳性纤维和终末主要分布于正常大鼠ＳＤＨ的Ⅰ、Ⅱ层,ＣＡＲ刺激后１ｄ,Ｌ－ＥＮＫ样阳性结构在刺激侧ＳＤＨ中的密度略有升高,３ｄ后下降直至低于正常水平。ＭＯＲ阳性胞体和纤维主要分布于ＳＤＨ的Ⅱ层,ＣＡＲ刺激后１ｄ,刺激侧Ⅱ层中ＭＯＲ阳性结构明显增加,并持续到刺激后３ｄ。上述结果提示阿片类物质在伤害性信息调控中具有重要作用。     

STRUCTURE OF THE CAPSULAR AND EXTRACELLULAR POLYSACCHARIDES PRODUCED BY THE DESMID SPONDYLOSIUM PANDURIFORME (CHLOROPHYTA)1

The filamentous desmid Spondylosium panduriforme (Heimerl) Teiling var. panduriforme f. limneticum (West & West) Teiling (Desmidiaceae), strain 072CH-UFCAR, is surrounded by a well-defined, mucilaginous capsule consisting of a capsular polysaccharide (CPS). This microalga also produces an extracellular polysaccharide (EPS), which can be isolated from the culture medium. Analysis of the carbohydrate composition of the two polymers by gas chromatography showed that they were different. Both were composed, of galactose, fucose, xylose, arabinose, rhamnose, and glucose but in different amounts. For example, glucuronic acid accounts for 24% of the EPS material but only traces were found in the CPS. Significant differences were also found during methylation analysis. Fucose appeared to have a higher degree of branching in the EPS than in the CPS. These branches were located on C-3 and could be the position for the attachment of the glucuronic acid units in the EPS. The glucuronic acid was present as 1→4-linked and terminal units. A possible explanation for the formation of the EPS is suggested.     

光强和氮源对念珠藻胞外多糖分泌的影响

胞外多糖（EPS）是结皮蓝藻形成生物结皮的胶结剂,为了理解常球状存在的丝状蓝藻Nostoc胶结沙粒的机理,探讨了光强40、80 E/（m2s）和氮源（气态氮,硝态氮）对结皮优势种Nostoc sp.分泌EPS（包括荚膜多糖CPS和释放多糖RPS）的影响规律及其内在机理。结果发现:Nostoc sp.在气态氮和硝态氮下都有相似的快速生长,但其分泌的RPS、CPS及EPS量,在硝态氮下均随光强的增加而增加,在气态氮下却与光强没有关系。相关代谢研究发现,在硝态氮下细胞内有更高含量的可溶性糖和蔗糖。进一步的相关分析发现,在两种氮源下,蔗糖量与RPS量或CPS量间的显著正相关都只发生在80 E/（m2s）下,在气态氮中,两光强下的胞内总糖量都与CPS量显著负相关。以上结果说明,Nostoc sp.在氮源利用和光强适应方面都有明显优势,它即使在快速生长的对数期,也可同时分泌相当量的EPS,这使其在球状藻殖段形成之前胶结沙粒成为可能。由此可推知,Nostoc sp.在贫瘠沙土表面的最初生长过程中,其胞外的EPS均来自胞内的固碳产物,在高光强下,蔗糖很可能是其EPS合成的原料。       

铜镉联合胁迫处理对鲫体内重金属和组织病理的影响

采用半静态铜镉联合胁迫处理鲫(Carassius auratus), 研究铜和镉在鱼体各组织的富集以及对各组织的病理损伤。结果表明, 在鲫的肝脏、鳃丝、肠道和肌肉中均可富集铜和镉, 且铜的蓄积比镉显著。在鲫各组织中镉含量随着铜、镉浓度的增加逐渐增加, 而铜含量则呈下降趋势, 可能是镉抑制了机体对铜的吸收。在0.15 mg/L铜联合0.20 mg/L镉处理鲫14d后, 其肌肉中镉含量为0.13 mg/kg, 超出了行业标准的阈值(0.10 mg/kg)。在铜镉联合处理鲫后, 其肝组织出现血细胞聚集、脂沉积、细胞空化等症状; 鳃丝组织上皮增生、水肿和黏膜肿胀; 在肠组织中杯状细胞肿胀、柱状细胞增生、固有层出现液泡、肠黏膜糜烂、肠绒毛脱落坏死; 在肌组织中肌纤维断裂、聚集、崩溃、溶解, 同时肌纤维间隙增大。研究结果表明, 铜和镉不仅能在鲫体内富集, 而且能够对鲫各组织产生病理损伤, 且浓度越高、损伤越严重, 这主要是由于鲫体内镉浓度的升高所导致。研究可为重金属污染对鲫生长状况和食用安全性的影响分析提供数据支撑。     

镉、汞暴露在中华绒螯蟹卵巢中的富集及其氧化应激反应

研究以中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)为实验对象, 用不同浓度的Cd2+ 溶液(0、0.63、1.26、2.52、5.04和10.07 mg/L)或Hg2+ 溶液(0、0.06、0.11、0.23、0.46和0.91 mg/L)对其分别进行染毒, 6d后解剖取其卵巢, 检测卵巢中Cd和Hg的富集量以及氧化应激相关指标的变化情况。结果显示, 随着Cd2+或Hg2+染毒浓度的升高, 卵巢中Cd和Hg的富集量显著增加; H₂O₂、MDA和NO含量、MT mRNA表达量及NOS活性均随着Cd2+和Hg2+浓度的增加出现上升的趋势, 但SOD、CAT和GPx活性呈先升后降的趋势。这说明镉、汞均可引起卵巢组织产生过量的自由基和脂质过氧化, 并诱导氧化应激酶及MT mRNA的表达以抵抗不良的环境。总之, MT对中华绒螯蟹卵巢中重金属的解毒发挥着重要作用, 抗氧化酶能有效地消除活性氧自由基(ROS), 维持机体的氧化还原处于平衡状态, 共同保护膜脂免受氧化损伤。     

铁对小麦吸收不同形态镉的影响

采用营养液培养方法,研究了在供铁与铁与缺铁条件下小麦对不同镉化合物和镉污染土壤中镉的吸收和转移,同时不他陪伴阴离子对小麦吸收镉的影响。结果表明：缺铁培养小麦植株地上部及根中的含镉量均显著高于下沉供铁培养的小麦,小麦对小同化合物的吸收量不同,其吸收的多寡顺序依次为：Ｃｄ（ＮＯ３）２〉ＣｄＳＯ４〉ＣｄＯ。     

PHYLOGENETIC IMPLICATIONS OF THE CAD COMPLEX FROM THE PRIMITIVE RED ALGA CYANIDIOSCHYZON MEROLAE (CYANIDIALES,RHODOPHYTA)1

The de novo pyrimidine biosynthetic pathway consists of six enzymes: carbamoyl‐phosphate synthetase II (CPS II), aspartate carbamoyltransferase (ACT), dihydroorotase (DHO), dihydroorotate dehydrogenase, orotate phosphoribosyltransferase, and orotidine‐5′‐monophosphate decarboxylase. The origin and organization of the first three enzymes differ markedly between Opisthokonta (Metazoa and Fungi) and the Amoebozoa and green plants. However, no information has been available regarding the characteristics of such genes in other photosynthetic eukaryotes. In this study, we examined the pyrimidine biosynthetic cluster in the primitive red alga Cyanidioschyzon merolae P. DeLuca et al. isolate 10D. Unlike the situation in green plants, the CPS II, ACT, and DHO of C. merolae were fused to form a single open reading frame (the CAD complex), as in the Opisthokonta and Amoebozoa. Phylogenetic analysis of the CPS domain sequences suggested that this red algal CAD complex did not result from a recent lateral gene transfer from Metazoa or Fungi but that the fusion of the three genes occurred before the divergence of Opisthokonta, Amoebozoa, and the red algae. These results cast doubt on the recent hypothesis that the Opisthokonta and Amoebozoa form a monophyletic group, based on the presence in both of the CAD complex.     

镉对大型溞摄食能力和相关生理指标的影响

为了探究镉处理对大型溞(Daphnia magna)摄食能力的影响及其机制, 实验设置了3个镉浓度组(0.01、0.05和0.09 mg/L)、1个空白对照和2个处理时间(24h、48h), 研究镉处理对大型溞摄食率与滤水率、体内镉的蓄积量、总抗氧化能力(T-AOC)和脂质过氧化水平(MDA含量)以及乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响。结果显示, 摄食率和滤水率均随着镉处理浓度的增加而逐渐降低, 当镉浓度为0.09 mg/L, 处理48h时, 摄食率和滤水率均显著或极显著低于对照组(P<0.05,P<0.01), 且摄食率与对照组相比降低了43.89%; 镉在大型溞体内的积累量随镉处理浓度的增加而逐渐升高; T-AOC和MDA含量随着镉浓度的增加而增高, 镉浓度0.09 mg/L时, T-AOC和MDA含量与对照组相比有显著性差异(P<0.05), 且T-AOC与摄食率之间呈负相关性, 相关系数R2分别为0.9521、0.9389; AChE活性随着镉浓度的增加而降低, 镉浓度为0.05、0.09 mg/L时AChE活性显著低于对照组(P<0.05)。这表明镉在体内的蓄积不仅造成了大型溞的氧化损伤, 而且引起了神经系统传导功能的异常, 导致了大型溞摄食能力受到抑制。     

秋茄对镉的吸收、积累及净化作用的研究

采用砂培研究红树植物秋茄幼苗在含镉0.0025—25ppm海水培养液中对镉的吸收积累、净化作用以及镉对秋茄的毒害作用。试验结果表明：秋茄植物体镉含量大小顺序为：根>胚轴>茎>叶．各器官镉含量(y)随培养液镉浓度(x)的增加而增加,两者呈显著的双对数线性正相关,根与培养液镉含量的回归方程为;logy=1.8039+0.4311logx。在含镉培养液中培养4个星期,不同器官对镉的富集作用明显,镉处理2.5ppb,叶、茎、胚轴、根的富集系数分别为62.4、113.6、187.2、705.2．吸收的镉主要积累于根部。25ppm镉处理组每株幼苗(干重6.18g)吸收镉量为239.47μg,其中根占植物体总镉量的75.6%．在所有浓度处理中,秋茄植物体对镉的吸收量为培养液总加镉量的2.4—36%。2.5ppm镉处理组10个星期内,根部镉积累量为538.74μg／g,未见明显受害,表明秋茄对镉的吸收积累能力和耐性都较强。幼苗受镉的毒害程度主要与根部镉含量有关。从天然条件生长的红树植物器官镉积累量来看,也表明秋茄群落对镉污染的吸收净化效果显著。     

Cd2+对紫球藻生长及光化学活性的影响

以紫球藻(Porphyridium purpureum)为供试材料, 研究了5个不同浓度的Cd2+对紫球藻的细胞密度、叶绿素a含量、藻红蛋白含量及ATP含量的影响, 以及对紫球藻的最大光量子产额(F_v/F_m)、实际光量子产额(YII)、相对电子传递效率(ETR)及非光化学淬灭(NPQ)的影响, 探讨了各荧光参数在不同浓度的Cd2+胁迫下的变化规律。研究结果表明, 在Cd2+胁迫的6d内, 紫球藻的生长速度显著下降, 且Cd2+的浓度越高, 生长速度下降越快; Cd2+胁迫显著的减少叶绿素a、藻红蛋白及ATP含量, 且浓度越高, 减少的幅度越大; 在Cd2+浓度低于200 μmol/L时, 紫球藻的叶绿素荧光参数F_v/F_m、YII及ETR呈现先下降后上升的趋势,而且随着胁迫时间的延长, 下降幅度逐步增大; NPQ在低浓度下(<200 μmol/L)呈现显著上升趋势, 高浓度下(>500 μmol/L)呈现显著下降趋势。因此, 水体中浓度超过50 μmol/L的Cd2+就会显著影响紫球藻的生长及光化学活性, 水生环境中不断累积的Cd2+将会对紫球藻的生态平衡产生影响。