蝴蝶兰合子和胚的分离

该文用酶解一振荡法分离蝴蝶兰受精后的胚囊,然后显微解剖出合子、早期原胚及接近成熟的球形原胚。酶解液由O．7％-1．3％的纤维素酶、0．6％-1．0％果胶酶和10％甘露醇组成,pH5．8,酶解时间20-30min。分离的蝴蝶兰早期原胚和接近成熟的球形原胚均发现有发达的胚柄吸器。     

五唇兰精细胞的分离

五唇兰(Doritis pulcherrima)具二胞花粉,授粉后1 d即有花粉开始萌发,授粉后5 d开始有生殖细胞完成有丝分裂形成一对精细胞。通过人工授粉使花粉管在子房内发育,再利用花粉管直接爆破,成功分离出五唇兰的精细胞。成对的2个精细胞在直径大小、荧光强弱上均显示出较大差异,预示2个精细胞具有不同的前途。     

莴苣卵细胞、合子与原胚细胞中钙的分布

用焦锑酸盐沉淀法对莴苣开花前后的卵细胞、合子与原胚细胞中的钙颗粒分布变化进行了观察。结果表明,开花前三天,刚形成的卵细胞内钙颗粒很少,开花前二天的卵细胞内钙颗粒开始增多,开花前一天的卵细胞形成了大液泡,建立了极性,细胞内的钙颗粒又减少。开花后、受精前的卵细胞的钙颗粒主要聚集在细胞核中。受精后合子中的钙颗粒又明显增多,在核质中分布一些较大的钙颗粒,在珠孔端大液泡中聚集了较多的絮状钙。二胞原胚中的钙颗粒又开始减少,多胞原胚细胞中的钙进一步减少,但原胚表面分布一层丰富的钙颗粒。探讨了钙在卵细胞分化成熟、受精以及原胚发育初期中的作用。     

五唇兰种子离体培养的研究

授粉90d的五唇兰种子95%具球形胚,无菌条件下播种于培养基3个月后种子最高萌发率达到 90%。ABA和高浓度的NH4NO3抑制种子的萌发。NAA和BA促进种子的萌发,最适浓度为BA0.2mg· L 1+NAA0.5mg·L 1。400mg·L 1的谷氨酰胺可促进原球茎生长。2000mg·L 1的蛋白胨促进原球茎发 育成苗。     

烟草合子与二胞原胚在离体培养中的发育

用酶解-研磨法分离烟草与大叶烟草受精后的胚囊,继之以显微解剖分离合子与二胞原胚。将3—5个合子或二胞原胚置于微室的琼脂糖小滴中,以预先培养3—4天、分裂1—2次的烟草、大叶烟草或黄花烟草叶肉原生质体饲养。培养基为KM8p与其它附加成分。在25℃与黑暗下静置培养。培养3—4天,约60%合子完成第一次分裂。多数行不等分裂产生大小两个细胞。12天后形成少数原胚或多细胞团。二胞原胚培养亦分裂为多细胞原胚。研究了合子分离方法、合子发育时期、饲养细胞种类与培养天数等因素对合子离体发育的影响。     

五唇兰生物学特性及试管繁殖的研究

五唇兰为我国自有的亚热带附生兰,数量稀少,甚为罕见。本文叙述了它的生物学特性,野生幼苗驯化栽培和组织培养。五唇兰的组织培养国内外未见报道,五唇兰组织培养的成功有助我国稀有兰种资源的开发利用。     

野生五唇兰菌根显微结构观察

兰科菌根菌对兰花种子萌发和原球茎生长起了重要作用,在成年阶段也扮演着重要角色(即使该兰花含有叶绿素)。为了解东南亚特有种五唇兰的菌根形态和菌根真菌的动态侵染过程,对不同生境下两种变异类型叶背绿色和叶背紫色的成年植株菌根分三个时间段采样并进行显微观察。结果表明,成年的五唇兰植株与菌根真菌有着密切关系,菌丝的侵染、定殖和消解程度随着生长发育变化而变化;在营养生长阶段和生殖生长阶段都发现菌丝结,这两个阶段的菌丝特征有所不同;而在休眠阶段的菌根中观察不到菌丝结;不同生境和不同变异类型的菌根结构无明显区别。研究结果为附生兰、地生兰和腐生兰的菌根结构的比较提供了参考。     

五唇兰雌配子体发育和胚胎发生的研究

五唇兰的胚珠倒生型,具薄珠心,两层珠被。胚囊发育为双孢子葱型,成熟胚囊８核。从传粉到受精约５０ｄ,正常双受精。胚具５－６细胞的胚柄,种子成熟时胚柄及胚乳核消失,成熟种子只具单层细胞的种皮和一个未分化的珠珠形胚。     

五唇兰珠被细胞的超微结构观察

应用透射电镜对五唇兰(Doritis pulcherrima)珠被细胞进行超微结构观察。结果表明,授粉38d后,五唇兰外珠被细胞尚保持完好,而内珠被细胞开始退化;线粒体内嵴减少或消失,内质网上的核糖体数量减少,液泡增加,在新形成的液泡内含有膜状结构和模糊的细胞器,但核膜完整,与细胞程序死亡的部分特征相似。     

五唇兰未受精胚珠离体培养及雌配子体发育的研究

五唇兰(Doritispulcherrima Lindl.)的胚珠属于倒生型,具薄珠心,两层珠被.胚囊发育类型为双孢子葱型,授粉后约45 d形成七细胞八核的成熟胚囊.五唇兰未受精胚珠在离体培养初期对外源激素的依赖性很小,在没有外源激素的培养基上,大孢子母细胞也能经过减数分裂发育为二核胚囊.在培养后期,外源激素对胚囊发育的影响很大.在培养基无外源激素或仅含生长素或细胞分裂素时,雌配子体的发生过程不能顺利完成;在改良VW培养基上添加0.5 mg/L BA和0.1 mg/LNAA时,形成成熟胚囊.     

五唇兰未受精胚珠离体培养及雌配子体发育的研究

五唇兰(DoritispulcherrimaLindl.)的胚珠属于倒生型,具薄珠心,两层珠被。胚囊发育类型为双孢子葱型,授粉后约45d形成七细胞八核的成熟胚囊。五唇兰未受精胚珠在离体培养初期对外源激素的依赖性很小,在没有外源激素的培养基上,大孢子母细胞也能经过减数分裂发育为二核胚囊。在培养后期,外源激素对胚囊发育的影响很大。在培养基无外源激素或仅含生长素或细胞分裂素时,雌配子体的发生过程不能顺利完成;在改良VW培养基上添加0.5mg/LBA和0.1mg/LNAA时,形成成熟胚囊。     

电激转化GFP基因在小麦合子和早期原胚中的高频表达

用电激法将GFP基因成功转入分离的小麦（Triticum aestivumL.)合子及早期原胚中。在电场强度150V/cm,电容25μF。线性DNA浓度200μg/mL,电激缓冲液pH7.2的条件下,得到GFP基因在早期原胚中的高频瞬间表达（46.7%)。与开花后5d胚胎的最适电场强度相比,合子和早期原胚因较幼嫩而最适电场强度较低。电激后的一些早期原胚可以在KM8p培养基中培养并继续分裂,分裂后的细胞中也能观察到GFP基因的表达。此外,电激后的合子及2细胞。4细胞和8细胞原胚中没有看到基因表达的嵌合现象。     

五唇兰大孢子发生的超微结构观察

五唇兰(Doritis pulcherrima Lind l．)大孢子母细胞在减数分裂前呈长圆形,细胞核偏向珠孔端,细胞呈现极性分化。大孢子母细胞第一次减数分裂形成二分体。随后,二分体珠孔端的一个细胞退化,合点端的一个细胞体积增大成为功能大孢子。功能大孢子进行第二次减数分裂,形成二核胚囊。这一过程属于双孢子葱型胚囊的大孢子发生类型。珠孔端的二分体细胞(大孢子)在退化过程中质膜保持完好,液泡数量增多,染色质高度凝集,具有细胞程序死亡的部分特征。功能大孢子的细胞器和染色质分布均匀。功能大孢子合点端的细胞壁上有发达的胞间连丝,二核胚囊期胞间连丝消失。在功能大孢子靠近合点端一侧有吞噬结构,其内含有结构模糊的细胞器     

五唇兰胚胎发生与几种同工酶变化的相关性研究

用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法研究了五唇兰（Phaius tankervilliae Lindl.）授粉后合子形成过程中同工酶的变化情况。结果发现,有些位点在这一发育过程中始终表达,如Est-2、Est-4、AAT-3;球形胚形成时,Est-1、Est-3消失;Pgi-3只在合子形成时出现。同工酶位点的变化说明五唇兰受精后合子的形成是相关基因时序性表达的结果。     

电激转化GFP基因在小麦合子和早期原胚中的高频表达

用电激法将GFP基因成功转入分离的小麦(Triticum aestivum L.)合子及早期原胚中.在电场强度150 V/cm、电容25 μF、线性DNA浓度200 μg/mL、电激缓冲液pH 7.2的条件下,得到GFP基因在早期原胚中的高频瞬间表达(46.7%).与开花后5 d胚胎的最适电场强度相比,合子和早期原胚因较幼嫩而最适电场强度较低.电激后的一些早期原胚可以在KM8p培养基中培养并继续分裂,分裂后的细胞中也能观察到GFP基因的表达.此外,电激后的合子及2细胞、4细胞和8细胞原胚中没有看到基因表达的嵌合现象.     

蓝猪耳卵细胞和合子的分离

蓝猪耳(Torenia fournieri)胚囊部分裸露出胚珠,在光学显微镜下能清楚观察到卵细胞和助细胞的形态结构.用解剖和酶解-解剖两种方法都能分离出生活卵细胞.用前种方法机械分离出的卵细胞数量较少(5%),但避免了酶对配子识别研究的干扰.在后种方法中加入0.1%纤维素酶和0.1%果胶酶既能使分离更加容易操作,又对卵细胞没有致命伤害,能在短时间内分离出较多的卵细胞(18%).用酶解-解剖方法也可分离出授粉14 h后的合子细胞.