基质金属蛋白酶-2,-9及其组织抑制因子在恒河猴黄体中的表达

基质金属蛋白酶-2,-9及其组织抑制因子在恒河猴黄体中的表达@李庆雷$中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国北京100080哈尔滨医科大学生殖内分泌研究室　中国哈尔滨150086 @王红梅$中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国北京100080 @邵龙江$中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国北京100080 @于晓光$哈尔滨医科大学生殖内分泌研究室!　中国哈尔滨150086 @倪江$哈尔滨医科大学生殖内分泌研究室!　中国哈尔滨150086 @祝诚$中国科学院动物研究所计划生育…     

恒河猴细菌感染性子宫出血模型内膜组织基质金属蛋白酶1、9及其抑制剂的表达

目的　探讨基质金属蛋白酶 1、9在炎性子宫出血中的作用。方法　运用免疫组化链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶染色法 (SP)检测细菌感染性子宫出血恒河猴模型组子宫内膜组织中基质金属蛋白酶 1、9(MMP 1、MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)的表达 ,用正常恒河猴子宫内膜作对照。结果　模型组子宫内膜组织间质、腺上皮中MMP 1、9的表达明显高于正常对照组 ,而TIMP 1的表达与正常组水平相似。结论　基质金属蛋白酶 1、9的高度表达可能与炎症导致的异常子宫出血有关。     

基质金属蛋白酶-2、-9及其组织抑制因子(TIMPs)在动情周期大鼠子宫中的表达(英文)

基质金属蛋白酶（ＭＭＰｓ）家族的作用是降解所有细胞外基质,其活性受其特异性组织抑制因子（ＴＩＭＰｓ）的抑制。细胞外基质成分的降解与重组在动物生殖生长过程中起重要作用,其变化可以通过ＭＭＰｓ和ＴＩＭＰｓ两者表达水平的变化进行监测。大鼠虽然没有月经形成,但是在其子宫内膜也出现类似灵长类的生殖生物学变化。本文从ＭＭＰｓ和ＴＩＭＰｓ两者的表达水平,对大鼠子宫内膜的这些变化进行了研究。于大鼠动情周期的不同时期,将其处死、取子宫制备酶粗提液和组织切片,采用酶谱法（ｚｙｍｏｙｒａｎｈｎ）和原位杂交方法研究动情周期大鼠子宫中ＭＭＰ－２和－９的活性变化以及ＭＭＰ－２、－９和ＴＩＭＰ－１、－２、－３ｍＲＮＡ的表达。并通过光密度扫描方法对酶谱结果进行半定量分析。所用杂交探针见Ｔａｂｌｅ１。酶谱结果显示：在动情周期大鼠子宫中只检测到６７ｋＤａ的ＭＭＰ－２活性,而没有检测到ＭＭＰ－９的活性（Ｆｉｇ．１）。ＭＭＰ－２的活性在动情前期最高,动情期和动情后期次之,间情期最低（Ｆｉｇ．２）。原位杂交结果显示：ＭＭＰ－２、－９、ＴＩＭＰ－１、－２、－３ｍＲＮＡ主要在子宫内膜基底部的基质细胞中表达。ＭＭＰ－２和－９ｍＲＮＡ在动情前期、动情期和动     

基质金属蛋白酶3、9在升主动脉瘤中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶3、9(MMP-3、MMP-9)在升主动脉瘤发病机制中的作用.方法将40只幼年Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,制备升主动脉缩窄鼠模型.于术后3-5个月取升主动脉,采用HE染色和免疫组化技术,观察升主动脉形态学变化及MMP-3、MMP-9的蛋白表达.结果升主动脉瘤中MMP-3、MMP-9表达强阳性.结论 MMP-3、MMP-9在升主动脉瘤成因中有可能有重要作用.     

人基质金属蛋白酶-9在酵母Pichia pastoris中的表达

基质金属蛋白酶 - 9( MMP- 9)可促进恶性肿瘤的侵袭、转移 ,并在组织重建、胚胎发育以及伤口愈合等生理过程中发挥重要作用 .为研究这一蛋白的性质 ,并以之为靶标筛选抗肿瘤转移药物 ,在酵母 Pichia pastoris中实现了重组人 MMP- 9蛋白的高效、高活性、分泌表达 .首先用 PCR扩增了 MMP- 9基因编码区 (不含信号肽序列 ) ,经测序证实后 ,将其插入 p PIC9质粒中 ,构建表达载体 .用 Li C1 - PEG法转化酵母后 ,采用明胶 -酶谱法筛选获得 5株高效分泌表达 MMP- 9的克隆 ,经PCR证实 MMP- 9基因整合在阳性克隆的染色体中 .重组蛋白分子量为 93k D,表达量为 1 0 mg/L.重组蛋白可水解明胶及 型胶原 ,并可经有机汞 APMA诱导发生自剪切 ,转换成 85k D的激活形式 ,表明重组蛋白具有与天然人 MMP- 9蛋白相似的底物水解活性和自剪切激活特性 .     

MMP-2、-9、-14及TIMP-1、-2、-3在妊娠早期恒河猴子宫内膜和胎盘中的表达定位

MMP-2、-9、-14及TIMP-1、-2、-3在妊娠早期恒河猴子宫内膜和胎盘中的表达定位@王红梅$中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国 北京100080 @李庆雷$中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国 北京100080 @邵龙江$中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国 北京100080 @祝诚$中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国 北京100080     

基质金属蛋白酶-2,-9在子宫腺肌病的表达

目的　探讨基质金属蛋白酶 2 , 9(MMP 2 , 9)在子宫腺肌病的表达及与发病机制的关系。方法　采用免疫组织化学SP法对 2 8例子宫腺肌病 (疾病组 )异位及原位内膜 ,35例子宫肌瘤 (对照组 )原位内膜中MMP 2 , 9的表达进行测定 ,应用图像分析系统分析MMP 2 , 9平均光密度值。结果　MMP 2 , 9于两组原位内膜中表达均呈月经周期依赖性 ,分泌期的表达强度高于增生期 (P <0 0 5 ) ;于疾病组异位内膜中表达无周期性显著差异 (P >0 0 5 )。疾病组内增生期异位内膜MMP 2 , 9的表达强度高于原位内膜 (P <0 0 5 )。疾病组整个月经周期中 ,MMP 2 , 9于原位及异位内膜的表达皆持续明显高于对照组 (P <0 0 5 )。结论　研究显示子宫腺肌病原位和异位内膜MMP 2 , 9的过度表达可能与其发病机制有关     

基质金属蛋白酶2、9和血管内皮生长因子在碱烧伤小鼠角膜组织中的表达

采取滤纸片放置法,用1mol／L的NaOH在小鼠角膜中央进行碱烧伤,建立动物模型。取烧伤前和烧伤后的小鼠角膜制备组织切片,用抗MMP2、抗MMP9和抗VEGF的抗体分别进行免疫组化染色,检测它们在碱烧伤前后的小鼠角膜组织中的蛋白表达情况;提取碱烧伤前和碱烧伤后不同时间点的小鼠角膜组织的总RNA并进行逆转录,以获得的逆转录产物作为模板,用特异的引物和探针进行实时定量PCR,分别检测MMP2、MMP9和VEGF在碱烧伤前后的小鼠角膜组织中转录水平的变化;提取碱烧伤前后小鼠角膜的蛋白组分,用明胶底物酶谱的方法检测其中MMP2和MMP9的活性变化。结果表明,浸透1mol／L的NaOH的滤纸小片,对小鼠角膜进行碱烧伤可以有效地诱导角膜新生血管形成,烧伤后3-4d就有明显的新生血管形成,至第8、9d左右开始退行。免疫组化结果显示,正常角膜中没有MMP9和VEGF表达,MMP2表达极低;碱烧伤后3种因子的表达均上升。实时定量PCR的结果显示MMP2在碱烧伤后表达升高,第3d达到最高随后下降;MMP9在正常角膜组织中没有表达,碱烧伤后第1d达到最高之后开始下降;VEGF在正常角膜中也没有表达,碱烧伤后第4d达到高峰之后开始下降。以上结果说明碱烧伤后的角膜组织中MMP2、MMP9和VEGF的表达均经历先上升后下降的变化,与角膜愈合及新生血管发育和退化过程相吻合。     

基质金属蛋白酶-9与动脉粥样硬化

基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase 9,MMP-9）是基质金属蛋白酶家族中的一种,通过降解胞外基质．在动脉粥样硬化的血管重构、斑块不稳定所导致的心血管病的发展过程中发挥着重要的作用。     

人基质金属蛋白酶-2的表达、纯化和性质鉴定

PCR方法扩增人基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )不含信号肽的表达序列 ,酶切和测序鉴定正确后 ,构建酵母重组表达质粒pPIC9 MMP 2 ,电击法转化毕赤酵母 (Pichiapastoris)细胞得到阳性克隆 ,甲醇诱导获得含大量基质金属蛋白酶 2的培养上清 ,经SephacrylS 2 0 0纯化后 ,纯度达到电泳纯。明胶酶谱和SDS PAGE分析说明重组MMP 2能够降解明胶和IV型胶原 ,表明重组蛋白具有与天然MMP 2相似的底物特异性。糖基化分析和SDS PAGE表明 ,表达产物的分子量约为 5 0kD ,重组MMP 2的C 末段可能发生了降解。     

金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1,-3)mRNA在小鼠胎盘中的表达

本实验利用原位杂交对小鼠妊娠不同时期胎盘中MMP－2,TIMP－2,－3mRNA的表达进行了研究。结果表明;MMP－2主要在具有很强的侵润能力的海绵滋养层细胞中表达,到妊娠13．5天时,MMP－2的表达明显降低,说明此时的滋养层细胞基本上失去侵润能力。TMIP－1和TMIP－3在滋养层细胞和蜕膜细胞中都有表达,这两种抑制因子的协同表达,一方面能够调控滋养层细胞侵入子宫内膜的深度,另一方面,滋养层细胞自身既表达MMP－2又表达TIMPs,可能对其自身有保护作用,使得MMP的水解功能局限于子宫蜕膜的特定区域。在妊娠10．5天,滋养层巨细胞同时表达TIMP－1,－3mRNA,这可能与其功能的转换是一致的;因为此时小鼠滋养层巨细胞体积最大,且不再增殖,同时其功能屯从侵入型向内分泌型转换。所以,MMPs和TIMPs在小鼠滋养层细胞和子宫蜕膜中的协同表达表明其在着床过程中可能发挥重要作用。     

基质金属蛋白酶-2、-9及其组织抑制因子（TIMPs）在动情周期大鼠子宫中的表达

基质金属蛋白酶（MMPs)家族的作用是降解所有细胞外基质,其活性受其特异性组织抑制因子（TIMPs)的抑制。细胞外基质成分的降解与重组在动物生殖生长过程中起重要作用,其变化可以通过MMPs和TIMPs两者表达水平的变化进行监测。大鼠虽然没有月经形成,但是在其子宫内膜也出现类似灵长类的生殖生物学变化。本文从MMPs和TIMPs两者的表达水平,对大鼠子宫内膜的这些变化进行了研究。于大鼠动情周期的不同时期,将算处死,取子宫制备酶粗提液和组织切片,采用酶谱法(zymography)和原位杂交方法研究动情周期大鼠子宫中MMP-2和-9的活性变化以反MMP-2、-9和TIMP-1、-2、-3mRNA的表达。并通过光密度扫描方法对酶谱结果进行半定量分析。所用杂交探针见Table 1．酶谱结果显示：在动情周期大鼠子宫中只检测到67kDa的MMP-2活性,而没有检测到MMP-9的活性(Fig.1)。MMP-2的活性在动情前期最高,动情期和动情后期次之,同情期最低(Flg．2)。原位杂交结果显示：MMP-2、-9、TIMP-1、-2、-3m RNA主要在子宫内膜基底部的基质细胞中表达。MMP-2和-9 mRNA在动情前期、动情期和动情后期子宫内膜基底部的基质细胞和动情期子宫环行肌层中表达均较强,在间情期表达较弱。MMP-9 mRNA在动情期腔上皮和腺上皮细胞中也有较弱的表达(Fig．3)。TIMP-1 mRNA在动情期和动情后期子宫内膜基底部的基质细胞中以及动情期腔上皮和腺上皮细胞中表选较强,在动情前期和间情期表达较弱(Fig．4)。TIMP-2 mRNA在动情期和间情期子宫内膜基底部的基质细胞中以度在动情期上皮细胞中表达较强,在动情前期和动情后期表逮较弱(Fig.4)。TINP-3 mRNA在动情期子宫内膜基底部的基质细胞中表达最强,在动情后期和间情期次之,动情前期表达最弱。TIMP-3 mRNA在动情期子宫环行肌层中也有较强的表达(Fig.5)。由此可见,MMP-2的活性和MMIP-2的基固表达基本一致,MMP-2和-9及其组织抑制因子TIMPs在时间和空间上的表达也基本一致。提示：MMP-2,-9及TIMP-1、-2、-3共同参与了动情周期大鼠子宫内膜的周期性变化。     

膜型基质金属蛋白酶亚家族和基质金属蛋白酶-2在人恶性造血细胞株中的表达谱及其相关性

为探讨不同恶性血液病中膜型基质金属蛋白酶（memberane-type matrix metalloproteinases, MT-MMPs）和基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）的表达差异,用半定量RT-PCR检测了13株不同谱系恶性造血细胞株中MT-MMPs和MMP-2的mRNA表达差异.明胶酶谱法分析各细胞株MMP-2的酶活,并用流式细胞术检测了MT1-MMP蛋白的表达,用SPSS10.0分析了各基因的表达与细胞来源的相关性和各基因相互间表达的相关性.结果提示,各种MT-MMPs和MMP-2在13株细胞中呈现不同的表达谱,其中MT2、MT4、MT1-MMP和MMP-2表达较广泛,而MT3、MT5、MT6-MMP在检测的细胞株中较少表达.统计分析显示,MT-MMPs和MMP-2的表达与细胞的来源无明显的相关性（P>0.1）,而MT1-MMP和MMP-2的表达有相关性（P<0.05）.同时也发现,MT3-MMP和MT5-MMP的表达有相关性（P<0.05）.MT-MMPs在恶性造血细胞中的表达差异,提示它们在不同类型的血液系统肿瘤发展中发挥各自独特的作用.另外,MT1 MMP和MMP-2,MT3-MMP和MT5-MMP之间表达的相关性提示,它们在功能上密切相关.     

利用骨骼肌细胞高效表达人基质金属蛋白酶-9

为探讨利用培养的骨骼肌细胞表达人基质金属蛋白酶的可行性,利用PCR和DNA重组技术构建人mmp-9-myc-his/pcDNA3基因表达载体,转染成肌细胞QM-7,G418筛选阳性转染子.诱导细胞分化成肌管后,收集细胞培养上清.经Western印迹检测,表达产物分子量为93kD,与蛋白标准品对照推测表达量约10~15mg/L.利用Ni-NTA琼脂糖从1L培养上清中纯化到4~6mgMMP-9纯品,纯化效率约50%.经明胶酶谱检测,表达蛋白可以降解明胶.这些结果表明所表达的MMP-9具有生物活性,为以MMP-9为靶分子的特异拮抗剂和/或药物的筛选、MMP-9定量检测试剂盒的开发以及MMP-9的功能研究奠定了基础;以鹌鹑成肌细胞QM-7作为外源蛋白脊椎动物细胞表达体系具有表达量高、经济等优点,有可能进一步研究开发成为新的外源重组蛋白脊椎动物细胞表达体系.     

MMP-2, -9, -14及其抑制剂TIMP-1, -2, -3在恒河猴周期黄体中的时空表达

用原位杂交和免疫组织化学方法研究了基质金属蛋白酶MMP-2, -9, -14及其组织抑制因子TIMP-1, -2, -3在恒河猴周期黄体发育不同阶段的协同表达. 结果显示: MMP-2 mRNA及其蛋白主要表达在早中期发育黄体的内皮细胞上, 在晚期黄体发生萎缩时则大量表达于黄体细胞; MMP-9, -14及其TIMP-1, -2, -3主要表达于黄体细胞; MMP-14 mRNA在早期和晚期黄体中高表达, MMP-9蛋白只在晚期黄体中高表达; TIMP-3蛋白在早、中、晚三期黄体中表达均较高, 但很明显晚期表达降低. 结果提示: MMP/TIMP系统参与灵长类黄体发育的调控, MMP-2, -14及其TIMP-1, -3可能参与黄体的形成和功能维持, 同时MMP-2, -9, -14及其TIMP-1, -2, -3在黄体萎缩期的协同表达, 提示它们可能在黄体发生萎缩时发挥作用.     

肝细胞生长因子和基质金属蛋白酶-9在过敏性紫癜中表达的意义

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在儿童过敏性紫癜(HSP)中表达的意义,探寻肾脏损害预测的敏感指标。方法:选取HSP与过敏性紫癜肾炎(HSPN)患儿各30例,并选取同期体检的健康儿童30名作为对照组,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测3组血清和尿液中的HGF及血清MMP-9含量,并采用比浊法检测24 h尿蛋白,分析HGF、MMP-9与24 h尿蛋白的相关性。结果:HSP组、HSPN组血清、尿液HGF,血清MMP-9及尿蛋白定量均高于对照组(P0.05);HSPN组中Ⅱ~Ⅳ期患者血清HGF及Ⅰ~Ⅳ期尿液HGF、Ⅲ~Ⅳ期MMP-9及Ⅰ~Ⅳ期尿蛋白定量均高于HSP组(P0.05);血清及尿液HGF与血清MMP-9无明显相关性(r=0.014,0.027,P0.05);血清HGF与尿蛋白定量无明显相关性(r=0.032,P0.05);尿液HGF、血清MMP-9与尿蛋白定量均呈正相关(r=0.412、0.302,P0.05)。结论:尿液HGF、MMP-9均参与HSP、HSPN病情的发展,尿液HGF、MMP-9水平的监测有助于评估HSPN的病情及预后,但HGF与MMP-9之间无明显相关性。     

窖蛋白-1、基质金属蛋白酶-2与乳腺肿瘤的侵袭和转移

窖蛋白(caveolin)是分子量为21～24 kD的整合膜蛋白,是胞膜窖(caveolae)的标志性结构分子,其家族成员窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)参与细胞内许多重要的生命活动.近来研究发现,窖蛋白-1与乳腺上皮细胞转化及乳腺癌的发生密切相关.基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是基质降解代谢的主要酶类,几乎能降解细胞外基质和基底膜的所有成分,其家族成员明胶酶A(MMP-2)在乳腺癌的浸润和转移过程中起重要作用.新近发现,窖蛋白-1与基质金属蛋白酶-2在胞膜窖中共定位,窖蛋白-1通过抑制基质金属蛋白酶-2的激活来抑制乳腺癌的侵袭和转移,起到肿瘤抑制因子的作用.本文对窖蛋白-1与基质金属蛋白酶-2各自在乳腺肿瘤侵袭转移中的作用及两者关系的研究进行综述.     

基质金属蛋白酶-9及其抑制剂mRNA在吸烟大鼠肺组织中的表达

目的 研究吸烟大鼠肺组织和肺泡巨噬细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因的表达,探讨其在细胞外基质重塑中的作用。方法 建立吸烟大鼠模型,随机分为对照组和吸烟1、2、3、4、5及6月组(每组10只),用原位杂交技术检测肺组织和肺泡巨噬细胞MMP-9和TIMP-1 mRNA表达,用免疫组织化学技术观察Ⅳ型胶原在肺内的表达。结果 吸烟组肺组织和肺泡巨噬细胞MMP-9 mRNA的表达逐渐上升,至吸烟6月时均达高峰;而TIMP-1 mRNA的表达渐上升,至吸烟3～4月时达高峰,后逐步下降;肺组织Ⅳ型胶原的表达在吸烟3月时达高峰,然后渐降。结论 MMP-9／TIMP-1的动态平衡在吸烟大鼠肺气肿模型肺组织的细胞外基质重塑中有重要作用。