康氏木霉B—7纤维素酶的产生条件及酶学性质研究

野生型康氏木霉８５４－Ｂ２经多种理化诱变因子及空间微重力辐射等因素的处理,选育到１株高活力纤维素酶变异株Ｂ－７。其固体培养物的纤维素酶,以滤纸为底物酶活力为３４μ／ｇ,以羧甲基纤维素（ＣＭＣ）为底物酶力为１４７２μ／ｇ。与野生菌８５４－Ｂ２相比,产酶活力水平分别提高５倍和７倍多。酶在滤纸上作用的最适条件为ｐＨ４．５－５．０,温度５５－６０℃;２５℃,保温２４ｈ,ｐＨ稳定范围为ｐＨ４．０－６．５;７     

高活力纤维素酶菌株康氏木霉B—7的选育与产酶条件的研究

野生型康氏木霉８５４－Ｂ＿２分别经物理化学诱变因子,ＴＤＰ辐射器和空间微重力辐射等因素的多级处理,得到１株形态发生明显改变的变异株Ｂ—７,其固体培养物的纤维素酶各组分酶活力,如滤纸糖酶活力（ＦＰＡ）为３４ｕ／ｇ,羧甲基纤维素酶活力（ＣＭＣ—ａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ,β－葡萄糖苷酶活力（β－Ｇｌａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ,与８５４－β２相比,分别提高５．９倍,７．６倍和４．２倍。其固体培养的最佳条件是：ｐＨ６．０,２８～３０℃,９６小时,最适培养基成分为：青草粉：麸皮＝７：３,１．５～２．０倍水和（ＮＨ４）２ＳＯ４１．５～２．０％（均以固体料计）。     

黑曲霉原生质体形成与纯化的研究

研究了黑曲霉菌丝原生质体形成的条件,讨论了培菌方式,菌龄,酶系统,酶解温度,酶解时间及渗透压稳定剂对原生质体形成的影响,结果表明,采用１．５％纤维素酶,以ＮａＣｌ为渗透压稳定剂酶解菌丝体,可获得大量原生质体,并对原生质体纯化的两种方式作了比较,同时对原生质体的释放进行了观察。     

几种丝状真菌原生质体的形成与再生

本文报道从黑曲霉、米曲霉、酱油曲霉、康宁木霉、拟青零等工业上有重要用途的7种丝状真菌菌丝制备原生质体,以及对这些真菌原生质再生过程中形态学变化进行观察的结果。实验表明用商品纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶配成的混合酶液,可成功地对上述丝状真菌制备出原生质体。在所有供试菌株中均观察到由原生质体直接长出菌丝,及原生质体先形成酵母状物再长出菌丝这两类再生方式。     

康氏木霉B－7纤维素酶的产生条件及酶学性质研究

野生型康氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｋｏｎｉｎｇｉ）８５４－Ｂ２经多种理化诱变因子及空间微重力辐射等因素的处理,选育到１株高活力纤维素酶变异株Ｂ－７。其固体培养物的纤维素酶,以滤纸为底物酶活力为３４μ／ｇ,以羧甲基纤维素（ＣＭＣ）为底物酶力为１４７２μ／ｇ。与野生菌８５４－Ｂ２相比,产酶活力水平分别提高５倍和７倍多。酶在滤纸上作用的最适条件为ｐＨ４．５—５．０,温度５５—６０°Ｃ;２５°Ｃ,保温２４ｈ,ｐＨ稳定范围为ｐＨ４．０—６．５;７０°Ｃ保温３０分钟,剩余酶活力３４．４％。     

生防木霉菌原生质体的制备及再生研究

ACCC 30150是由本实验室筛选的一株对黄瓜枯萎病、青椒疫病等多种土传病害具有较好防治效果的生防木霉菌.为了建立该生防木霉菌的CaCl2/PEG转化体系,对其原生质体制备及再生条件进行了摸索.结果表明,以0.6 M NaCl作为渗透压稳定剂,用PDA平板上培养36 h的微小菌丝接种液体菌丝培养基,菌龄16 h,用20 mg/ml的纤维素酶和蜗牛酶以1:1的比例混合,按照菌丝重量(g):酶液体积(ml)=1:20的比例,36℃酶解2 h原生质体产量最高.同时,酶解2 h,以CMR1为再生培养基原生质体的再生率最高.     

γ——亚麻酸生产菌深黄被孢霉原生质体的形成和再生

采用２％的溶壁酶加４％的蜗牛酶,从深黄被孢霉的菌丝中获得了大量的原生质体,同时对菌丝的培养时间,渗透压稳定性,酶解系统和酶解温度等因素了进行了系统的观察,从而获得了制备深黄被孢霉原生质体的最适条件,并对该原生质体在高渗培养基上进行了再生实验,其再生率为３２％。     

γ—亚麻酸生产菌深黄被孢霉原生质体的形成和再生

采用2％的溶壁酶加4％的蜗牛酶,从深黄被孢霉的菌丝中获得了大量的原生质体。同时对菌丝的培养时间、渗透压稳定剂、酶解系统和酶解温度等因素进行了系统的观察,从而获得了制备深黄被孢霉原生质体的最适条件。并对该原生质体在高渗培养基上进行了再生实验,其再生率为32％。     

黑曲霉原生质体的形成、分离与再生的研究补*

本文研究了从黑曲霉中获得原生质体的各种条件（例如渗透压稳定剂、温度、菌龄、培养基的成分、 酶索统等）。结果表明,采用0.5lo蜗牛酶和1％ 纤维素酶的混合溶液酶解菌丝体,可获得大最的原生 质体。该原生质体用。．8mol/L N“ 作为渗透压稳定剂在再生培养基上再生率为50 %.     

几种丝状真菌原生质体的形成与再生*

本文报道从黑曲霉、米曲霉、酱油曲霉、康宁木霉、拟青零等工业上有重要用途的7种丝状真菌菌丝制备原生质体,以及对这些真菌原生质再生过程中形态学变化进行观察的结果。实验表明用商品纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶配成的混合酶液,可成功地对上述丝状真菌制备出原生质体。在所有供试菌株中均观察到由原生质体直接长出菌丝,及原生质体先形成酵母状物再长出菌丝这两类再生方式。     

甘蓝型油菜叶柄原生质体培养再生植株

Two cultivars of Brassica napus,Altex and Canadian twins,were used as materials.Protoplasts isolated from petioles of plants grown in vitro were cultured in Nitsch mediumsupplemented with 0.5mg/L BA,0.5mg/L NAA,1mg/L 2,4-D,100mg/L serine,800mg/Lglutamine,4% sucrose and 0.4mol/L mannitol.After 2 days of culture,the first division wasobserved.The division frequency estimated after 10 days of culture was 30—60%.One weekafter transferring onto MS medium containing 6mg/L GA_3 and 3mg/L BA,protoplast-derivedcalli regenerated into shoots.The regeneration frequency of the two cultivars was 24% and31% respectively.It was found that the protoplasts isolated from petioles could float on thesurface of the 3% sucrose contained solution which was very favourable both to purificationand culture of the protoplasts.     

瑞氏木霉表达黑曲霉葡萄糖氧化酶

利用高表达分泌纤维素酶的真菌瑞氏木霉表达重组的黑曲霉葡萄糖氧化酶。在大肠杆菌DH5α中构建瑞氏木霉纤维素酶CBHI启动子和CBHI信号肽基因黑曲霉葡萄糖氧化酶基因瑞氏木霉纤维素酶CBHI终止子构巢曲霉的甘油醛3磷酸脱氢酶启动子大肠杆菌抗潮霉素B磷酸转移酶基因构巢曲霉色氨酸C终止子pUC19(命名为pCBHGOD)质粒,线性化后用瑞氏木霉纤维素酶CBHI启动子和CBHI信号肽基因黑曲霉葡萄糖氧化酶基因瑞氏木霉纤维素酶CBHI终止子构巢曲霉的甘油醛3磷酸脱氢酶启动子大肠杆菌抗潮霉素B磷酸转移酶基因构巢曲霉色氨酸C终止子(命名为CBHGOD)核酸片段转化瑞氏木霉QM9414原生质体。用PCR扩增方法筛选出同源重组葡萄糖氧化酶基因的瑞士木霉突变株。用麦杆诱导瑞氏木霉突变株,生产黑曲霉葡萄糖氧化酶,Westernblot分析重组的葡萄糖氧化酶分子量与Sigma公司的天然黑曲霉葡萄糖氧化酶一致,生产的重组酶活性25umL,相当于Sigma公司葡萄糖氧化酶标准品的产量为0.5gL。瑞氏木霉可用于生产黑曲霉葡萄糖氧化酶。     

新月弯孢霉原生质体制备及再生条件的研究

以从自然界中筛选的新月弯孢霉（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａｌｕｎａｔａ）Ｄ－１为出发菌株,进行原生质体制备及再生条件的研究。将培养至１６ｈ的Ｄ－１菌丝体经ＤＴＴ溶液处理３０ｍｉｎ后,用溶壁酶和纤维素酶的混合酶液于３０℃下酶解４ｈ,原生质体释放量达到６．０×１０^６个／ｍＬ,原生质体再生率为８．３％。     

果香地霉原生质体的释放与再生

本文报道了果香地霉(Geotrichum suaveolens)原生质体释放与再生方法和结果,讨论了影响原生质体释放和再生的几个重要因子用溶壁酶(Lywallzyme)20—25mg/ml处理6—8小时,可获得较高的原生质体得率(5.6—5.9×10~6个/ml),0.8M MgSO_4是理想的稳定剂。对再生过程观察表明,再生具有三种模式,即直接出芽,间接出芽和链式增殖。不同碳源和稳定剂对再生率以及再生模式都有影响。在液体再生培养基中,用纤维二糖作碳源,再生率可达76.3%,在RSDA—甘露醇固体再生培养基中,再生率为8.7%。实验发现,原生质体再生可能存在“邻近效应”,即当一个原生质体再生时,它可活化邻近的原生质体,促其再生,使再生率提高,甚至这种作用还可能影响到再生模式。     

美味猕猴桃子叶愈伤组织的原生质体培养和再生植株

从B_5和NN-69培养基(含1mg/L 2,4-D)上分别选出美味猕猴桃子叶愈伤组织系A_(11)B_2和A_(16)N_1。在B_5原生质体培养基中,A_(11)B_2的原生质体再生细胞形成小细胞团;在NN-69原生质体培养基中,A_(16)N_1的原生质体再生细胞能持续分裂形成愈伤组织。经过分步诱导再生,获得A_(16)N_1原生质体再生植株。     

可乐茄叶肉原生质体培养再生植株

本文报道茄属果树可乐茄（ＳｏｌａｎｕｍｑｕｉｔｏｅｎｓｅＬａｍ．）叶肉原生质体的分离、培养及植株再生。幼嫩叶片原生质体经酶游离、纯化后,以１×１０４个／ｍｌ密度培养于稍加改良Ｋ８ｐ（附加２,４－Ｄ０．５ｍｇＬ（－１）、ＮＡＡ１．０ｍｇＬ（－１）和ＢＡ０．５ｍｇＬ（－１））的培养基中,三天后开始分裂,一周分裂３—４次。一个月形成小细胞团,植板率为０．１—０．２％,小细胞团转培养于ＭＳ＋２,４－Ｄ０．５ｍｇＬ（－１）上增殖后进行分化。原生质体来源愈伤组织在ＩＡＡ（０．１—１．０ｍｇＬ（－１））与ＢＡ或ＺＴ组合的培养基中能诱导器官发生,芽分化率最高可达４２．９％;但ＩＡＡ、ＢＡ、ＺＴ三者一起使用未见任何器官分化。小芽在ＭＳ＋ＩＡＡ０．２ｍｇＬ（－１）中生根成植株。可乐茄叶肉原生质体的植株再生,可应用于育种和茄属植物遗传工程研究。     

从棉花胚性细胞原生质体培养获得植株再生

原生质体培养植株再生是进行体细胞杂交与基因工程操作的重要基础工作。近年来,国内外已有一些关于棉花原生质体分离与培养的研究报告,1986年 Firoozabady 报道从陆地棉(Ghirsutum)叶肉原生质体培养获得2—3个细胞的微克隆,1987年 Ka~-