细胞膜的研究(二)——大白鼠红血球膜的制备

哺乳动物的红血球膜在分离的状态下,一般称为“血影”或“基质”。由于:(1)在哺乳动物的成熟红血球中没有通常真核细胞内所含有的任何细胞器,容易得到纯粹的细胞质膜;(2)可以借助低渗溶血等简便操作除尽细胞内容物获得膜样品;(3)来源方便;因此多年来广泛应用它作为研究细胞膜的材料。     

销售细胞冻结保存液

日本全药工业公司3月10日销售能简便地冻结培养细胞、长期保存的冻结保存液。该公司销售研究支援用试药还是第一次。将来的冷冻保存液冻结时必须使用程序冷冻仪,另外在-80℃冷冻期间细胞逐渐死亡,必需用液氮保存或在1年内融解细胞,经增殖后再次冻结。如果使用,可放在-80℃或-50℃冷冻仪中长期保存,不需要程序冷冻仪和液体氮,没有必要定期融解和重新增殖。日本全药工业公司没有试药的销售过程,所以销售是十慈科学工业公司进行的。这种冷冻保存液是按某种比例配合了氨基酸、无机物、DMSO、血清制成的。分布的数据保存30个     

自制载体冷冻小鼠原核期胚胎效果分析

目的探讨自制冷冻载体冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎的可行性。方法首先,比较了两种流行的商业化载体:开放式拉长麦管(open pulled straw,OPS)和冷冻帽(cryotop)开展小鼠原核胚玻璃化冷冻保存效果。其次,以cryotop为对照,利用自制简易载体(cryotip)开展小鼠原核期胚胎的玻璃化冷冻保存。之后,利用ANOVA对各组胚胎在复苏后的体外培养卵裂率、囊胚率进行统计分析。结果 OPS和cryotop两组之间,胚胎在玻璃化冷冻/复苏后发育的2-细胞率、4-细胞率和囊胚率差异均无显著性(P0.05),但cryotop冷冻效果更接近对照组;cryotip玻璃化冷冻载体与cryotop相比,胚胎复苏后各组差异均无显著性(P0.05),数值上除了2-细胞发育率外,cryotip其他几项结果都稍微高于cryotop组。结论 OPS,cryotop,cryotip冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎均是可行的;cryotop在冷冻效果上要优于OPS,笔者自制的cryotip因其成本低,制作简单,操作安全可靠,在实验中替代昂贵的商业化载体OPS和cryotop是可行的。     

各种酵母菌经超低温冻结和融化后的反应

本文报告用液氮超低温(-196℃)冻结和融化后,对酵母菌的影响。34种酵母菌经慢速(冷却速度为1℃/min)冻结后细胞成活率普遍高于快速(冷却速度为450℃/min)冻结。10%甘油和10%二甲亚砜比水在冻结中呈现出显著的保护作用。冻结保藏4个月后,细胞成活率都在11%以上,最高达97%,平均70.4%,而水,最低者仅0.4%,最高87%,平均46.5%。所观察的白地霉 Geotrichum candidum As 2.361,椭圆酿酒酵母 Saccharomyces cere-visiae var.ellipsoideus AS 2.541,八孢裂殖酵母 Schizosaccharomyces octosporus AS 2.1148,其细胞在冻结过程中的形态,最初质壁分离,继之整个细胞收缩,而融化后则可复元.解脂假丝酵母 Candida lipolytica AS 2.1207和2.1405经冻结48小时以上,融化后的细胞悬液直接接种培养后检测脂肪酶活力;酿酒酵母 Saccharomyces cerevtsiae AS 2.399和椭圆酿酒酵母 As 2.541冻结48小时后乙醇发酵力;异常汉逊酵母 Hansenula auomala AS 2.300和 AS 2.470冻结后形成乙酸乙酯的能力,都无明显的减退,而且以甘油作保护剂的细胞,较未经冻结者呈现出稍强的活力。就代谢产物而言,用气相色谱法分析发酵液,乙醇或乙酸乙酯都是很纯的终产物。嗜渗压的固囊酵母 Citeromyces matritensis AS 2.1401和汉逊德巴利酵母 Debaryomyceshansenii AS 2.45冻结后的细胞耐 NaCl 的能力无改变.冷冻真空干燥法保藏菌种,适合的菌类较广,是久经考验的方法。但是对于酵母菌冻干后细胞成活率平均为8.6%,而超低温冻结24小时细胞成活率平均为86.7%,大了10倍。     

海藻酸微囊替代DMSO和FBS的STO细胞冷冻保存研究

目的:改进现有的细胞冷冻保存方法,建立一个不含二甲基亚砜(DMSO)和血清(FBS)的高效冷冻保存方法,为细胞治疗等临床实践提供优质细胞.方法:海藻酸微囊包埋鼠胚成纤维细胞(STO细胞)后用不含DMSO和FBS的冷冻保存液进行冷冻保存.设四个对照组:添加10％DMSO和20％FBS的组、仅添加10％DMSO的组、仅添加20％FBS、DMSO和FBS均不添加组.在冷冻前后对各实验组细胞用台盼兰染色,进行细胞计数,计算细胞存活率,同时利用溴乙锭的二聚物(EthD)、钙黄绿素-AM(Calcein-AM)进行染色观察细胞的形态,且进一步验证细胞存活率;解冻复苏后用MTT法评估细胞的增殖速度和生长活力.结果:冷冻保存30天后对各组的细胞数量、细胞存活率、细胞形态和解冻复苏后细胞的生长活力进行比较发现,海藻酸微囊包埋冷冻组的细胞数、细胞存活率、细胞形态和生长活力均与添加DMSO和FBS的组之间无显著性差异,而与其它三个对照组呈显著性差异.结论:使用海藻酸微囊替代DMSO和FBS保存STO细胞,能有效的维持细胞形态、数量、存活率,同时不影响细胞的生长活力,从而建立了一个不含DMSO和FBS的高效冷冻保存方法.     

钠钾ATP酶与阳离子主动运输

高等生物能维持体内环境的相对恒定。一般讲,细胞内液钠浓度低,钾浓度高;细胞外液钠浓度高,钾浓度低。如人心肌细胞内钾离子浓度为细胞外液的38倍,而钠离子浓度,外液为内液的36倍。这种离子分布的差异,是由于细胞膜不断将钠输出细胞外,将钾输入细胞内所致。这种逆电化学梯度地运输离子的过程是一耗能过程,通常称为一价阳离子主动运输,或称“钠钾泵”。1957年,Skoul从蟹神经的微粒体组份中     

冷冻致亚致死损伤的金黄色葡萄球菌修复机制

摘要:【目的】研究冷冻致亚致死损伤的金黄色葡萄球菌修复过程中的细胞修复机制。【方法】本文以冷冻致亚致死损伤的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为研究对象,探讨了不同修复时间细胞的修复情况;利用透射电子显微镜观察修复启动过程中超微结构的变化;通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法测定了修复过程中转录弱化子(msrR)、铁离子ABC转运ATP结合蛋白(fhuC)、细胞色素b(cytB)基因表达量的变化,通过紫外分光光度法测定细胞外泄漏物含量、细胞活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶( SOD)活性。【结果】修复3 h后,99%以上冷冻致亚致死损伤的金黄色葡萄球菌完成修复,修复后细胞对高盐胁迫抗性恢复。Real-time PCR分析结果表明,msrR和fhuC基因表达量显著下调,而cytB表达量显著上调。修复过程中冷冻致亚致死损伤的金黄色葡萄球菌细胞表面超微结构变化比较明显,细胞表面从光滑透明变得致密结实,细胞内紫外吸收物质泄漏速度也在逐渐变慢,同时细胞中的ROS含量降低,SOD酶活性减弱。【结论】冷冻致亚致死损伤的金黄色葡萄球菌修复过程中,可能是通过细胞膜完整性的修复,细胞恢复对高盐胁迫的抵抗能力;通过基因调控降低细胞内ROS的含量,降低活性氧(O－2)对细胞的毒害作用。同时通过产能代谢相关基因(cytB)的调控为细胞提供修复所需要的能量,最终冷冻致亚致死损伤的细胞得到修复。     

第二十八期鸡胚原始生殖细胞的冷冻保存

采用Ficoll密度梯度离心 ,提取第 2 8期 (孵化 13 2h)性腺中的PGCs ,对其应用不同的冷冻保护剂和不同的平衡方法进行冷冻保存 ,并于复苏后进行体外培养。复苏后的PGCs用台盼蓝染色检测其存活率 ,结果发现 :从第 2 8期性腺中获取的PGCs在同一种冷冻保护液下 ,采用不同的平衡方法进行冷冻 ,对PGCs的存活率有显著影响 (P <0 .0 5 ) ;平衡方法相同 ,在不同冷冻保护液条件下 ,冷冻保护液III的冻存效果最好 ,与其他保护液之间存在显著 (P <0 .0 5 )或极显著 (P <0 .0 1)差异。冷冻保护液V和冷冻保护液VI二者对PGCs的冻存效果次之。冷冻保护液I、冷冻保护液II和冷冻保护液IV三者对PGCs的冻存效果最差。PGCs经体外培养 2 4小时后再进行冷冻保存 ,复苏后其存活率、体外培养存活时间均极 (P <0 .0 1)显著短于分离后直接冷冻的PGCs。     

眼镜蛇毒直接溶解因子对人肝癌细胞株细胞内游离钙动态变化的影响

用荧光染料FIuo-3标记人肝癌细胞株H_(7402)细胞内游离钙,在粘附式细胞仪观察检测单个细胞内游离钙水平的动态变化,细胞在无钙环境中,直接溶解因子(DLF)刺激下细胞内游离钙迅速升高,达到峰值后下降;在细胞培养皿中加入1mmol/L CaCl_2,DLF使胞浆游离钙持续升高;加入10mmol/L CaCl_2,DLF刺激后胞浆游离钙水平无明显变化,表明DLF能引起胞内Ca~(2 )释放和胞外Ca~(2 )内流,细胞外高浓度Ca~(2 )能阻断DLF升高细胞内Ca~(2 )浓度的 作用。     

小鼠原核胚玻璃化冷冻保存技术的研究

目的　原核胚是转基因等生物技术所必需的主要材料 ,其冷冻保存使操作不受时间和空间的限制。另外 ,冷冻保存还可以避免体外培养过程中的细胞发育阻断期。方法　在室温 (2 0℃或 2 5℃ )条件下 ,以乙二醇、DMSO为主体抗冻保护剂配制成的玻璃化溶液 (EFS、EDT、EDFS) ,不借助冷冻仪 ,对小鼠原核胚进行一步法和二步法玻璃化冷冻保存。结果　 2 0℃室温条件下 ,用EDFS4 0平衡 1min一步法冷冻解冻后的原核胚 ,经培养后囊胚发育率最高仅为 4 7% ,与新鲜原核体外培养的对照组 (75 % )的差异极显著 (P <0 0 1) ;当原核在 10 %E +10 %D溶液中预处理 5min ,移入EDFS30中平衡 30s二步法冷冻保存 ,解冻后的囊胚发育率达 6 8%。而室温升至 2 5℃ ,二步法冷冻保存后原核胚的囊胚发育率高达 77% ,与对照组差异无显著性 (P >0 0 5 )。用最佳冷冻组的原核胚或解冻后培养到囊胚移植给受体母鼠均获得产仔。结论　本研究对小鼠原核胚实施玻璃化冷冻保存 ,经体外培养和移植结果与对照组无显著性差异 ,证明了本方法的可行性     

微流控芯片用于卵母细胞冷冻保存的实验研究

低温保存对卵母细胞造成渗透损伤、毒性损伤和冰晶损伤,使得细胞冻后质量难以提高.本文首次提出将微流控法添加-去除保护剂分别与三种冷冻载体(OPS、QC及Cryotop)搭配使用,对猪卵母细胞进行冷冻保存,并与传统冷冻法进行比较;然后,首次选用透明陶瓷和玻璃制作集成一体化芯片,对猪卵母细胞进行冷冻保存,以冷冻保存后的细胞存活率和发育率为判断依据,筛选出较好的方案;最后,对冻后卵母细胞的早期凋亡情况、胞内活性氧水平和线粒体膜电位水平进行分析.结果表明,微流控添加-去除保护剂组卵母细胞冻后存活率以及卵裂率都显著高于传统冷冻组,可以有效降低卵母细胞的早期凋亡率和胞内活性氧水平,减小线粒体损伤,提高细胞的冻后质量.透明陶瓷一体化芯片保存卵母细胞得到的存活率和卵裂率与传统OPS冷冻的保存结果无显著差异.微流控芯片技术为卵母细胞的低温保存提供新的思路,有较好的应用前景.     

单抗清除瘤细胞后人骨髓的冷冻保存研究

本实验研究了用CD10类单克隆抗体55(McAb55)与兔补体结合的方法清除骨髓中普通型急性淋巴细胞白血病抗原(CALLA)阳性细胞后骨髓的冷冻保存问题。结果表明:①清除处理对人骨髓的粒单系集落培养(GM-CFU-C)无明显影响;②经过冷冻贮存的样品的GM-CFU-C少于未经冻存的样品;③清除瘤细胞后的样品冻存后与未经清除处理的正常骨髓样品冻存后的GM-CFU-C无显著差别;④影响冷冻保存后骨髓GM-CFU-C的重要因素是冷冻速率;⑤在本实验条件下以0.5℃/min速率降温效果最佳,冻后GM-CFU-C无改变,冷冻损伤主要发生于-40℃以前,降温至-40℃或～80℃后再快速降温影响不明显。此研究为用McAb55加兔补体清除骨髓中CALLA阳性细胞后骨髓的冷冻保存提供了依据。     

代谢型谷氨酸受体激动引起星形神经胶质细胞肿胀

用[~3H]-3-氧-甲基-D-葡萄糖摄取的方法测定细胞水含量,观察谷氨酸受体激动剂、拮抗剂对培养的星形神经胶质细胞水含量的影响,并观察细胞内、外钙的作用.结果发现:0.5,1,10 mmol/L的谷氨酸和1mmol/L的trans-ACPD(代谢型谷氨酸受体激动剂)1h均可以引起细胞的水含量增加,1mmol/L的 AMPA(离子型谷氨酸受体激动剂)不影响细胞的水含量,1mmol/L的L-AP3(代谢型谷氨酸受体拮抗剂)可以拮抗1mmol/L谷氨酸和trans-ACPD的作用;撤除细胞外液的钙,谷氨酸不再引起细胞的水含量增加, 20 μmol/ L 的 CdCl₂不能减轻谷氨酸的作用,而300μmol/L的CdCl₂及30μmol/L的胆罗啉(Dantrolene)均可以减轻谷氨酸的作用,提示代谢型谷氨酸受体激动引起星形细胞肿胀,细胞内、外Ca²⁺在谷氨酸引起的星形细胞肿胀中起一定的作用.     

对钙离子几种生理学效应的归纳与探讨

钙是人体重要的元素成分之一,在体内以2种形式存在:结合状态和离子状态(Ca2 )。但只有Ca2 才具有生理活性。体内Ca2 又分为细胞内Ca2 和细胞外Ca2 2种。研究表明,细胞内Ca2 浓度低,仅为细胞外的1(?)。体内的钙主要来源于食物,含钙的食物进入人体     

农业其它

941602利用冷冻保存法长期贮存植物种质[会,英]/Engelmann,F.∥Biotechnol.Forest TreeImprovement.-1992.-55～65[译自DBA,1993,12(25),93-14576] 每个植物种的种质保存都需要确定最优的冷冻保存(CP)条件:起始材料的选择和获取,预处理、贮存、冷冻、融化及后处理。提出了冷冻保存细胞悬浮物、愈伤、原生质体、分生组织和花粉、合子和体细胞胚的品种一览表。讨论了下列问题:     

氧化还原与细胞凋亡的关联

细胞内氧化还原状态与细胞凋亡相互关联的机理仍然存在很大争议。细胞内氧化还原状态的改变促进了氧自由基(ROS)的产生和凋亡诱导因子的激活,致使细胞凋亡的同时又加剧了细胞内氧化还原状态的改变。通过激活细胞凋亡信号激酶(ASK-1)、氧化还原转录因子NF-κB、AP-1及Caspase激活,揭示了细胞内氧化还原状态伴随细胞凋亡的不同阶段。     

农业其它

930326大蔡悬浮细胞培井物在冷冻保存期间的超徽结构变化[英]/Gnanapragasam,S.…,Plant CellRap.一1992,11(14).一169～174。医泽自DBA,1992,11(13),92—07499] 利用大黍(Panicum mazimum)悬浮细胞培养物研究了其冷冻保存期间的超微结构变化。培养物生长在补加3％蔗糖、2 mg/1 2,4一D、lOOmg/l肌醇和5％椰子汁的新鲜MS培养基(pH 5.8)(MS2C~普养基)里。冷冻前,悬浮物在补加O.33M甘露醇的MS2C培养基里预培养3天。然后,加入等体积的预冷冷冻保存剂(1.4M DMSO+1 M山梨醇),使悬浮液按O.5℃/分的速度冷却至一40"C,最后转移到液氮里…     

细胞的冻存与复苏

1986年11月美国标准培养物保藏中心(ATCC)在上海举办了细胞系质量控制方法学习班,现将有关内容整理介绍如下,供大家参考。 冷冻时,细胞受损伤的程度因冷却速度的不同而异。快速冷冻,细胞内外液一起冻,细胞不失水;慢冻则细胞失水。 冷冻保护剂能保护细胞存活。加10％保护剂,细胞几乎100％存活;不加保护剂细胞几乎都不能存活。     

钙离子作为细胞内化学信使的作用机制

在过去的十几年中,对于细胞内被称为“第二信使”的环腺苷酸(cAMP)和环鸟苷酸(cGMP)进行了广泛深入的研究,提出了第二信使——蛋白激酶系统的细胞控制论假设,在分子水平上阐明了一些细胞生物学受控活动.1970年Rassmussen提出了Ca~( )作为细胞内化学信使的假说。十年来的工作证明,Ca~( )与     

海藻酸微囊替代DMSO和FBS的STO细胞冷冻保存研穷

目的：改进现有的细胞冷冻保存方法,建立一个不舍二甲基亚砜（DMSO）和血清（FBS）的高效冷冻保存方法,为细胞治疗等临床实践提供优质细胞。方法：海藻酸微囊包埋鼠胚成纤维细胞（STO细胞）后用不含DMSO和FBS的冷冻保存液进行冷冻保存。,设四个对照组：添加10％DMSO和20％FBS的组、仅添加10％DMSO的组、仅添加20％FBS、DMSO和FBS均不添加组。在冷冻前后对各实验组细胞用台盼兰染色,进行细胞计数,计算细胞存活率,同时利用溴乙锭的二聚物（EthD）、钙黄绿素-AM（Calcein—AM）进行染色观察细胞的形态,且进一步验证细胞存活率;解冻复苏后用MTT法评估细胞的增殖速度和生长活力。结果：冷冻保存30天后对各组的细胞数量、细胞存活率、细胞形态和解冻复苏后细胞的生长活力进行比较发现,海藻酸微囊包埋冷冻组的细胞数、细胞存活率、细胞形态和生长活力均与添加DMSO和FBS的组之间无显著性差异,而与其它三个对照组呈显著性差异。结论：使用海藻酸微囊替代DMSO和FBS保存STO细胞,能有效的维持细胞形态、数量、存活率,同时不影响细胞的生长活力,从而建立了一个不含DMS0和FBS的高效冷冻保存方法。