人胎盘碱性磷酸酶的纯化及其抗血清的制备

人胎盘匀浆经过正丁醇抽提,丙酮沉淀以及ＤＥＡＥ－纤维素,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００,羟基磷灰石３种柱层析等步骤,从中分离出电泳纯的胎盘碱性磷酸酶,纯化系数达１０００倍以上,以此酶作为抗原,免疫新西兰纯种白兔,制备出１：５０００以上滴度的抗血清,该抗血清已用于科研和临床诊断工作中。     

视黄醇结合蛋白的分离纯化及其抗血清的制备

建立了经硫酸铵分级、DEAE-Sephadex A25柱、Sephadex G200柱、Ultrogel ACA44柱和 Sephadex G100柱层析分离纯化人血浆视黄醇结合蛋白的方法.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,其纯度达到电泳纯.以此电泳纯的视黄醇结合蛋白免疫家兔得到了高效价的抗血清.     

人血清载脂蛋白AⅡ的分离纯化及其抗血清的制备

本文应用超迷离心,盐酸胍处理、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析分离纯化了人血清载脂蛋白AⅡ。经等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳等鉴定,其纯度达到电泳纯和免疫纯。以此载脂蛋白AⅡ纯品免疫家兔产生的抗血清,效价较高,特异性强,与载脂蛋白AⅠ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E和白蛋白没有交叉反应。     

人前列腺特异抗原分离纯化

本文报道了一种从人精液中提纯前列腺特异抗原的方法,本方法仅需Ａｆｆｉｇｅｌ－Ｂｌｕｅ ｇｅｌ柱和凝胶ＨＰＬＣ二步层析,即可行到均一的ＰＳＡ纯品。这是一个快速,有效的提纯方法。ＰＳＡ是前列腺癌的特异肿瘤标志物。     

人Ⅳ型胶原的提纯及其抗血清制备

采用胃蛋白酶限制性消化,NaCl分级盐析,还原和烷基化反应,纤维素离子交换层析从人胎盘组织分离纯化Ⅳ型胶原.经SDS-PAGE电泳鉴定符合Ⅳ型胶原α肽链电泳带.用纯化的Ⅳ型胶原免疫兔制备出高效价的特异抗血清.     

人前列腺特异抗原分离纯化

本文报道了一种从人精液中提纯前列腺特异抗原的方法,本方法仅需Affigel-Blue gel柱和凝胶HPLC二步层析,即可得到均一的PSA纯品。这是一个快速、有效的提纯方法。PSA是前列腺癌的特异肿瘤标志物。     

豌豆铁蛋白的纯化及其抗血清的制备

干豌豆种子粗提物经MgCl2 盐析、AcA2 2 凝胶过滤和DEAE 纤维素阴离子交换柱层析等方法进行纯化 ,以邻菲咯啉显色法检测铁蛋白 ,最后获得纯的铁蛋白 .纯化的铁蛋白在PAGE上显示一条带 ,SDS PAGE显示该蛋白仅含 2 8kD一条亚基 .纯化的豌豆铁蛋白免疫兔 7周后 ,琼脂糖双扩散法检测抗血清效价达 1∶32 .用分级盐析法纯化抗血清 ,纯化后的抗体用琼脂糖双扩散法对大豆铁蛋白粗提物有免疫交叉反应     

脂蛋白(a)的分离纯化及其抗血清的制备

脂蛋白(a)简称Lp(a),是血清中一种具特殊结构、抗原成分和生理功能的脂蛋白,近年来国外学者高度重视Lp(a)的研究并确定为动脉粥样硬化危险因素的良好指标,为了探索有关动脉粥样硬化防治的新领域,我们进行了Lp(a)的分离纯化及其抗血清的制备。     

重组风疹病毒抗原的分离纯化

为了制备临床诊断用的风疹病毒抗原,建立了亲合色谱分离纯化的方法.风疹抗原以可溶性形式在大肠杆菌工程菌中获得高效表达,用GST亲合色谱在不变性的条件下直接从细菌裂解液中分离纯化.纯化的目的蛋白电泳为单一条带,EUISA试验表明,重组抗原与风疹病毒IgM阳性血清能特异反应,而与IgM阴性血清不反应,表明重组蛋白具有良好的抗原性,能满足临床检验要求.     

发酵法制备硫酸软骨素裂解酶及其酶分离纯化的研究

以温和气单胞菌(Aeromonas sobriaYH311)为出发菌株进行发酵培养,发酵液经硫酸铵沉淀初步分离出粗酶液,将粗酶溶解并透析后再分别经过CM-Cellulose、QAE-sephadex A-50和Sephadex G-150层析柱进行逐级分纯,并跟踪测酶活,最后获得硫酸软骨素酶,经SDS-PAGE检测为一条带。此方法由粗酶至纯酶提纯倍数约186。     

人蛋白二硫键异构酶的纯化及其抗血清制备

人蛋白二硫键异构酶的纯化及其抗血清制备吴秉毅,冯桂湘,吕静,张帆,冯永清,王福琴（第一军医大学珠江医院广州５１０２８０）关键词蛋白二硫键异构酶,分离与纯化,抗血清制备二硫键在维持蛋白质的空间结构、生物学活性中起重要作用。二硫键的形成是蛋白质翻译后修饰...     

大鼠肝脏F抗原基因的克隆、表达及产物纯化

肝脏F抗原是一种新型的能直接反映肝损伤程度的血清学标志,它是1968年由美国学者Fravi从小鼠肝中分离出来的[1].F抗原是存在于哺乳动物肝细胞质中的一种水溶性不稳定的单链蛋白质,相对分子量为43kD[2],正常肝组织中的F抗原含量是血清中的1370倍,只有肝细胞被破坏时,F抗原才释放     

恶性疟合成多肽抗原基因在大肠杆菌中表达产物的分离纯化

我们用化学方法合成的两个恶性疟原虫杂合抗原基因,即A基因和B基因〔1.2〕,分别与表达载体pwR450·1重组并转化到大肠杆菌使其表达〔3.4〕。经筛选获得了pwR／A·7和pwR／B·164两个表达较高的克隆菌(经扫描测定表达融合蛋白量分别为菌体总蛋白的8．8％和11．O％)。叉将A基因和B基因串连后与pwR450·l重组并转化到大肠杆菌JMl03株,经筛选鉴定获得了上述两个基因串连的pwR／AB·20克隆菌(表达融合蛋白量为35．8％)。为了进一步研究这3个克隆菌表达蛋白的免疫功能等活性,用8．0mol／L脲处理包涵体,离心沉淀上清液进行DEAE-ephacel柱层析,用Tris梯度缓冲液洗脱,但分离效果不好,而应用PAGE方法进行分离纯化,则可得到电泳纯、稳定又具有免疫原性的产物。     

MNP—SH复合物一步法快速分离和纯化mRNA的新方法

本文建立了一种快速分离和纯化mRNA的新方法。为避免RT—PCR实验中mRNA降解问题,我们使用磁性纳米粒子,快速有效的从培齐的细胞、组织以及脐带血中分离出带有ploy（A）＋结尾的mRNA用于实验。研究结果表明,磁性纳米粒子经过修饰连接Oligo（dT）16可直接分离mRNA,其方法操作简单,快捷、省时,可有效地用于基因表达的研究。     

MNP-SH复合物一步法快速分离和纯化mRNA的新方法

本文建立了一种快速分离和纯化mRNA的新方法.为避免RT-PCR实验中mRNA降解问题,我们使用磁性纳米粒子,快速儋有效的从培养的细胞、组织以及脐带血中分离出带有ploy(A) 结尾的mRNA用于实验.研究结果表明,磁性纳米粒子经过修饰连接Oligo(dT)16可直接分离mRNA,其方法操作简单,快捷、省时,可有效地用于基因表达的研究.     

微小毛霉凝乳酶的分离纯化研究

研究微小毛霉(HL-1)凝乳酶的分离纯化条件及方法。研究酶的最适浸提温度、酶的浸提pH值和最适浸提时间,探讨离子浓度、加水量对浸提效率的影响,利用高速冷冻离心法、有机溶剂沉淀法,膜分离法和层析法等对粗酶液进行了分离。利用光谱法对纯化样品进行检测。酶的最适浸提温度为30℃;最适pH为6.0;浸提10 h活力最高;1%的氯化钠有利于酶的分离,加水比例为15时有利于提取,在10 000 r/min下离心10min澄清效果最好,95%的酒精沉淀效果最好,利用0.2μm的微滤膜可除去发酵液中的菌体,8 000的超滤膜可拦截凝乳酶蛋白,S300的填料可有效分离凝乳酶,纯度达95%以上。     

纳米磁性粒子在DNA分离与纯化中的应用进展

纳米磁性粒子是一种新型的亲和纯析固相载体 ,其粒径小 ,具有超顺磁性 ,表面积大 ,表面可赋予多种反应基团如链霉亲和素、抗体等 ,或DNA片段 ,在磁场作用下可分离目的DNA ,已逐步应用于分子生物学领域中 ,有着极为广泛的应用前景。     

CD59天然抗原的制备及纯化

目的 构建人matureCD59-mFC—pBOS真核表达载体,转染COSa细胞进行瞬时表达,对表达产物进行鉴定及纯化。方法在人Jurkat细胞中提取细胞总RNA,运用RT—PCR方法扩增matureCD59基因,定向克隆入带有mFC标签的真核表达载体pBOS中,大提质粒后通过电转仪转染COSa细胞,ELISA及特异抗体检测CD59的表达,并大量收集细胞上清用ProteinA进行纯化。结果构建r重组载体matureCD59．mFC—pBOS,瞬时转染COSa细胞,初步纯化得到天然表达的CD59抗原。结论带有mFC标签的CD59天然抗原的得到为制备抗人CD59单克隆抗体开辟了一条新的途径。