基于SNP标记的荷包红鲤与兴国红鲤鉴别研究

兴国红鲤和荷包红鲤是宝贵的红鲤品种,作为优良杂交亲本,广泛应用于品种改良和新品种的选育。由于形态相近、差异较小,在选择杂交亲本的过程中,极易发生两种红鲤的混淆,影响新品种的养殖经济效益。通过阅读参考文献,使用数据库位点挑选和性状基因位点挑选,获得了8个SNP候选标记,理论上使用7个SNP标记,即可实现两种红鲤的鉴别,且鉴别错误率为6.30E-05,这对以两种红鲤为杂交亲本的新品种选育及养殖效益的提升意义重大,也有利于两种红鲤的种质资源保护。     

人工诱导兴国红鲤三倍体最佳诱导条件的研究

采用冷休克处理兴国红鲤受精卵诱导产生三倍体鱼 ,初步探讨了获得三倍体兴国红鲤的最佳诱导条件 ,即最恰当的诱导温度 ,最恰当的诱导起始时间 ,最恰当的冷休克处理时间。结果表明 ,在人工授精后 5～ 8min ,将受精卵置于 0～ 2℃的冰水中冷休克处理 1 0～ 1 5min ,再迅速回温至正常水温 ( 2 0～ 2 5℃ )的水中发育 ,可以获得 ( 70± 5) %的三倍体兴国红鲤胚胎 ,孵化率为 50 %～ 70 % ,成活率可达 4 0 %～50 %以上 ,此为采用冷休克技术人工诱导兴国红鲤三倍体的最佳条件。     

中国红鲤遗传多样性的RAPD分析

红鲤是我国鲤中的特有类群,主要分布于江西、浙江一带。       

雌核发育进行银鲫遗传育种新进展

近年来,人工诱导雌核发育作为一种崭新的技术在鱼类遗传育种研究中正日益引起人们的普遍关注。银鲫作为天然雌核发育的代表,以其独特的生殖方式和重要的经济价值,在理论研究和生产实践中均具有重要意义,本文概要介绍了银鲫的生殖方式,天然群体中优良品系的选育、异源精子对银鲫子代的生物学效应及其在生产实践中的应用－异育银鲫的选育,以及结合染色体倍性操作技术培育四倍体复合鲫的研究近况及发展前景。     

鲤鱼鳞被和体色在人工诱导雌核发育中的遗传变异

于1986—1988年,先后人工诱导2尾红镜鲤和4尾荷包红鲤抗寒品系雌核发育,获得雌核发育2倍体当年鱼种2133尾,其中红镜鲤685尾,荷包红鲤1448尾。通过对这些后代鳞被和体色两个质量性状的分析,发现荷包红鲤抗寒品系雌核发育2倍体(1987)中有约三分之一个体表现散鳞型鳞被和桔红色(出现由深到浅一系列变化)及少量桔黄色、肉红色个体。红镜鲤散鳞型鳞被出现体表全部覆盖不规则大型鳞片、2/3、1/2覆盖不规则的大型鳞片和散鳞型个体。体色出现桔红色、桔黄色,上述二色都出现由深到浅一系列变化和肉红色。这两个质量性状在雌核发育代中表现出数量性状的特征。     

建鲤和荷包红鲤肌肉脂肪、脂肪酸组成以及Apo-C-I转录水平的比较

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人工诱导白鲫(♀)×红鲤(■)异源四倍体鱼的初步研究

人工诱导鱼类多倍体是动物染色体工程的重要课题。鉴于三倍体鱼的不育性和成活率高、生长快等特点,国内外采用理化手段直接诱导三倍体鱼已在三棘刺鱼(Gasterosleus aculeatus(L.))、鲽鱼(Pleuronectes platessa)、鲤鱼(Cyprinus carpio L.)、草鱼(Ctenopharyngodonidellus)、草鱼(♀)×团头鲂(Megalobrama amblycephala)(♂)杂种,以及白鲢(Hypophthalmichthysmolitrix),等十多种鱼获得成功。有的已开始用于实践并取得较明显的经济效益。尽管如此,诱导三倍体鱼的技术毕竟不是一劳永逸的方法。理想的方法是人工诱导获得能育的异源四倍体(或同源四倍体),再与二倍体鱼杂交得三倍体鱼,从而为大规模生产三倍体鱼提供一条行之有效的捷径。陆仁后等(1982),用草鱼尾鳍细胞诱导成同源四倍体细胞并移至泥鳅去核卵得到心跳期     

雌核发育银鲫和两性融合发育红鲤卵母细胞成熟的细胞学比较研究

对雌核发育银鲫和两性融合发育红鲤的卵母细胞成熟过程,进行了详细的细胞学比较研究。在银鲫卵母细胞成熟过程中,绝大部分卵母细胞的核物质,在胚泡破裂(GVBD)后的第一次成熟分裂时期,出现明显的不同于红鲤卵母细胞核的行为,其染色体逐渐清晰地分为三群,这三群染色体的发育既彼此独立又相互联系,最终形成一首尾相接的三极纺锤体。随后,三极纺锤体扭转、重叠、合并成为一个正常的中期纺锤体。但极少数银鲫卵母细胞也出现了类似于红鲤卵母细胞的成熟单星光,并进而发育成两极纺锤体,形态类似红鲤第一次成熟分裂中期纺锤体。在银鲫上述两类卵母细胞的成熟过程中均未观察到“第一极体”外排的现象。由此,我们确认,银鲫卵是通过第一次成熟分裂异常,卵核染色体不减数来维持染色体倍性的;并且,根据上述特殊现象,我们对银鲫卵子第一次成熟分裂异常的机制进行了初步分析。       

鲤形目鱼类咽齿形态及发育的比较研究

对鲤形目所属６科类的咽龄形态及个体发育模型进行了较详细的比较研究。结果得出除双孔鱼科鱼类未形成咽齿外,其它５科鱼类在咽齿发生的过程中具有齿着生方向完全相反的两种发育模式。以亚口鱼科,鳅科和平鳍鳅为一类的齿后向增长的类型和以鲤科另一类的齿同增长的类型。     

彭泽鲫雌核发育的细胞学研究

通过对彭泽鲫♀×彭泽鲫♂、彭泽鲫♀×尖鳍鲤♂“杂交”后代的细胞学观察发现 ,同源与异源精子在彭泽鲫卵中的发育情况基本一致。精子入卵后一般呈固缩状态 ,不解凝 ,不形成雄性原核 ,但都能看到未解凝精核与雌性原核接触 (未融合 )的现象。刚产出的成熟卵子没有看到极体 ,但受精 1 0分钟有极体排出 ,是卵子发育排出的惟一极体。根据观察结果 ,彭泽鲫在细胞学上表现出典型的雌核发育行为特征 ,是以雌核发育方式繁殖的种群     

草鱼人工雌核发育的细胞学观察

运用组织学方法研究了用紫外线辐射处理后的鲤鱼精子诱导草鱼卵子雌核发育的细胞学过程。结果表明精核在卵子内主要有２种变种（１）始终保持固缩状态,不形成雄性原核;（２）形成雄性原核。冷休克处理可破坏卵子第二次成熟分裂的纺锤体。冷休克处理后,室温孵化期卵子内变化有２种（１）卵子内重新形成了纺锤体和纺锤丝,其中部分卵子可排出第二极体;（２）卵子内纺锤体或纺锤丝不恢复。     

不同日照时数对鲤,鲢,鳙鱼苗生长和存活的影响

不同日照时数对鲤、鲢、鳙鱼苗生长和存活的影响王吉桥,赵德树,张景全（大连水产学院养殖系,１１６０２３）（大连市碧流河水库渔场,１１６４２８）ＥｆｆｅｃｔｏｆＰｈｏｌｏｐｅｒｉｏｄｏｎｔｈｅＧｒｏｗｔｈａｎｄＳｕｒｖｉｖａｌｏｆＳｉｌｖｅｒＣａｒｐ,Ｂ...     

转反义sGnRH基因败育鲤鱼的性成熟诱导

采用反义转基因技术已成功获得整合CAsGnRHpc-antisense基因的转基因鲤鱼,简称AS-sGnRH F0鲤鱼.通过挤压1年龄AS-sGnRH F0鲤鱼的腹部,发现该群体中有精液/无精液个体比例为33/69,与对照组鲤鱼中有精液/无精液个体比例接近1：1相比存在显著差异.通过注射鲤鱼垂体抽提物诱导无精液AS-sGnRH F0鲤鱼恢复繁殖功能,获得3尾育性被恢复的AS-sGnRH F0鲤鱼.进一步的解剖观察发现,在无精液AS-sGnRH F0鲤鱼群体中,完全无性腺的AS-sGnRH F0鲤鱼比例约31.3%.根据直观的挤精液和解剖学观察,推测在AS-sGnRH F0鲤鱼群体中,雄鱼：雌鱼：＂脂肪型＂性腺个体的比例大约为35：45：20%.受精卵发育12 h后,统计A、B、C系AS-sGnRH F0鲤鱼精子的受精率分别为73.94、59.45和64.05%.从A、B、C系杂交后代F1分别随机取样100尾,PCR检测的阳性率分别为0、78.1和87.8%.研究结果表明通过补充外源激素可以使促性腺激素分泌不足而不育的AS-sGnRH F0鲤鱼恢复具有产生成熟配子的能力.     

鲤鱼脾脏中保守miRNA的鉴定

miRNA参与动物免疫系统发育及功能调节,但与鲤鱼免疫相关的miRNA研究还未见报道.为鉴定鲤鱼免疫相关miRNA,本研究构建了鲤鱼脾脏小RNA文库.通过Solexa测序,共获得纯净序列读数10 603 456条. 经过生物信息学分析,鉴定到192种保守miRNA,其中69种为新的鲤鱼miRNA.表达分析表明,高丰度miRNA主要集中于let-7、mir-10、mir-15和mir-30等30余个基因家族. miRNA保守性分析显示,23个家族在原口和后口动物中均存在,46个家族仅在脊椎动物中保守,5个家族仅在鱼类中被鉴定到.此外,GO富集分析表明,鲤鱼脾脏保守miRNA与免疫系统发育、淋巴细胞活化、免疫应答等相关.本研究首次鉴定了鲤鱼脾脏组织miRNA转录组谱,增加了鲤鱼已知miRNA数量,有助于更好地理解鲤鱼免疫防御机制.     

鲤鱼肝组织线粒体DNA的限制性内切酶分析

用EcoRⅠI,HindⅢ,PstⅠ,BglⅡ,BamHⅠ,Xho Ⅰ, Xba Ⅰ, Sal Ⅰ和Kpn Ⅰ共9种限制性内切酶酶切对鲤鱼肝组织的mtDNA进行酶解,利用Gel-Pro Analyzer算出各酶切片段长度及mtDNA大小,测出其大小约为16．61kb(1kb=1×103b),另外,对电泳条件的优化进行了探讨,并将实骚结果与以前报道的有关酶切实验结果进行了比较,表明鲤鱼mtDNA的长度及限制性酶切位点均存在地域差异．     

肠溶微囊式重组鲤生长激素促生长剂的研制

采用草鱼生长激素夹心式酶联免疫吸附测定法和酶联免疫吸附受体测定法,研制肠溶微囊式重组鲤生长激素（rcGH)促生长剂,结果表明,肠溶树脂Ⅰ和Ⅱ溶解的pH阈值分别为6.0和6.6,当大于阈值时,肠溶微囊Ⅰ和Ⅱ内rcGH的释放率随pH值升高和时间延长而逐渐升高,直至rcGH完全释放,投喂胡子鲶（Clarias batra-chus)含肠溶微囊Ⅰ（内含rcGH0后,血清rcGH水平15h后开始升高,24h时达最大值,随后呈下降趋势,48h后血清中检测不到rcGH;而投喂含rcGH的药饵（1mgrcGH/g饵料）,6-60h在胡子鲶血清中均未检测到rcGH。说明肠溶微囊Ⅰ对rcGH起一定保护作用,肠溶微囊Ⅰ和Ⅱ具有抗酸肠溶胶囊的特点和作用。     

微卫星DNA标记分析野生鲤鱼群体的遗传多样性

利用30个微卫星分子标记对海南鲤(HN)、长江鲤(CY)、月亮湖鲤(YL)、黑龙江鲤(FY)、呼伦湖鲤(ZL)、贝尔湖鲤(BR)6个野生鲤鱼群体的观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)和有效等位基因数(Ae)等进行了遗传检测,根据基因频率计算遗传相似系数和Nei氏标准遗传距离,χ2检验估计Hardy-Weinberg平衡,用近交系数(FST)和基因流(Nm)分析群体的遗传分化及其来源。同时,使用PHYLIP3.63软件绘制基于Nei氏标准遗传距离的UPGMA进化树。6个群体共检测到8,136个扩增片段,长度在125bp～414bp,30个基因座扩增出等位基因数从3～13个不等,共计210个等位基因,平均每个基因座扩增得到7个等位基因。结果显示:(1)6个野鲤群体的多态性指标均适中,多态信息含量依次0.44、0.52、0.53、0.57、0.63和0.64,有效等位基因数1.04～4.72个不等,平均有效等位基因数依次为2.19、2.60、2.42、2.43、2.45和2.33,无偏期望杂合度平均值为0.50、0.59、0.56、0.56、0.57和0.54;(2)遗传相似系数BR与ZL最高(0.8511),BR与HN最低(0.6688),聚类结果与地理分布呈一定相关性。     

异育淇鲫及其双亲同工酶的比较研究

用4.5％聚丙烯酰胺凝胶平板电泳研究了异育淇鲫及其母本淇鲫和父本兴国红鲤的肌可溶性蛋白以及肾、肝、眼、背白肌和心等五种组织的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和酯酶(EST)。结果发现:异育淇鲫的肌可溶性蛋白以及同工酶的电泳图谱与母本淇鲫相同而与父本兴国红鲤显著不同,因而认为异育淇鲫是淇鲫雌核发育的产物,父本基因对子代基本无影响。在此基础上,本文对异源精子在雌核发育中所起的生物学作用进行了初步探讨。