β-转化生长因子在哮喘气道重塑中的作用

哮喘是一种慢性气道炎症性疾病.哮喘患者体内表达较高水平的B一转化生长因子(TGF-β).TGF-B可加重上皮细胞受损,促进气道平滑肌细胞,肌成纤维细胞增殖,通过促进细胞外基质的合成、诱导结缔组织生长因子表达从而导致气道上皮下纤维化,气道壁增厚,进而直接参与哮喘气道炎症和重塑的发生、发展过程.TGF-β在哮喘的气道重塑中有着极其重要的作用,因此针对其治疗已经成为防治哮喘气道重塑的新的研究方向.     

气道上皮细胞在哮喘中的作用

随着现代医学的发展,人们对支气管哮喘发病机制的研究有了进一步发展.支气管哮喘(简称哮喘)是一种由多种细胞,多种细胞因子参与形成的慢性气道炎症性疾病.支气管上皮细胞是气道结构细胞,它是抵抗外界损伤因素的第一道防线,当吸人性刺激物质时,首先激化支气管上皮细胞并破坏支气管上皮细胞的正常结构和生理功能,在应激状态下的上皮细胞通过分泌炎性介质与自身细胞或其他气道结构细胞、炎性细胞、抗原递呈细胞等相互作用,积极参与哮喘的气道慢性炎症发生与发展进程.因此气道上皮损伤是影响哮喘发生发展的重要因素,阐明维持气道上皮正常结构和功能的分子机制是目前防治哮喘的重要课题.本文综述气道上皮在哮喘发生发展中的作用及相关机制研究进展.     

口服柔嫩梭菌对OVA致敏小鼠气道炎症的影响

目的 在动物水平探索口服柔嫩梭菌(Clostridium leptum)对哮喘小鼠气道炎症的影响.方法 建立OVA致敏的BALB/c小鼠哮喘模型,依据检测气道炎症情况和气道反应性确定哮喘模型构建成功.30只BALB/c小鼠随机分为3组:正常对照组,安慰剂组和口服柔嫩梭菌治疗组,每组10只.通过HE染色检测小鼠肺组织病理变化,细胞计数检测肺泡灌洗液中炎性细胞(嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞)的数目,ELISA方法检测肺泡灌洗液中炎性因子(IL4、IL-5、IL-13)的表达情况,并检测各组小鼠的气道反应性.结果 验证OVA致敏哮喘小鼠模型构建成功;口服柔嫩梭菌可显著减轻OVA致敏小鼠的气道高反应性,气道炎症细胞浸润和炎性细胞因子分泌(P＜0.05).结论 口服柔嫩梭菌可显著减轻OVA致敏小鼠的气道炎症和气道高反应性,这可能为哮喘治疗提供新思路.     

咪喹莫特对慢性哮喘模型小鼠肺组织中基质金属蛋白酶-9-表达的影响

目的：观察Toll样受体7配体咪喹莫特对慢性哮喘小鼠模型气道重塑及肺组织中基质金属蛋白酶MMP-9表达的影响。方法：36只BALB／c小鼠按随机原则分成正常对照组、哮喘模型组、咪喹莫特组,每组12只。通过卵蛋白致敏,气道激发8周,末次激发24h后,检测各组小鼠气道反应性,HE染色观察气道炎症变化;Masson三色染色观察气道纤维化的改变;real-timePCR和western—blot分别检测肺组织中MMP-9的mRNA和蛋白表达。结果：慢性哮喘组小鼠气道炎症、气道高反应性和气道重塑较正常对照小鼠明显加重,而咪喹莫特组小鼠模型的气道炎症和气道反应性及气道重塑均较哮喘模型组小鼠减少或降低。慢性哮喘组小鼠肺组织MMP-9的mRNA和蛋白水平均较正常对照小鼠明显增加（P〈0．05）,而咪喹莫特治疗可显著降低哮喘小鼠肺组织MMP-9的mRNA和蛋白水平（P〈0．05）。结论：咪喹莫特能够显著抑制慢性哮喘小鼠模型的气道炎症、降低气道高反应性并减轻气道重塑,这可能与其抑制MMP-9的表达有关。     

树突状细胞在哮喘慢性气道炎症中的作用

树突状细胞(dendritic cells, DCs)作为专职抗原提呈细胞启动了哮喘初次免疫应答,但是DCs在抗原特异性免疫应答及其引发的哮喘慢性气道炎症反应中的作用存在一定争议,需要重新认识。本文通过综述相关研究,认为DCs在哮喘中的免疫活性并不局限于启动过敏原诱发的初次免疫应答,DCs还可以通过激活记忆性T细胞参与介导抗原特异性免疫应答,并在哮喘慢性气道炎症病理进程中发挥重要作用。此外,在多种因素作用下,哮喘气道DCs可以分化为具有免疫抑制作用或引起免疫耐受的调节性DCs (DCreg)或耐受性DCs (tolDC),抑制哮喘Th2细胞主导的慢性气道炎症。通过调节气道免疫微环境或细胞内源性信号分子,抑制DCs在抗原特异性免疫应答中活化记忆性T细胞的能力,或通过诱导DCreg/tolDC细胞分化,进而控制慢性气道炎症,将是未来防治哮喘新的重要研究方向。     

通光散汤对小鼠哮喘模型气道高反应性和气道炎症的影响

目的观察通光散对小鼠哮喘模型气道反应和气道炎症的影响。方法35只6周龄BALB／c小鼠随机分为哮喘模型组、正常对照组和药物实验组。模型组和药物组以鸡卵白蛋白（OVA）致敏、激发;药物组在最后一次致敏后每天灌胃给予通光散汤0．72mL（相当于0．04g生药）;对照组以等体积的Ns代替OVA致敏、激发。末次激发48h后处理小鼠：无创法测定小鼠的气道高反应性,观察气道阻力变化;支气管肺泡灌洗液（BALF）行细胞学分类;观察肺组织的病理变化。结果①药物组小鼠气道阻力的变化与模型组相比明显下降,差异显著（P＜0．05）;②药物组BALF白细胞总数和Eos（％）与模型组相比明显降低（P＜0．05）。③模型组小鼠肺脏组织支气管、血管黏膜下和周围肺组织有明显的炎症细胞浸润,大量炎症细胞向支气管和血管迁移,上皮细胞部分有脱落,部分可见黏液栓,血管壁明显水肿;治疗组小鼠肺组织炎性细胞浸润和管腔黏液分泌情况较模型组明显减轻,气道粘液的分泌量得到明显的控制。结论通光散汤对小鼠哮喘模型气道高反应性和气道炎症有显著抑制作用。     

长链非编码RNA在气道炎症性疾病中的作用

气道炎症性疾病是以异常增强的气道炎症、气道阻塞和气道重塑为特征的疾病,主要包括哮喘和慢性阻塞性肺病等。近年来,气道炎症性疾病的发病率逐年上升,给全球医疗卫生事业造成巨大负担,然而其发病机制尚未完全阐明,亟需寻找治疗气道炎症性疾病的分子靶点。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在气道炎症性疾病中表达失调,充当关键的调控分子,影响气道炎症性疾病的发生与进展。异常表达的lncRNA有望成为气道炎症性疾病的生物标志物和治疗靶点。本文就lncRNA在气道炎症性疾病中的作用进行综述。     

组织贴块法培养小鼠气道平滑肌细胞

哮喘是慢性气道炎症性疾病,以气道高反应性和可逆性气道阻塞为主要临床特征,而气道重建作为哮喘的重要病理特征,对气道高反应性的形成起着重要作用。而气道平滑肌增厚是产生气道阻塞的重要原因,与气道高反应性的发生密切相关[1]。体外气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell     

Sunitinib对哮喘气道重塑小鼠PDGFR-β磷酸化和MMP-9表达的影响

目的:探讨sunitinib对支气管哮喘气道重塑的干预作用及可能的作用机制.方法:BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘气道重塑组、sunitinib干预组.鸡卵清蛋白致敏和激发建立哮喘小鼠气道重塑模型;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)做细胞计数;取右肺组织行苏木精-伊红(HE)染色和Masson三色染色;免疫沉淀(IP法)测定小鼠肺组织PDGFR-β受体磷酸化及westernblot(WB)法检测MMP-9蛋白质的表达.结果:HE和Masson三色染色提示哮喘组黏膜下层和平滑肌增厚、气道管腔狭窄、胶原纤维增生、大量炎症细胞浸润,sunitinib干预组上述改变较哮喘组为轻;哮喘组BALF中炎症细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS)计数在哮喘组表达较对照组为高(P＜0.05),而sunitinib组低于哮喘组(P＜0.05);PDGFR-β受体的磷酸化和MMP-9的表达在哮喘组表达较对照组为高(P＜0.01),而sunitinib干预组表达量低于哮喘组(P＜0.01).结论:sunitinib能够抑制哮喘小鼠PDGFR-β的磷酸化和MMP-9表达,减轻气道炎症反应、延缓气道重塑进程.     

支气管上皮细胞在气道高反应中的作用

气道高反应的发病机制目前仍然不清楚,但人多数人认同是气道的一种慢性炎症。近十年来,上皮缺陷学说逐渐成为解释气道高反应机制的主流观点。气道上皮不再被仅仅看作为单纯的机械屏障,而是机体内环境与外部环境相互作用的界面。气道上皮具有广泛的生理作用,包括抗氧化、内分泌和外分泌、黏液运输、生物代谢、结构性黏附、损伤修复、应激或炎症信号传递、抗原递呈作用等。借助这些生理作用,支气管上皮细胞在气道局部微环境稳态维持中发挥重要作用。有理由相信,气道上皮的结构完整性缺陷或功能紊乱是哮喘和慢性阻塞性肺疾病等气道高反应性疾病的启动环节。     

麻黄碱通过调控TGF-β1/NF-κB信号通路抑制小鼠的气道炎症反应

为了研究麻黄碱通过调控转化生长因子β1/核因子κB (transforming growth factor-β1/nuclear factor-κB,TGF-β1/NF-κB)信号通路对哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的影响,将BALB/c小鼠随机分为空白对照组、哮喘模型组、麻黄碱低剂量组、麻黄碱高剂量组和地塞米松组,并利用卵清白蛋白(ovalbumin, OVA)联合氢氧化铝腹腔注射法构建小鼠哮喘模型。药物处理14 d后,通过无创性肺功能检测法测量小鼠气道反应性,采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining, HE staining)观察小鼠肺组织病理情况,采用瑞氏-吉姆萨染色法分析小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中的炎症细胞比例,利用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠血清OVA特异性免疫球蛋白E (immunoglobulin E, Ig E)的表达水平及BALF中炎症因子的表达水平,利用免疫印迹法检测小鼠肺组织TGF-β1...     

过表达XB130抑制哮喘小鼠气道高反应性和气道炎症

目的:研究XB130在哮喘小鼠气道高反应(airway hyperresponsiveness,AHR)和气道炎症中的作用。方法:36只C57小鼠分为4组:正常对照组(Control,CON)、哮喘组(Asthma,AS)、腺病毒载体组(Ad-vector+AS)和腺病毒过表达XB130组(Ad-XB130+AS)。采用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)建立小鼠过敏性哮喘模型,后两组小鼠分别尾静脉注射Ad-vector和Ad-XB130。最后一次雾化吸入后24小时进行气道高反应试验,收集支气管灌洗液(bronchi alveolar lavage fluids,BALF)。采用RT-PCR和Western blotting方法检测XB130表达。ELISA法检测血清中OVA特异性Ig E的含量。直接计数法计算BALF中嗜酸性粒细胞(eosinophile granulocyte,EOS)数量。ELISA方法用于检测BALF和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的分泌。结果:哮喘小鼠肺组织中XB130表达减少,过表达XB130其m RNA和蛋白表达水平显著升高。过表达XB130降低醋甲胆碱(methacholine,Mch)诱导的气道高反应。与载体对照组(48±3)相比,XB130过表达(17±4)EOS数量显著减少。同时,过表达XB130(0.051±0.002)较载体对照组(0.128±0.007)Ig E含量减少。此外,XB130抑制哮喘小鼠中IL-4、IL-5和IL-13并促进IFN-γ分泌。结论:过表达XB130可抑制哮喘模型小鼠气道高反应性和炎症反应。     

早期吸入不同浓度布地奈德对哮喘大鼠气道炎症和重构的干预

目的：研究早期吸入不同浓度布地奈德对哮喘大鼠气道炎症和气道重构的干预情况。方法i32只Wistar大鼠随机分为4组：A对照组8只,B卵蛋白（OVA）致哮喘组8只,C卵蛋白致哮喘后吸入低浓度布地奈德治疗组8只,D卵蛋白致哮喘后吸入高浓度布地奈德治疗组8只。分别测定各组大鼠血中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及肺泡灌洗液（BALF）中内皮素．1（ET-1）的水平,计数BALF中细胞总数及分类。各组大鼠行肺组织切片HE染色,再行胶原染色、免疫组化NGF、TGF-β1染色,借助计算机图象分析软件测量单位气道面积炎性细胞数目,基底膜周径（Pbm）、平滑肌面积（WArn）、气道内壁面积（WAi）、胶原面积（Wcol）,NGF及TGF-β1阳性信号积分吸光度。结果：B组BALF中细胞总数、嗜酸细胞分类及TNF—α、ET-1水平与A组比较均明显增加,差异有统计学意义（P〈0．01）,C组及D组较B组均明显降低,差异有统计学意义（P〈0．01）。B组NGF及TGF-β1的表达、气道壁炎性细胞计数、气道内壁面积、平滑肌面积、胶原面积与A组比较均明显增加,差异有统计学意义（P〈0．01）,C组及D组与B组比较均明显降低,差异有统计学意义（P〈0．01）,C组及D组与A组比较差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）,C组与D组差异均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论：早期吸入不同浓度的布地奈德均可明显抑制气道炎症和气道重构,高浓度较低浓度对气道炎症和气道重构的影响更明显。     

早期吸入不同浓度布地奈德对哮喘大鼠气道炎症和重构的干预

目的:研究早期吸入不同浓度布地奈德对哮喘大鼠气道炎症和气道重构的干预情况。方法:32只Wistar大鼠随机分为4组:A对照组8只,B卵蛋白(OVA)致哮喘组8只,C卵蛋白致哮喘后吸入低浓度布地奈德治疗组8只,D卵蛋白致哮喘后吸入高浓度布地奈德治疗组8只。分别测定各组大鼠血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及肺泡灌洗液(BALF)中内皮素-1(ET-1)的水平,计数BALF中细胞总数及分类。各组大鼠行肺组织切片HE染色,再行胶原染色、免疫组化NGF、TGF-β1染色,借助计算机图象分析软件测量单位气道面积炎性细胞数目,基底膜周径(Pbm)、平滑肌面积(WAm)、气道内壁面积(WAi)、胶原面积(Wcol),NGF及TGF-β1阳性信号积分吸光度。结果:B组BALF中细胞总数、嗜酸细胞分类及TNF-α、ET-1水平与A组比较均明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),C组及D组较B组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。B组NGF及TGF-β1的表达、气道壁炎性细胞计数、气道内壁面积、平滑肌面积、胶原面积与A组比较均明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),C组及D组与B组比较均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),C组及D组与A组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),C组与D组差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:早期吸入不同浓度的布地奈德均可明显抑制气道炎症和气道重构,高浓度较低浓度对气道炎症和气道重构的影响更明显。     

慢性支气管哮喘小鼠肺组织中组蛋白H3乙酰化修饰增强

目的探讨组蛋白乙酰化修饰与慢性哮喘小鼠气道炎症、气道重塑和气道高反应的关系。方法 BALB/C小鼠分为正常组和哮喘组,12只/组。肺功能评价气道反应性,HE染色观察气道炎症浸润,AB-PAS染色观察气道粘液腺化生,Masson染色观察气道胶原沉积,免疫组织化学染色观察气道平滑肌增生,Western blot测定组蛋白不同乙酰化位点的乙酰修饰水平。结果在哮喘小鼠肺组织中,气道血管周围大量炎症细胞浸润;气道上皮阳性染色增加,黏液高分泌;上皮下胶原沉积并纤维化;气道平滑肌细胞增殖。Western blot显示哮喘小鼠肺组织组蛋白H3上不同乙酰化位点乙酰化修饰水平明显增加。结论组蛋白乙酰化修饰可能参与慢性哮喘小鼠气道炎症、气道重塑和气道高反应过程。     

哮喘气道重塑大鼠气道上皮细胞及线粒体超微结构变化

目的探讨哮喘气道重塑大鼠气道上皮细线粒体超微结构变化,为哮喘的治疗寻求新的理论基础。方法雌性Wistar大鼠6只、随机分为2组,采用卵蛋白吸人法制作哮喘气道重塑大鼠模型;取两组大鼠气管制作电镜切片,观察两组大鼠气道纤毛上皮,气道上皮细胞问胶原沉积及细胞内线粒体超微结构改变。结果哮喘组大鼠气道多层纤毛上皮层,纤毛脱落,杯状细胞增多,排列不整齐,上皮细胞中线粒体基膜密度下降,线粒体峡减少,上皮细胞细胞核多切迹,形状不规则;气道上皮细胞间胶原沉积;板层小体和线粒体空泡化。结论哮喘大鼠气道上皮细胞出现早期凋亡改变,线粒体失去正常形态。     

平喘固本合剂对昆系小鼠急性哮喘模型气道炎症作用影响

目的:探讨平喘固本合剂对昆系小鼠急性哮喘模型气道炎症作用影响及相关机制。方法:昆明系小鼠40只,随机分为对照组(A),哮喘模型组(B),喘固本合剂治疗组(C),布地奈德雾化治疗组(D)及平喘固本合剂联合布地奈德雾化治疗组(E)。用鸡卵蛋白(OVA)致敏建立昆系小鼠哮喘急性气道炎症模型,并给与药物治疗10天。对各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中各种细胞进行分类并计数,观察肺组织的病理变化,同时应用ELISA法测定灌洗液中炎症相关因子的水平变化。结果:与B组比较,C组、D组、E组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞数、巨噬细胞数及IL-4、IL-4/IFN-γ明显降低(P<0.05),IFN-γ明显升高(P<0.05)。对于IL-4、IL-4/IFN-γ水平的比较C组与D组无明显统计学差异,E组与两者具有明显统计学意义(P<0.05)。HE染色显示C组、D组、E组较单纯模型组炎症细胞浸润,平滑肌肥厚及黏膜肺组织水肿等炎症表现明显减轻。结论:平喘固本合剂对哮喘昆系小鼠气道炎症有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制IL-4的表达、炎性细胞聚积及促进IFN-γ的表达有关,并且可能与糖皮质激素有一定协同作用。     

卵蛋白反复吸入哮喘小鼠气道重构模型的建立与评价

目的：探讨哮喘小鼠气道重构模型的建立的方法。方法：SPF级BALB／C6-8周龄雌性小鼠40只随机分成正常对照组、哮喘模型组,每组20只。哮喘组经卵蛋白（OVA）混悬液0．2ml致敏并反复雾化吸入2周、4周,正常对照组由生理盐水代替。各组分别于末次雾化激发后进行取材,收集肺组织,制作石蜡切片,HE染色观察气道中嗜酸性粒细胞;Masson三色染色法观察气道周围胶原沉积情况;PAS染色法观察气道黏液分泌情况;测定单位气道面积基底膜周径（Pbm）、管壁总面积（WAt）、内壁面积（wAi）、平滑肌面积（WAm）、胶原面积（Wcol）、粘液面积。结果：哮喘模型组WAt／Pbm、WAi／Pbm、WAm/Pbm、Wcol／Pbm、粘液分泌面积较正常对照组明显增加。哮喘4周组上述指标均高于其对应2周组（P〈0．05）。结论：反复的过敏原（OVA）吸入可导致哮喘气道重构的发生,是一种较好的建立哮喘小鼠气道重构模型的的方法。     

小青龙汤对小鼠支气管哮喘模型气道炎症及细胞因子的影响

目的:探讨中药方剂小青龙汤对小鼠哮喘模型气道炎症及细胞因子的影响。方法:40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、小青龙汤低剂量组(C组)和小青龙汤高剂量组(D组)。B、C、D组采用卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏与雾化吸入激发制作哮喘模型。于OVA激发结束后24h收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计数炎性细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)数目,并测定BALF上清液中白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)水平变化。结果:小青龙汤的干预治疗能显著降低小鼠BALF中炎性细胞总数及EOS数量;BALF上清液中IFN-γ水平明显升高,IL-4水平显著下降。D、C组与A组、B组有显著性差异(P<0.05),C组与D组结果亦存在显著性差异(P<0.05)。结论:小青龙汤能明显降低哮喘小鼠BALF中炎性细胞数量,影响细胞因子水平变化,从而改善哮喘气道炎症。     

组胺在哮喘豚鼠气道重塑中的作用

本研究旨在探讨组胺在哮喘豚鼠气道重塑中的作用。将50只健康雄性豚鼠随机分为5组。正常对照组：雾化吸入蒸馏水8周;哮喘模型组：致敏后雾化吸入卯白蛋白（ovalbumin,OVA）8周;哮喘模型延续组：致敏后雾化吸入OVA14周;组胺组：致敏后雾化吸入OVA14周,最后6周同时加用组胺：组胺受体拈抗剂组：致敏后雾化吸入OVA14周,最后6周同时加用组胺受体拈抗剂。检测血清组胺、Na^＋、Cl^-浓度、动脉血氧分压（PaO2）、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）、pH、实际碳酸氢盐（actual bicarbonate,AB）、标准碳酸氧盐（standard bicarbonate,SB）以及气道壁粘膜层、基底膜层和平滑肌层厚度。所得结果如下：（1）哮喘模型组血清组胺浓度、气道擘厚度明显高于正常对照组（P〈0．01）;哮喘模型延续组明显高于哮喘模型组（P〈0.01）;组胺组明显高于哮喘模型延续组（P〈0．01）：组胺受体拮抗剂组低于哮喘模型延续组（P〈0．05,0．01）。（2）哮喘模型组PaO．小于正常对照组（P〈0．01）;哮喘模型延续组PaO2、pH、AB、SB小于哮喘模型组（P〈0．01）,而PaCO2大于哮喘模型组（P〈0．01）;组胺组PaO2、pH、AB、SB小于哮喘模型延续组（P〈0．01）,而PaCO2大于哮喘模型延续组（P〈0．01）;组胺受体拮抗剂组PaO2、pH、AB、SB高于哮喘模型延续组（P〈0．01）,而PaCO2低于哮喘模型延续组（P〈0．01）;血清Na^＋、Cl^-浓度各组间差异不明显。以上结果提示：（1）组胺在哮喘气道重塑中起介导作用。（2）应用组胺受体拈抗剂对防治哮喘气道重塑有一定作用。（3）PaO2、pH与气管、肺门支气管、肺外周小气道气道擘厚度呈负相关（P〈0．01）,而PaCO2、阴离子间隙（anion gap,AG）值与上述气道壁厚度呈止相关（P〈0．01）。