调亡蛋白：特异性触发肿瘤细胞死亡的蛋白质

凋亡蛋白 (ａｐｏｐｔｉｎ)是近年来发现由鸡贫血病毒 (ＣＡＶ)ｖｐ3基因产生的蛋白质 ,主要引起鸡淋巴细胞凋亡[1、2 ] 。进一步研究发现 ,凋亡蛋白具有一种抗肿瘤细胞特异性 ,即仅仅诱导肿瘤细胞或转化细胞凋亡 ,而对正常细胞或二倍体细胞不起作用。更让人感兴趣的是 ,凋亡蛋白诱导的凋亡不依赖功能性Ｐ5 3的生成 ,也不被ＢＡＧ 1、Ｂｃｒ ａｂｌ的生成所抑制 ,甚至不受凋亡抑制因子Ｂｃｌ 2过分产生的影响[3、4] 。这些特性预示 ,凋亡蛋白可被用作一种治疗因子 ,只要它在体内能被大量传递给肿瘤细胞 ,就可选择性地将它们根除。这一诱人的…     

Apoptin——一种特异性地促进肿瘤细胞凋亡的蛋白质

鸡贫血病毒(CAV)的vp3基因编码的一种小蛋白质apoptin,可以通过独立于p53作用途径的、不被Bcl-2过量表达所抑制的方式,诱导肿瘤细胞或转化细胞凋亡,而对正常细胞不发挥作用.Apoptin的这些特征使其可能成为一种有效的抗肿瘤药物,apoptin诱导细胞凋亡的独特方式对于研究细胞转化机制和细胞凋亡途径也很有启发.     

Procaspase-8失调与肿瘤细胞对TRAIL的耐受

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)可激活胱天蛋白酶（caspase）家族蛋白系列级联反应,最终诱导细胞凋亡. TRAIL选择性地诱导肿瘤细胞凋亡而不损伤正常细胞,使其成为治疗癌症的潜在药物靶点. 目前已知,细胞型FADD样白介素-1-β转换酶抑制蛋白(c FLIP)和凋亡抑制蛋白(IAPs)是肿瘤细胞对TRAIL耐受的主要原因.胱天蛋白酶原-8（procaspase-8）是TRAIL凋亡信号途径中的凋亡起始蛋白. 然而近年发现,在某些肿瘤细胞中procaspase-8功能失调常会阻碍凋亡信号传导,使肿瘤细胞对TRAIL诱导的凋亡产生耐受. 本文就其机制进行概述.     

ASPP2过表达可增强DRAM介导的自噬对HepG2细胞的促调亡作用

p53凋亡刺激蛋白2（apoptosis stimulating protein 2 of p53, ASPP2）能特异性地与p53蛋白结合并增强其促凋亡功能,进而发挥抗肿瘤作用.最近文献提示,自噬对肿瘤发生、发展及肿瘤细胞对抗肿瘤药物的反应都具有重要作用.在本研究中,甲基磺酸(MMS)处理HepG2细胞24 h后,用calcein AM/PI和M30染色检测细胞凋亡,可引起早期（M30免疫组化阳性）和晚期细胞凋亡（PI染色阳性）. 给HepG2细胞转染GFP-LC3质粒后,发现MMS处理24 h可引起自噬的发生. ASPP2腺病毒（rAd-ASPP2）感染HepG2细胞引起ASPP2过表达后,再用MMS处理24 h,能引起更明显的早期、晚期细胞凋亡和自噬. 荧光定量PCR检测发现,rAd-ASPP2诱导了更高的BCL-2相关X蛋白基因（BAX）和p53蛋白的目的基因p53诱导的自噬调节蛋白（p53-induced modulator of autophagy,DRAM）的表达. 但仅用rAd-ASPP2处理HepG2细胞不能引起自噬和凋亡.利用2条DRAM特异性的siRNA下调DRAM的表达,发现rAd-ASPP2引起的自噬被完全抑制, 早期和晚期凋亡均部分被抑制,同时BAX 的mRNA水平也明显下降. 以上结果说明,ASPP2可通过上调BAX和DRAM基因的转录而促进MMS引起的HepG2细胞凋亡; 另外,DRAM介导的自噬是ASPP2促进MMS引起的肿瘤细胞凋亡的机制之一. 该研究可为肝癌的基因治疗提供新的思路.     

TnI-fast基因表达抑制卵巢癌移植瘤生长

为探讨利用TnI-fast 基因进行卵巢癌基因治疗的有效性及其机制, 将TnI-fast基因 cDNA转染人卵巢癌细胞系SKOV3. 采用MTT法和流式细胞技术分别检测TnI-fast基因转染、空载体转染和未转染的SKOV3细胞体外生长状态. 收集3种细胞培养上清液, 检测3种培养上清液对人脐静脉内皮细胞增殖抑制效应. 3种细胞分别接种到裸鼠, 观察肿瘤生长、细胞凋亡、肿瘤血管生成和TnI-fast基因局部表达. 体外试验发现, 与空载体转染和未转染的SKOV3细胞比较, TnI-fast基因表达对肿瘤细胞自身的生长无抑制作用, 但可抑制人脐静脉内皮细胞增殖. 动物实验中, TnI-fast基因表达可显著抑制肿瘤生长, 生长抑制率达73%. 其肿瘤细胞增殖率与对照组相当, 但微血管密度显著降低, 细胞凋亡显著增加. 提示, 肿瘤自身血管生成抑制可显著延缓卵巢癌生长. 利用血管生成特异性抑制基因TnI-fast进行抗肿瘤血管生成基因治疗可作为肿瘤治疗的新策略之一.     

阿司匹林诱导人恶性睾丸生殖细胞瘤NTera-2细胞凋亡

阿司匹林,又称乙酰水杨酸,已证实有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制血管生成等多种抗癌功能.除已知对环氧合酶COX-2的活性有抑制外,阿司匹林抗癌分子机制尚不十分清楚.已报道阿司匹林可以降低多种癌症发生风险,但应用于人类睾丸肿瘤治疗的研究报道很少.本文研究了阿司匹林对人恶性睾丸肿瘤NTera-2细胞凋亡的机制.通过MTT方法检测细胞活力,发现阿司匹林以时间和剂量依赖方式抑制NTera-2细胞增殖.不同浓度阿司匹林处理NTera-2细胞后,采用Hoechest 33258染色方法和Annexin V-FITC/PI流式法分别检测NTera-2细胞的形态学变化、凋亡小体形成、细胞凋亡水平;RT-PCR结果显示,NTera-2细胞中Fas和caspase-8的表达以阿司匹林剂量依赖性上升;蛋白印迹结果显示,FasL的蛋白表达水平下降并活化caspase-8、caspase-3蛋白表达,PARP出现剪切体. 进一步的实验证明,caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK能够减弱阿司匹林诱导NTera-2细胞凋亡. 结果显示,阿司匹林能明显抑制NTera-2细胞活力,并通过激活caspase 通路诱导NTera-2细胞的凋亡,为进一步利用阿司匹林治疗人类睾丸肿瘤的研究奠定基础.     

来源于鸡贫血病毒的凋亡素研究进展

肿瘤化疗药物多以p53依赖性途径诱导细胞凋亡,而许多肿瘤在发生过程中丧失了D53功能;此外,在肿瘤发生过程中往往伴随着抑制细胞凋亡的bcl-2蛋白的高水平表达。而来源于鸡贫血病毒的凋亡素能够选择性地诱导肿瘤细胞和转化细胞发生凋亡,并以非p53依赖性途径诱导细胞凋亡,不受bcl-2蛋白的抑制作用。因此,凋亡素作为1种抗肿瘤制剂用于肿瘤治疗能够选择性地诱导肿瘤细胞和转化细胞发生凋亡,而并不杀伤人和鼠的正常二倍体细胞,且无毒副作用…,具有很好的临床应用前景。     

鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LDL97 Ⅰ/97株S基因特征

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种急性高度接触性传染病.该病主要侵害鸡的呼吸系统、消化系统和泌尿生殖系统,可引起雏鸡死亡,蛋鸡产蛋量和蛋品质下降,给养禽业造成很大的经济损失,成为影响世界各国养禽业发展的主要疫病之一.IBV是尼多病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)第三群的典型代表种[1].其基因组为不分节段的单股正链RNA,全长约27.6kb[2].IBV S蛋白形成病毒表面的纤突结构,翻译后的前体蛋白在跨膜时被裂解为N端的S1和C端的S2两个亚单位.S1为IBV的重要免疫原蛋白,能诱导机体产生血凝抑制抗体和病毒中和抗体[3].而且S1基因的点突变、插入、缺失或重组是IBV产生新血清型、亚型或变异株的主要原因[4].S2糖蛋白的主要功能是将S1蛋白锚定在病毒粒子的囊膜上,同时其N端也存在抗原表位[5].     

bcl-2核酶与Bax在诱导食管癌细胞凋亡中的协同作用

为了同时调节二种凋亡相关蛋白的表达诱导肿瘤细胞凋亡 ,探索肿瘤基因治疗的可能性 ,同时转入可诱导表达的特异性切割 bcl- 2的核酶基因及 bax基因 ,间接免疫荧光标记法检测 Bcl- 2及Bax蛋白的表达量 ,用 TUNEL、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 .共转染后 Bcl- 2蛋白表达下降 ,同时 Bax蛋白表达升高 ,导致 30 %左右细胞凋亡 ,并可使细胞对紫杉醇的敏感度增加近4倍 ,使紫杉醇有效作用时间缩短近一倍 .同时调节二个凋亡相关基因可导致细胞凋亡 ,并能有效促进化疗药物诱导的凋亡 .同时校正多个基因的异常表达 ,比仅仅改变单个基因可更有效地达到治疗肿瘤的目的 .     

bc-2核酶与Bax在诱导食管癌细胞凋亡中的协同作用

为了同时调节二种凋亡相关蛋白的表达诱导肿瘤细胞凋亡,探索肿瘤基因治疗的可能性,同时转入可诱导表达的特异性切割bcl-2的核酶基因及bax基因,间接免疫荧光标记法检测Bcl-2及Bax蛋白的表达量,用TUNEL、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.共转染后Bcl-2蛋白表达下降,同时Bax蛋白表达升高,导致30%左右细胞凋亡,并可使细胞对紫杉醇的敏感度增加近4倍,使紫杉醇有效作用时间缩短近一倍.同时调节二个凋亡相关基因可导致细胞凋亡,并能有效促进化疗药物诱导的凋亡.同时校正多个基因的异常表达,比仅仅改变单个基因可更有效地达到治疗肿瘤的目的.