微波在免疫组化双重染色的抗体洗脱中的应用

本文介绍一种新技术──微波加强抗体洗脱法。在酸洗脱液中微波辐射（最低能量档）３分钟．完全除去经ＰＡＰ法染色后的垂体前叶切片上的抗体复合物;双重染色显示两种形态和颜色不同的细胞。切片在Ｔｒｉｓ缓冲盐液中微波辐射３分钟,或分别浸入室温和约５０℃的酸洗脱液中２小时和３分钟,抗体复合物不能被洗脱,或洗脱不完全;双重染色时出现假性双标记细胞。结果表明微波具有加强抗体洗脱的作用,是一种快速、有效的除去免疫酶双重染色中抗体复合物的方法。     

免疫酶双重染色中抗体洗脱的进一步研究

本实验进一步检查了三种常用的洗脱方法从切片上除去免疫酶组织化学染色后的抗体的效果。结果表明,PAP法染色后,氧化法的抗体洗脱完全,效果可靠;酸洗法和酸洗/二甲基甲酰胺法的效果视不同抗体而不同,二甲基甲酰胺单用或用于酸洗后似无效。所用方法均不能从ABC法染色的垂体组织切片上完全除去抗体复合物。因之,将ABC法用于第一抗体来源于同一动物种的双重染色中,来显示第一种抗原时,要特别注意排除假性双标记。     

EnVision与特异性抗体的一步法免疫组织化学标记

探讨En Vision与特异性抗体复合一步法免疫组织化学标记的可行性及其应用效果。筛选适合于该法的特异性抗体。利用辣根过氧化物酶标记的第二抗体（En Vision）分别与72种单克隆和多克隆特异性抗体混合配制成即用型试剂,将两步标记法变为快速微波一步法,并对2100余例各种良性和亚性肿瘤的免疫组化标记结果进行观察和分析。结果显示绝大发特异性抗体的特异性和敏感性与标准En Vision法相似,其中46种特异性抗体结果稳定,重复性佳;14种特异必抗体稳定性欠佳,但临用前新配制效果仍较理想;12种不理想,不主张用于此法,结果表明En Vision与特异性抗体复合免疫组化一步法是一种有效、快速、简便的免疫组化染色技术。适用于临床病理快速免疫组化诊断,但对所用的特异性抗体应注意选择。     

微波照射(M W I)在组织学中的应用

近年来国外利用微波（ＭＷＩ）技术对组织进行固定和染色均获得良好效果,在医学领域中,无论是基础医学还是临床学科,微波技术以其方便、快捷、无污染的优点,均证明是具有广泛前景的技术手段,目前日益得到大家的重视和应用。在组织学中一般组织的固定大多采用传统的化学固定及低温冷冻固定方法,化学固定组织时间较长,低温冷冻固定,存在着组织结构易被冰晶破坏,对比染色效果差,细胞核着色不清晰等缺点,我们采用化学固定剂结合微波辐射热固定法,即利用微波对组织均匀穿透的特点和其高频振动所产生的能量使组织迅速固定,对组织进行…     

他莫昔芬诱导的Cre重组酶在hGfapCreERT2转基因鼠小脑中的表达研究

目的探讨他莫昔芬诱导的hGfapCreERT2转基因鼠小脑中表达Cre重组酶的细胞类型。方法 hGfapCre-ERT2/Rosa26R转基因小鼠在胚胎晚期和出生早期用他莫昔芬诱导Cre重组酶表达,对小脑组织切片行X-gal染色,然后用细胞种类特异性抗体进行免疫组织化学染色,并和X-gal染色双重标记。结果在出生后第7天(P7)、第14天(P14)和第60天(P60),X-gal阳性染色和胶质细胞抗体Blbp阳性染色共标记,和神经元抗体Neun、浦肯野细胞抗体Calbindin及少突胶质细胞前体细胞抗体NG2不共标。结论自胚胎晚期第17.5天(E17.5)后用他莫昔芬诱导hGfapCreERT2转基因鼠,发现Cre重组酶特异性在小脑星形胶质细胞中表达,不在神经元、浦肯野细胞、少突胶质细胞前体细胞中表达。     

真空负压ABC法在各种组织相关抗原检测的应用研究

在免疫组化染色过程中,如何把各组织中的相关抗原充分地显示出来,许多免疫组化工作者进行了各种方法的探讨。但是,其结果却不十分理想,主要问题是染色的背景深及组织切片容易脱离载片,造成染色的失败。真空负压在免疫组化染色过程中的应用,能减少步骤,缩短时间,消除非特异性染色,使背景清晰,易于判断结果。并且避免了组织切片脱落现象,还可提高某些抗体的稀释度。此法均可使用金属性或非金属性器皿,而且整个过程都可在室温中进行,比微波技术更为简便易行,安全可靠,实用性强,成本低,有较大的推广价值。     

应用微波辐射促进组织块浸银染色

目的：探索微波辐射对组织块浸银染色各步骤的作用及微波在其中的应用方法。方法：在组织块浸银染色过程中,对组织块的固定,浸银,还原等步骤进行不同强度的微波辐射处理。结果：微波辐射明显促进了浸银,还原作用,应用适宜强度的微波辐射染色效果比常规染色有更多的优点。结论：恰当地应用微波辐射缩短组织块浸银染色时程,切实可行。     

三种自动免疫组化仪的染色结果比较分析

目的 探讨常用Leica、Roche和Dako等3种常用自动免疫组化仪在免疫组织化学染色过程中的优缺点.方法 选取中山大学第一附属医院病理科在2021年4月期间进行免疫组织化学染色病例,抽取常用25种抗体进行评分,相同抗体在3种不同自动免疫组化仪的同时行免疫组织化学染色,染色结果由病理医生和技术质控员一起评议.结果 相...     

抗体滴定在血液细胞流式细胞术中的应用

流式细胞术（flow cytometry）可以实现高速、逐一的细胞定量分析和分选，是研究和诊断血液病的重要手段之一。但是由于不同实验所用细胞和实验条件不同，经常存在抗原阴性细胞非特异染色等问题。利用抗体滴定法，可通过计算、比较染色指数，得到使抗原阳性细胞群和阴性细胞群达到最佳分离效果的实验条件。为了优化血液细胞流式细胞术中荧光抗体染色的实验条件，以小鼠骨髓细胞为被标记细胞，选择利用非串联荧光染料FITC标记的大鼠抗小鼠CD11b抗体（FITC Rat Anti-Mouse CD11b）和串联荧光染料APC-eFluor780标记的大鼠抗小鼠CD11b抗体（APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b）进行标记。通过计算不同浓度抗体标记小鼠骨髓细胞的染色指数进行抗体滴定，确定合适的抗体浓度区间，进而分析细胞数量、染色时间及固定步骤对抗体染色指数的影响，探究影响血液细胞抗体染色的关键因素。结果显示，FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b的浓度分别在0.156~2.500 μg·mL-1和0.25~1.00 μg·mL-1范围内染色指数较高，但是超出这个范围的抗体浓度会使染色指数降低；抗体浓度、染色时间一定时，FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b分别在细胞数量为1.56×105~5.00×106 cells·管-1和1.56×105~3.12×105 cells·管-1范围内染色指数较高，但是超出这个范围的细胞数量会使染色指数降低；抗体浓度、细胞数量一定时，对于FITC Rat Anti-Mouse CD11b，随着染色时间的延长，染色指数降低，而APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b与之相反；通过比较固定前后染色指数的高低发现，FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b在固定后染色指数均显著下降（P<0.01和P<0.05）。研究结果提供了一种通过抗体滴定优化流式分析血液细胞的方法，并指出在特定实验中根据抗体滴定结果选择合适的抗体浓度、细胞数量、染色时间和固定步骤对标记血液细胞进行流式检测的研究至关重要。     

微波辐射技术在癌细胞DNA染色中的应用

微波辐射技术在癌细胞ＤＮＡ染色中的应用＠胡海霞＠李春光＠谷化平＠苏红￥中国人民解放军第二五一医院病理科微波辐射技术在癌细胞ＤＮＡ染色中的应用胡海霞李春光谷化平苏红（中国人民解放军第二五一医院病理科,张家口０７５０００）癌细胞ＤＮＡ含量测定和倍体分析是近年肿...     

一种新型的抗原检测系统——免疫-PCR

一种新的抗原检测系统(技术)——免疫-PCR,最近由Takeshi Sano等发明。该系统以特定DNA分子作为标记物,利用链霉亲和素与蛋白A的交链物既能与生物素又能与抗体结合的双重特性,将抗原抗体复合物和生物素化DNA连接起来,形成特定的抗原抗体复合物-链霉亲和素蛋白A交链物-生物素化DNA结合物。     

利用微波固定组织的收缩率

目的探讨利用微波辐射固定、微波辐射与固定液结合固定组织的收缩程度。方法将组织分成40组,用一定强度的微波辐射或一定强度的微波辐射与不同固定液结合方法固定动物组织,并制做石蜡组织切片和HE染色,在此过程中测定各步骤前后的组织块体积,计算出收缩率。结果与结论一定强度的微波辐射和一些微波辐射与固定液结合方法固定的组织收缩率低,这些组织的切片具有细胞质均匀,染色鲜艳,细胞核大而清晰的良好效果。     

光波/微波组合-EDTA修复COX-2抗原及其在乳腺癌的表达及意义

目的观察不同抗原修复方法及修复液对COX-2抗原表达的影响及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法用光波/微波、高压锅结合枸椽酸缓冲液、EDTA作抗原修复处理,分别用即用型和浓缩型COX-2单克隆抗体对70例乳腺癌石蜡切片进行免疫组织化学染色。结果①光波/微波组合-EDTA、CA修复浓缩型COX-2的阳性率均比即用型COX-2的阳性率高(P0.01)。②高压锅抗原修复处理切片的免疫组化染色阳性率略比光波/微波的免疫组化染色阳性率高,但无统计学意义(P0.05);高压锅抗原修复处理的切片组织结构破坏程度和掉片情况均比光波/微波处理的重;③EDTA修复处理切片的免疫组化染色阳性率明显比用CA修复处理切片的免疫组化染色阳性率高(P0.01)。④COX-2表达水平与淋巴结转移有显著关系(χ2=5.24,P0.05);与年龄、肿瘤大小、组织学类型和分级之间无明显关系(P0.05)。结论用光波/微波-EDTA修复COX-2抗原,浓缩型COX-2抗体标记可明显提高免疫组织化学染色的敏感性,具有定位准确、阳性率高、操作简单、安全、组织结构保存好、不易掉片等优点;COX-2的表达与淋巴结转移显著相关,可作为乳腺癌的预后指标。     

HE染色细胞核灰染的处理方法比较研究

目的探讨HE染色细胞核灰染的处理方法,提高HE染色质量。方法收集10例HE染色发灰的胃粘膜、肠息肉和子宫内膜等不同类型的组织,重新切片,通过调整苏木素染色条件以及染色前对组织进行修复处理,设对照组,比较各种处理方法的染色效果。结果通过延长时间、水浴加热和微波加热等调整苏木素染色条件的方法以及水煮修复处理法能够不同程度地促进核染色,但灰染现象未能彻底解决。PBS、EDTA、柠檬酸分别采用高压和微波修复处理均能较好地改善HE染色细胞核灰染现象,以PBS微波处理法效果最佳。结论 PBS微波处理法是HE染色细胞核灰染现象的一种有效处理方法。     

微波快速免疫荧光组化染色方法的研究

本文应用微波辐射方法加速免疫荧光组化染色(间接和直接法),分别定位15种不同组织抗原,并应用连续切片同时用两种不同的孵育方法即微波辐射和常规孵育方法进行比较。结果证明,经微波辐射后免疫荧光组化染色时间大大缩短,背景染色明显好于常规法,阳性率和阳性强度与常规法基本一致。     

微波在Cajal染色中的应用

在Cajal氨酒精去神经组织块镀银染色过程中,对固定、浸银、还原等过程进行微波辐射处理,结果表明微波辐射能明显促进固定、浸银、还原作用,使组织块镀银染色时程大大缩短。     

骨组织的脱钙及其免疫组织化学技术的探讨

骨组织的免疫组织化学染色 (ＩＨＣＳ)技术不同于普通石蜡切片常用的ＩＨＣＳ技术 ,有许多特殊性。为了提高骨组织ＩＨＣＳ的质量 ,本文根据骨组织及其ＩＨＣＳ技术的特点 ,对影响ＩＨＣＳ质量的几个问题进行了探讨。免疫组织化学染色 (Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇ,ＩＨＣＳ)技术是用已知的标记的特异性抗体或抗原对组织内相应抗原或抗体进行定性、定位或定量检测 ,经组织化学反应 ,使标记于特异性抗体的酶、金属及荧光素等呈现出某种颜色 ,并借助于光镜、荧光显微镜及电子显微镜等观察所显示的颜色和变化 ,从…     

移植肾活检组织C4d免疫组化方法的比较

目的探讨移植肾活检组织C4d免疫组化检测方法 ,寻求其实验的标准化。方法 121例移植肾活检和10例供肾标本根据ALPCO抗体手工免疫组化结果将病例分为四个组:C4d弥漫阳性组、局灶阳性组、阴性组和供肾组,采用ALPCO和ABCAM两种C4d抗体,石蜡切片行手工免疫组化和全自动免疫组化机器套染技术(以下简称机器套染),比较两种抗体和染色方法的染色结果。结果 ALPCO和ABCAM两种抗体手工免疫组化和机器套染在肾小球毛细血管基底膜(GBM)和肾小管周围毛细血管(PTC)均有良好着色,在20例ALPCO抗体手工免疫组化为弥漫阳性组标本中,染色强度在+至+++之间,而机器套染均为+,有7例标本机器套染染色强度低于手工染色,但并不改变染色的弥漫程度,另有3例其机器套染为局灶阳性;而ABCAM抗体其手工免疫组化和机器套染染色强度除1例为阴性外,其余均为+,有3例手工免疫组化和4例机器套染为局灶阳性。对于ALPCO抗体手工免疫组化为局灶阳性组的标本,其机器套染和AB-CAM抗体染色重复性较差:其机器套染有1例为阴性,而ABCAM抗体手工免疫组化有2例、机器套染有3例为阴性。ALPCO抗体手工免疫组化阴性组和供肾组标本,其机器套染和ABCAM抗体染色均为阴性,重复性良好。同时机器套染与手工免疫组化相比,拥有更好的染色背景,而且大大缩短了染色时间,更有利于急诊肾活检和免疫组化实验的标准化。结论虽然ALPCO和ABCAM两种抗体染色效果有小的差异,但总体重复性良好。ABCAM抗体在染色过程中尤其是机器套染应注意防止假阴性。手工免疫组化和机器套染联合使用为C4d免疫组化染色提供更为快捷、可靠的技术保障。     

微波用于检测五项乙型肝炎病毒标志物

微波用于检测五项乙型肝炎病毒标志物王力（安徽省凤阳县二院检验科,２３３１２２）近年来有人利用微波所具有的反射、穿透、吸收的三种特性,将微波应用于骨髓涂片铁染色,免疫组织化学等方面。我们以微波辐射代替加温作ＥＬＩＳＡ法测定五项ＨＢＶ标志物（ＨＢＳＡｇ、...     

ANKRD17蛋白抗体的制备、纯化及检测

目的：制备ANKRD17（P260）蛋白的兔多克隆抗体,以与抗原相结合的方法进行抗体的纯化,并利用纯化的抗体对该蛋白进行细胞内免疫荧光检测。方法：构建表达GST—ANKRD17C端融合蛋白的质粒,在大肠杆菌中诱导表达;制备GST—ANKRD17C端抗原融合蛋白后免疫家兔,对获得的兔多克隆抗血清进行亲和纯化;纯化后的抗体经过Western blot鉴定,用于细胞免疫荧光染色检测。结果：获得较高效价的血清抗体,并对血清抗体进行了纯化;利用纯化的抗体对ANKRD17蛋白进行了细胞内免疫荧光检测,发现改蛋白定位于细胞质中。结论：制备得到的纯化抗体为研究ANKRD17蛋白的功能打下了必要的基础。