辐射增敏剂增敏活性的分子连接性研究

计算４２个辐射增敏剂的各阶分子连接性指数ｍＸｔ及△ｍＸｔ,并对其中３８个非对称性化合物的分子连接性指数与其增敏活性进行定量构效关系（ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｒｅＳｔｒｕｃｔｕｒｅＡｃｔｉｖｉｔｙＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ,ＱＳＡＲ）的研究,得到相关方程。并分析了影响增敏活性的１ｇＰ、ＥＳ及σ在一定程度上都可通过分子连接性指数表达出来。对这些增敏剂进行分子对称性的研究,发现对称性会降低分子的极性,进而降低其增敏活性。另外,还发现在这些增敏剂中存在亚类现象,并对各亚类的反应机理进行了探讨。     

survivin在二烯丙基二硫诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的:研究survivin在二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导HepG2细胞凋亡中的作用。方法:MTT法检测细胞的生长活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR法检测survivin mRNA水平;Western blot法检测survivin蛋白水平。结果:用药组HepG2细胞活性与正常组相比,随着药物浓度的增加(25,50,100,200μmol/l),分别下降了9．3%、10．4%、21．6%、31．2%,HepG2细胞凋亡率分别增加0．83%、1．97%、6．0%、9．9%,低浓度(25,50μmol/l)的DADS可以诱导survivin mRNA和蛋白表达升高,而高浓度的(100,200μmol/l)DADS可以降低survivin mRNA和蛋白表达。结论:DADS诱导HepG2细胞survivin表达增加,抵抗DADS诱导HepG2细胞的凋亡作用。     

RAF-1与辐射增敏

RAF-1在调控细胞增殖和凋亡的信号转导途径中起着关键作用。近期研究发现,阻断RAF-1或其介导的信号通路中其他信号分子位点,可以显著提高部分辐射抵抗肿瘤的辐射敏感性。     

核黄素体外辐射增敏机理研究

采用MTT方法和荧光显微镜技术, 以小鼠胸腺细胞和人肝L02细胞株为研究对象, 对核黄素的体外辐射增敏作用进行研究. 在5 Gy ⁶⁰Co γ 射线辐照条件下, 低浓度(5~50 μmol/L)和高浓度(100~400 μmol/L)核黄素作用下的小鼠胸腺细胞存活率的时间依赖关系表现出明显的差异, 其规律为: 低浓度下, 细胞受g射线辐照后并不立刻大量死亡, 但随着时间的推移存活率迅速下降, 4 h后存活水平降低到较低的水平; 而高浓度下, 细胞立刻大量的死亡, 且随时间的变化, 细胞存活仅有微弱的下降. 荧光显微镜研究结果显示, 核黄素在细胞中的分布因高浓度和低浓度而有所不同, 低浓度时核黄素集中于细胞核区, 高浓度时细胞膜区也有较高的分布. 由此得到结论: 低浓度时(<50 μmol/L), 核黄素作用的位点在细胞核, 对DNA辐射损伤增敏; 高浓度时(>100 μmol/L), 核黄素辐射增敏的主要靶位点为细胞膜, 两者均显示出核黄素对细胞辐射损伤具有显著的增敏效应.     

二烯丙基二硫对人白血病K562细胞增殖及Bcl-2表达的影响

目的:探讨二烯丙基二硫(DADS)对白血病K562细胞增殖的影响,以及Bcl-2表达的调节作用.方法:用DADS预处理白血病K562细胞构建细胞模型,MTT法分别检测不同DADS浓度(5 gmL-1、10 g mL-1、20 g mL-1、40 g mL-1)和不同处理时间(6h、12h、24h、48h)细胞增殖情况,IC50浓度处理白血病K562细胞之后,Western blot和RT-PCR检测Bcl-2蛋白和mRNA表达水平.结果:MTT结果显示DADS能够抑制白血病K562细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性;IC50浓度的DADS处理K562细胞24小时后,Bcl-2蛋白和mRNA的表达量显著减少.结论:DADS可显著抑制K562细胞增殖,而这一作用可能与Bcl-2表达下调有关.     

二烯丙基二硫诱导人白血病K562 细胞凋亡及其对Bax、Bag-1 表达的影响

目的:探讨二烯丙基二硫(Diallyl disulfide)诱导白血病K562细胞凋亡的作用及其机制。方法:采用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法观察细胞凋亡形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯度带;RT-PCR法检测BAG-1、BAX基因的mRNA表达变化。结果:DADS可诱导K562细胞凋亡。其对K562细胞的凋亡效用与药物浓度、有明显依赖关系;DNA琼脂糖凝胶电泳示:40mg/LDADS作用K562细胞48小时后能够产生明显的梯形电泳图谱(DNA ladder):DADS作用48h后,BAX mRNA表达水平较对照组上调;BAG-1 mRNA较对照组下调(差异具有统计学意义,P<0.05)。结论:DADS能够诱导K562细胞凋亡,其凋亡机制可能与上调BAX,下调BAG-1有关。     

Nitrotriazole(NTA)衍生物对中国仓鼠V_(79)细胞的辐射增敏作用

TA—101是一种亲水性三氮唑酰胺的衍生物.采用中国仓鼠V_(79)细胞,通过方便的形成克隆的方法评价了它的增敏活性,而且和Adams教授所赠送的MISO进行了比较.用~(60)CO7射线源照射,剂量率为0.936GY/min.增敏比(OER)由用药则无药时的存活曲线的D_(37)剂量计算.该实验的氧增比(OER)为2 5.接种效率为80±5%.TA—101的浓度为O.2,1.0和2.0mM时其 ERS,分别为1.49,2.05和2.3.实验结果表明0. 2mM TA—101无细胞毒性.TA—101的同类物即使使用5mM也未必察到明显毒性,因此TA—101.是一种有潜力的乏氧细胞辐射敏化剂.     

辐射增敏剂甲硝唑氨酸对坪期V_(79)细胞DNase活力的影响

研究了辐射增敏剂甲硝唑氨酸(CM)对受照前后坪期V_(79)细胞DNase活力的影响。结果表明CM在一定浓度范围内(1—10mmol/L)对DNase的激活作用有浓度依赖关系。细胞经6—12Gyγ线照后DNase活力亦增高,若照射合并CM处理后,则对DNase激活有相加作用。还就DNase活力升高与DNA链断裂间的可能关系进行了讨论。     

微波辐射相转移催化合成二烯丙基二硫化物的研究

本文用微波辐射相转移催化法合成了二烯丙基二硫化物,研究了微波辐射功率、微波辐射时间、相转移催化剂的量以及反应物的摩尔比等因素对产品产率的影响。最佳反应条件为:以蒸馏水为溶剂,四丁基溴化铵作相转移催化剂,n(二硫化钠)∶n(烯丙基氯)=0.65∶1,ω(二硫化钠)∶ω(四丁基溴化铵)=47.67∶1,微波功率195W,微波辐射时间12 min,收率82.2%。证明合成的二烯丙基二硫化物对HepG2细胞具有细胞毒性。     

二烯丙基二硫作用于K562细胞后凋亡相关基因的差异表达

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide DADS)作用于人白血病K562细胞后凋亡相关基因的差异表达,为进一步探讨DADS诱导K562细胞凋亡的分子机制提供基础.方法:采用瑞士-吉姆萨和Hoechst33342染色观察细胞形态学变化.运用基因芯片技术检测40 mg/LDADS作用于K562细胞24h后凋亡相关基因的差异表达,选择其中上调基因GADD45A、下调基因HO-1运用RT-PCR技术进行验证.结果:40mg/L的DADS作用于K562细胞后出现凋亡所具有的典型形态学变化.40 mg/L DADS作用K562细胞24 h后有14个凋亡相关差异表达基因.GADD45A、HO-1基因表达情况与基因芯片结果一致.结论:DADS可能通过多个基因和多条信号转导通路共同作用诱导人白血病细胞K562凋亡.     

二烯丙基二硫上调Beclin1 介导白血病K562 细胞自噬性死亡的研究

目的：通过二烯丙基二硫诱导白血病K562 细胞发生自噬性死亡,探讨其作用机制。方法：40 mg/LDADS 作用K562 细胞12 小时后,透射电镜观察K562 细胞超微结构,MDC 染色荧光显微镜观察自噬泡及流式细胞仪定量检测自噬率,RT-PCR 检测Beclin1mRNA 的表达水平。结果：DADS 作用后的K562 细胞后,透射电镜可观察到胞质内出现大量自噬体;MDC染色荧光显微镜观 察显示,K562 细胞胞浆中的自噬泡明显增多,而空白组与溶媒组胞浆中的自噬泡很少;流式细胞术定量测定空白对照组、溶媒对 照组、DADS药物组自噬率分别为(7.27± 5.60)%、(7.10± 5.13)%、(27.39± 6.51)%（P<0.05）;空白对照组为0.658± 0.007,溶媒对 照组为0.671± 0.012,两者的Beclin1mRNA 的表达强度无明显差异（P>0.05）,DADS 药物组为0.911± 0.008,高于对照组（P<0. 05）。结论：二烯丙基二硫可诱导白血病k562 细胞发生自噬性死亡,其机制可能与Beclin1 的上调有关。     

二烯丙基二硫上调Beclin1介导白血病K562细胞自噬性死亡的研究

目的：通过二烯丙基二硫诱导白血病K562细胞发生自噬性死亡,探讨其作用机制。方法：40 mg/LDADS作用K562细胞12小时后,透射电镜观察K562细胞超微结构,MDC染色荧光显微镜观察自噬泡及流式细胞仪定量检测自噬率,RT-PCR检测Beclin1mRNA的表达水平。结果：DADS作用后的K562细胞后,透射电镜可观察到胞质内出现大量自噬体;MDC染色荧光显微镜观察显示,K562细胞胞浆中的自噬泡明显增多,而空白组与溶媒组胞浆中的自噬泡很少;流式细胞术定量测定空白对照组、溶媒对照组、DADS药物组自噬率分别为（7.27±5.60）%、（7.10±5.13）%、（27.39±6.51）%（P〈0.05）;空白对照组为0.658±0.007,溶媒对照组为0.671±0.012,两者的Beclin1mRNA的表达强度无明显差异（P〉0.05）,DADS药物组为0.911±0.008,高于对照组（P〈0.05）。结论：二烯丙基二硫可诱导白血病k562细胞发生自噬性死亡,其机制可能与Beclin1的上调有关。     

沉默UVRAG基因在二烯丙基二硫诱导K562细胞中caspase3的表达

目的:沉默UVRAG基因在DADS诱导K562细胞中观察caspase3的表达。方法:以K562细胞为细胞模型,将构建成功并筛选出最有效干扰抑制UVRAG基因的si RNA序列片段采用lipofectamine TM2000脂质体转染法转染白血病K562细胞,组别为:空白对照组,转染试剂组、阴性对照组,阳性对照组,转染24小时后,利用QT-PCR检测UVRAG m RNA的表达水平以此观察干扰效果,再以40 mg/LDADS处理转染试剂组12小时,采用蛋白印迹(Western Blotting)技术检测凋亡相关基因caspase3的表达。结果:QT-PCR显示:与空白组相比,UVRAG m RNA表达明显减少,表明沉默UVRAG基因成功;Western Blotting显示:DADS处理的干扰成功的K562细胞12小时后,检测到caspase3的蛋白表达水平下降。结论:沉默UVRAG基因能使白血病K562细胞中凋亡相关基因caspase3的蛋白表达水平下降,提示抑制UVRAG表达的同时也可能抑制DADS诱导K562细胞的凋亡。     

大黄酸氨基酸衍生物合成及放射增敏作用的初步研究

本文以大黄酸为先导化合物,将其3位羧基分别与亮氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、色氨酸、蛋氨酸、脯氨酸和2-氨基丁酸的氨基形成酰胺键,合成8个衍生物,再碱化得钠盐。采用MTT法测定这些化合物对H460肺癌细胞的体外生长抑制活性。选取活性较好的化合物,在相应的IC15和IC20浓度下,初步测定放射增敏活性。结果显示除大黄酰色氨酸钠在24 h和48 h和大黄酰脯氨酸钠在48 h有促进增殖作用,其余大黄酸氨基酸钠盐衍生物对肺癌H460细胞具有显著的浓度和时间依赖型生长抑制活性。其中大黄酰亮氨酸钠作用24、48、72 h的IC50值分别为279.863、92.735、65.567μM,大黄酰异亮氨酸钠作用24、48、72 h的IC50值分别为205.251、164.222、77.442μM,抑制作用较大黄酸钠有明显提高(P<0.05)。初步放射增敏活性测定表明,大黄酰异亮氨酸钠在相应的IC15和IC20浓度下与照射联用,测得的OD值均小于单纯照射组,说明它有放射增敏作用。此结果可为后续寻找高效低毒的肿瘤放射治疗增敏药物提供研究基础。     

C 阿霉素一纤维蛋白胶缓释化疗系统对S ,80 荷瘤小鼠的抑瘤实验研究

目的：探讨阿霉素-纤维蛋白胶缓释化疗系统对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法：建立S180荷瘤小鼠模型,将30只模型小鼠分为四组：A组10只,阿霉素以2／剂量局部注入肿瘤内部。B组10只,瘤内注入阿霉素．纤维蛋白胶缓释系统0．2ml（含阿霉素2／）。C组10只。瘤块内注入纤维蛋白胶0．2ml。D组10只,空白对照组。给药后每3天测量记录一次肿瘤大小,观辑各组平均肿瘤体积缩小情况。结果：A、B、C、D四组的肿瘤缩小比率分别为50％、100％、20％、10％,肿瘤抑制率分别为36．85％、77．42％、6．00％、6．52％,与空白对照D组相比。A、B组对S180肉瘤抑制作用明显（P〈0．01）,而B组的抑瘤作用明显强于A组（P〈0．05）．C组与D组无明显差异（P〈0．05）。结论：阿霉素-纤维蛋白胶缓释化疗系统以及阿霉素均能够有效的抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长。前者的抑瘤作用更为明显,可能是一种安全可靠的新化疗方式．     

蛋白质二硫键异构酶家族的结构与功能

蛋白质二硫键异构酶（protein disulfide isomerase,PDI）家族是一类在内质网中起作用的巯基-二硫键氧化还原酶.它们通常含有CXXC（Cys-Xaa-Xaa-Cys,CXXC）活性位点,活性位点的两个半胱氨酸残基可催化底物二硫键的形成、异构及还原.所有PDI家族成员包含至少一个约100个氨基酸残基的硫氧还蛋白同源结构域.PDI家族的主要职能是催化内质网中新生肽链的氧化折叠,另外在内质网相关的蛋白质降解途径（ERAD）、蛋白质转运、钙稳态、抗原提呈及病毒入侵等方面也起重要作用.     

Autodegradation of Protein Disulfide Isomerase

Protein disulfide isomerase (PDI) and its degradation products were found in HepG2, COS-1, and CHO-K1 cells. Whether or not the products were formed through autodegradation of PDI was examined, since PDI contains the CGHC motif, which is the active center of proteolytic activity in ER-60 protease. Commercial bovine PDI was autodegraded to produce a trimmed PDI. In addition, human recombinant PDI also had autodegradation activity. Mutant recombinant PDIs with CGHC motifs of which cysteine residues were replaced with serine or alanine residues were prepared. However, they were not autodegraded, suggesting the cysteine residues of motifs are necessary for autodegradation.     

大豆低聚糖对小鼠体液免疫功能的影响试验研究

通过利用大豆低聚糖对小鼠灌服后溶血素生成量的测定,阐明大豆低聚糖对小鼠体液免疫功能的影响。     

二硫化钼纳米材料在生物传感器中的应用

近年来纳米材料的不断引入，为生物传感技术提供了新的研究途径，大大提高了生物传感器的性能。其中，二硫化钼(MoS₂)纳米材料由于比表面积大、带隙可调、电子迁移率高等独特性质，在生物传感器中被广泛应用。本文首先介绍了基于MoS₂纳米材料的电化学、场效应晶体管、表面增强拉曼散射、比色、双模式生物传感器的基本原理、研究进展及性能对比，重点分析了MoS₂纳米复合材料的结构、组分等对传感器灵敏度、检测范围、检测限、特异性等性能的影响，总结了MoS₂生物传感器的优势并对其未来发展趋势进行了展望，为MoS₂生物传感器在生物检测领域的进一步应用以及未来研究方向提供了思路。