限制性内切酶反应缓冲液配制

低盐缓冲液中盐缓冲液高盐缓冲液smal缓冲液 10mM 10mM lmM 10mM 50mM 10mM lmM100mM 50mM 10mM lmM 20mM 10mM 10口IM lmMTris一el(pH7 .5)MgCI:盛TTTr七一el(pH7.5)NaCIMgC】:D口fTNaCITr此一el(pH7.5)MgCI:八TTKCITr认cl(pHS.o)MgCI,奋TT。限制性内切酶反应缓冲液配制 ~~     

中学生物实验常用溶液的配制

1.甲醛:一般常用5％甲醛溶液;保存液用4％浓度。市售甲醛溶液浓度为40％,加7倍、9倍水,就可配制成5％、4％的甲醛溶液。     

分子克隆常用储备液的配制

溶液配制方备注IMTris把121。1克Tris碱溶于Rooml水中,所需值。浓盐酸大约用最 7Oml 60ml 42ml溶液冷至室温后,调至所需Pl,值,高压灭菌。用浓魏酸调pH至所需p” PH了.4 P!百7。6 PHS。0定容至1升,分装如果配制后的溶液有黄色,应弃掉,选用高质歇Tri,垂配。有些型号电极不能堆确测量Tris溶液的PH值,但适用的电极有很 多厂家生产n把186.1克EDTANa22HZo加人800ml水中,用磁力搅拌器剧烈搅拌,用NaOH调PH至8.0(约20克固体NaoH),分装。     

双向凝胶电泳比较三种常用蛋白质提取方法

组织(或细胞)的蛋白质提取效率直接影响蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)的分辨率.为探索建立适用于人乳腺癌细胞株MCF-7蛋白质提取的最佳条件,比较目前在双向凝胶电泳中常用的3种蛋白质提取方法对MCF-7细胞总蛋白的提取效率.MCF-7细胞经培养后,分别采用M-PER试剂、标准裂解液或含硫脲裂解液提取其总蛋白质,然后进行双向凝胶电泳,并根据凝胶上蛋白质斑点的丰度和分布特点判断所得双向电泳图谱的质量,以确定MCF-7细胞蛋白质提取的相对最佳方法.结果显示,M-PER试剂法得到的图谱分辨率较低,蛋白质主要集中分布在分子量15~70kD,pH4.7~6.3的范围内;标准裂解液法得到的图谱分辨率有所提高,蛋白质分布比M-PER试剂法得到的图谱广;硫脲裂解液法得到的图谱是三者中分辨率最高的,尤其是高丰度蛋白和高分子量蛋白分离效果比前两者好.结果表明,在3种常用的蛋白质提取方法中,硫脲裂解液对细胞蛋白质的溶解性最佳,相对更适合于提取MCF-7细胞的蛋白质,并与双向凝胶电泳条件更兼容.     

琼脂糖凝胶电泳

Ⅰ琼脂糖凝胶 琼脂糖凝胶电泳是在卧式电泳装置上进行的,因为:(1)它为低浓度的琼脂糖凝胶提供了较好的支持体系,(2)在电泳过程中较少发生扭曲,(3)所得的DNA带比较直。最容易操作的凝胶体系,是将琼脂糖凝胶完全浸没在电泳缓冲液之下约1毫米     

磷酸盐缓冲液菌种保藏法

本文报道采用磷酸盐缓冲液保藏常见常用塞矿油保藏法作比较。保藏3年的结果表明,微生物24属51种的结果,并以胶塞斜面和胶磷酸盐缓冲液法保藏效果高于其它二法。测定     

琼脂糖凝胶电泳技术

九、碱性琼脂糖凝胶 科学家们认为,琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的一种极好的方法。这种技术操作简单,快速,并且还能解决在密度梯度离心中所存在的DNA片段不能充分分离的难题。此外,还能直接确定凝胶中DNA的位置:其方法是先用低浓度的能发荧光的具有插入本领的染料(溴乙锭),对胶中DNA条带进行染色;然后,把电泳胶置于紫外光下进行直接检测,其灵敏度可达1毫微克(ng)。     

限制性片段凝胶电泳

DNA琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳装置的设计有很多种。有些装置很容易用玻璃或有机玻璃制成,而且用这些简单装置可得到极好的结果(图1)。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳

电泳是分离混合物中离子成分的最有效方法之一。以聚丙烯酰胺凝胶作支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳。这种电泳方法分辨率高,灵敏度大,重复性强,并且操作简便,因此广泛应用于分子生物学,生物化学,细胞学,免疫学,酶学等学科的研究,近年来在微生物分类上的应用也逐渐引起人们的注意。例如1968年     

单细胞凝胶电泳技术

单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis assay,SCGE)也叫彗星试验,是一种快速、敏感、简便的细胞DNA损伤检测技术。章简要介绍了SCGE的原理、主要技术流程及其注意事项、存在问题与发展前景。     

蛋白质的双相凝胶电泳

双相凝胶电泳由于它分辨力高、重复性好、方法灵敏,已成为蛋白质研究的一种十分有用的工具,广泛地应用于生物化学、分子生物学和植物生理学的研究中。有人把双相凝胶电泳与计算机分析结合起来,用于复杂蛋白质组分的分离和鉴定,使双相凝胶电泳的应用具有更加广阔的前景。     

链分离凝胶电泳技术

由于某些原因,(例如,用Maxam—Gibert方法测定序列;与低含量RNA杂交。)有时需要获得双链相互分离的DNA分予片断。通常采用的方法是让变性的DNA在中性琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳。许多DNA片断的两条互补链在凝胶中有不同的迁移率,其原因尚不清楚。     

单细胞凝胶电泳应用研究进展

单细胞凝胶电泳技术是被广泛使用的检测DNA损伤的技术,其具有灵敏度高、简便、经济、快速等各种优点。在近30年来,该技术广泛被应用于遗传毒理、环境监测、医学诊断等研究及各类实验证实方面。近些年单细胞凝胶电泳与荧光原位杂交等其他技术相结合后更是拓宽了它的应用范围,本文主要介绍了单细胞凝胶电泳的原理及优劣,并重点阐明了其在遗传毒理学、细胞凋亡、环境监测、群体生物学、临床诊断与治疗,生物信息学领域上的应用,并讨论了它的发展前景。     

双向凝胶电泳技术进展

双向聚丙烯酰胺凝胶电泳按等电点和分子量对蛋白质进行分离,具有很高的分辨率,已经成为蛋白质组研究中的核心技术之一。目前的方法还难以满足真核生物蛋白质组研究的要求。自1975年O'Farrell提出该方法以来,针对应用中常见的一些问题,如样品的增溶及加载,样品的预分级分离,阴极漂移和凝胶上蛋白质的回收等,对这种技术进行了不断的改进。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳技术

聚丙烯酰胺凝胶用于分析和制备长度小于1,000碱基对的DNA片段。 根据所研究的DNA片段的大小,可以选用从3.5％到20％的不同浓度的聚丙烯胺凝胶。     

简易连续密度梯度凝胶电泳

目前,圆盘电泳由于其操作的简便和测定的灵敏已在生化研究中广泛地应用。但是,对于一些含有多种蛋白质分子的样品来讲,一种胶的浓度往往不能同时适合于各种蛋白质分子的分离。连续密度梯度凝胶由于其凝胶的浓度可在一定范围内(如4％—12％)连续地逐步增加,故颇能得到良好的     

转移缓冲液对蛋白质印迹的影响

利用三种转移缓冲液,分别以半干和湿转法,检测癌基因产物Bcl-2, 并获得不同强度的印迹结果.不含SDS的转移缓冲液转移效果明显优于含SDS的转移缓冲液,且SDS含量越高印迹带越弱;此外,半干转移与湿转相比,可大大缩短转移时间,但转移效果不及湿转理想且稳定性较差.     

核糖核酸的聚丙烯酰胺凝胶电泳

自从1959年报道了聚丙烯酰胺凝胶电泳以来,这种电泳方法已有了迅速的发展和广泛的应用。它与纸电泳、琼脂电泳、淀粉胶电泳等相比,具有更多的优点。例如:机械强度好、无色透明、纯度高;在很多种溶剂中不溶解、不带电荷,故没有造成污染的问题,也没有