一种新的无传染性的检测HBeAg抗HBe的单克隆酶联免疫吸附法(MonoLISA)的建立与应用

应用我室自1988年5月以来建立的抗乙型肝炎e抗原两个抗原决定簇的单克隆抗体,和在大肠杆菌中高效表达的乙型肝炎病毒e抗原,组装成检测HBeAg/抗HBe的酶联免疫试剂(简称Mo-noLISA)。测定了该试剂的特异性、敏感性和可重复性,并与用日本单克隆抗体和血清e抗原组装的类似的EIA试剂进行了比较。结果两种试剂检测92份乙肝病人血清e抗原和38份血清e抗体的总符合率,分别为97.8％和100％。用两种试剂同时滴定一份已知HBeAg阳往和一份抗-HBe阳性的血清,证明两者的敏感性无显著差异。重复性试验证实,该试剂的重复率为100％。由此证明,用抗-HBeMcAb和基因工程抗原组装的诊断试剂,特异性强,敏感性高,可重复性好,且无传染性。这不仅为诊断试剂原材料的更新提供了丰富的来源,而且将该类试剂提高到一个新水平。     

间接血凝试验检测抗乙型肝炎表面抗原的抗体

间接血凝试验是将抗原吸附在红血球上,当遇到血清中存有相应抗体时,即可发生血球凝集。间接血凝试验检测抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抗体(Anti-HBs)较琼脂扩散、对流电泳和补体结合试验敏感性高,而与放射免疫试验敏感性近似,且具有优于放射免疫的简     

关于双醛化被动血凝法若干问题的探讨

本文报道了探讨双醛化被动血凝法一些影响因素的结果,认为固定方法,致敏时的pH,致敬物的浓度,以及致敏红细胞的浓度,均对血凝滴度有影响。用纯化的乙型肝炎抗体致敏双醛化羊红细胞,作反向被动血凝试验,可以测出每毫升含3．73毫微克的乙型肝炎抗原。用纯化的乙型肝炎抗原致敏双醛化羊红细胞,作被动血凝法可检测,乙型肝炎抗体;在4℃保存的致敏红细胞,其滴度至少在4个半月内无明显变化。比较了对流免疫电泳、放射对流免疫电泳和反向被动血凝三种方法,用于检测病人血清中乙型肝炎抗原的敏感性和特异性。三种方法的相对敏感度相应为l：20：600。用这三种方法检测407侧患者血清样品的阳性率,相应为2．2％、11.3％和13．3％,反向被动血凝法敏感性最高,但特异性差;放射对流免疫法敏感度虽稍差,但特异性高。如果与抑制试验结合应用,反向被动血凝法是一种可以推广的简便检查方法。     

流行性出血热冻干致敏人O型血球的研制及其应用

本文应用致敏的人O型血球研究反向间接血凝(RPHA)和反向间接血凝抑制(RPHI)方法用以检测流行性出血热抗原抗体,并试验成功用pH9.0硼酸盐水制备灭活鼠脑病毒液作为抗原。为抗原制备提供了一种简便的方法。以上RPHA法用于检测组织培养内病毒与用荧光法检测细胞内病毒抗原法结果一致,用RPHI检测病人血清抗体效价,特异性高,敏感性与IFA相同。该致敏血球和抗原是冻干制品,稳定性好、使用方便,是一种代替荧光检测病毒抗原和抗体的良好制品。     

猴结核病血清抗体检测方法的建立

目的目前活检猴感染结核病的检疫方法只有结核菌素试验。由于检测方法的单一性,结核菌素试验敏感性和特异性低,给灵长类结核病的管理带来困难。为此,开展了猴结核病血清抗体的检测方法。方法利用胞浆蛋白、结核菌素、Trehalose 6,6-’dimycolate(TDM)分别作为抗原建立猴结核病血清抗体ELISA检测方法,检测了28份自然感染血清和121份阴性血清,评价其应用价值。结果根据三种抗原对标本检测结果的敏感度和特异度,用受试者工作特性曲线(ROC)进行分析比较。胞浆蛋白、结核菌素、TDM三种抗原检测的敏感度分别为89.3%、75%与64.3%;特异度分别为93.4%、95.9%与88.4%。ROC曲线下面积都大于0.5(P<0.01)。结论表明三种抗原能用于抗猴结核病的ELISA检测,具有较好的准确性。其中,胞浆蛋白抗原的敏感性和特异性最高,是猴结核病血清抗体检测较好的一种抗原。     

用反向被动血凝及血凝抑制方法检测流行性出血热病毒抗原和抗体

本文建立了检测流行性出血热病毒(EHFV)液体抗原及抗体的反向被动血凝(RPHA)和血凝抑制(RPHI)方法,RPHA检测EHFV抗原的敏感性与ELISA相近;RPHI检测EHFV抗体与IFA的符合率为97.3％,敏感性略低。     

新型冠状病毒S蛋白抗体制备及双抗体夹心ELISA抗原检测方法的建立

由SARS-CoV-2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2)引起的新型冠状病毒肺炎(Corona virus disease 2019,COVID-19)自2019年底暴发以来,已导致上亿人次感染和数百万人死亡,严重威胁着全人类的生命健康。为了建立一种能快速对新冠病毒疫苗中S蛋白抗原进行定量检测的方法,本研究通过免疫山羊制备多克隆抗体作为包被抗体,通过杂交瘤细胞技术制备了S蛋白特异性单克隆抗体并作为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA抗原检测方法,并验证其线性范围、敏感性、特异性、稳定性及符合率。结果显示,建立的双抗体夹心ELISA检测方法线性范围为1U~64U,相关系数R²大于0.99;特异性良好,敏感性为92.1%;批内和批间变异系数分别为2.5%~11.7%和1.3%~14.8%,检测已知背景样本符合率为96.7%。结果表明,该方法特异性好、敏感性高、且稳定性和准确性高,可用于新冠疫苗中S蛋白抗原含量测定。     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲脂蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断。     

利用基因工程表达核心抗原转化的E抗原制备抗HBeAg单克隆抗体

采用两种变性剂将大肠杆菌基因工程高效表达的乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)转化成为E抗原(HBeAg),其ELISA滴度达1:1000以上,而核心抗原滴度为零。用此抗原免疫小鼠,一次融合即获十四株抗乙型肝炎病毒E抗原的单克隆抗体。细胞培养上清抗体滴度为1:10-1:1000以上,腹水滴度为1:1000-1:100,000以上。十三株IgG、一株IgM。其中十株为抗HBeAg(b)决定簇,四株抗(a)决定簇。它们的敏感性及特异性与日本用血清E抗原制备的单克隆抗体效果完全一致。这是国内外首次应用基因工程表达核心抗原转化E抗原成功 地建立分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞株。     

从唾液中检出乙型肝炎表面抗原

自乙型肝炎表面抗原发现以来,从抗原阳性肝炎病人和抗原携带者的各种体液、分泌物(如:唾液、精液、乳汁)和排泄物(如:汗、尿、大便)中,检出乙型肝炎表面抗原,这方面已有报道。我们在农村防治肝炎试点工作中,检测了抗原阳性病人及携带者的唾液标本,获得阳性结果,现简报如下。     

生殖器疱疹病毒抗原的两种检测结果比较分析

比较分析生殖器疱疹病毒抗原的两种检测方法,找出更为准确、简便、经济、实用的检测方法,分别利用疱疹病毒抗原酶免疫(ELISA)法和荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测南方医科大学珠江医院门诊患者538例。酶免疫法检出率为27.5%,略低于荧光定量PCR法的28.3%,经SPSS12.0分析,两种方法检测结果无显著差异。酶免疫法检测生殖器疱疹病毒抗原具有操作简便、快捷、经济等特点,而敏感性和特异性均无显著差别,是一种更适合临床的检验方法,更具有值得推广使用的价值。     

检测人巨细胞病毒的免疫PCR技术的建立

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是一种广泛传播的病毒,初次感染后,病毒潜伏存在于体内,但可被激活出现复发感染。诊断HCMV近期活动性感染,主要依靠实验室检测。传统的病毒分离、血清中抗CMV-IgM及CMV抗原等的检测,敏感性差,易漏诊;核酸杂交、PCR等方法虽然敏感性高,但既可检出复制的病毒DNA,也可检出潜伏、整合     

单克隆抗体在酶联免疫吸附试验检测单纯疱疹病毒抗原中的实用性

本文采用ELISA双夹心法,通过对70份临床送检标本HSV抗原的检测,评价了单克隆抗体(McAb)在快速检测HSV抗原中的实用性。McAb ELISA法的敏感性为20～30TCID50/0.1ml,临床送检标本病毒抗原的检出与病毒分离结果的一致率为85％。两种McAb混合使用,可以提高方法的敏感性。     

乙型肝炎病毒与乙型肝炎疫苗

乙型肝炎已成为严重威胁人类健康的世界性疾病之一,我国也是高流行区。现在对本病的认识与研究逐渐深入,已取得了很多研究成果。本文仅就乙型肝炎的病原(乙型肝炎病毒)和与疫苗有关的两个问题简述如下: (一)乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(HBV)属DNA病毒,该病毒与其相关抗原颗粒在电镜下分三种不同形态:直径为22nm小球型颗粒、直径为22nm长为200nm的管状颗粒和直径为42nm的大球型颗粒(又称Dane颗粒)。一般认为Dane颗粒是完整的病毒。这三种形态病毒颗粒的衣膜均由表面抗原(HBsAg)组成,不含核酸。Dane颗粒衣膜内为27nm的核心,核心部分包括核心抗原(HBcAg)和e抗原(HBeAg)、内源性DNA模板及相应的DNA聚合酶。据研究HBV进入肝细胞浆脱去衣膜,其环形     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲胎蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。以链酶亲合素搭桥将生物素标记的抗体与ＤＮＡ相连建立了免疫ＰＣＲ技术,并将其用于检测甲胎蛋白（ＡＦＰ）,其敏感性比ＥＬＩＳＡ法高１０４。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断     

我国禾谷类病毒病的病原问题 Ⅸ.应用酶联免疫测定法检测小麦丛矮病植株

酶联免疫测定法(简称ELISA)是一种具有高度特异性和敏感性的检测方法。它的基本原理是:利用双功能试剂制备抗体(或抗原)与酶的结合物,该结合物保留了免疫学和酶的活性,酶与底物溶液产生的颜色反应可以定量测定。此法能在极低浓度下定量检测特异的抗原(或抗体),适用于疾病的大规模普查和流行病的调查。自E.Engvall和     

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV血清标志物同时检测及临床意义

目的：了解前S1抗原与HBV血清标志物的关系。方法：采用ELSIA方法同时检测2101例乙型肝炎病毒感染者的前S1抗原和HBV血清标志物。结果：29例HBsAg( )、HBeAg( )标本中,有28例前S1抗原阳性,阳性率96．55％;784例HBsAg( )、HBeAg( )、抗HBc( )标本中,有679例前S1抗原阳性,阳性率86．6l％;276例HBsAg( )、抗HBc( )标本中,有197例前S1抗原阳性,阳性率71．38％;1012例HBsAg( )、抗Hbe( )、抗HBc( )标本中,有468例前S1抗原阳性,阳性率46．25％。结论：前S1抗原作为病毒复制的指标与HBeAg具有很好的一致性,又具有其独立的检测价值,可弥补HBV血清标志物检测的不足。     

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV血清标志物同时检测及临床意义

目的 :了解前S1抗原与HBV血清标志物的关系。方法 :采用ELSIA方法同时检测 2 1 0 1例乙型肝炎病毒感染者的前S1抗原和HBV血清标志物。结果 :2 9例HBsAg( )、HBeAg( )标本中 ,有 2 8例前S1抗原阳性 ,阳性率 96.5 5 % ;784例HBsAg( )、HBeAg( )、抗HBc( )标本中 ,有 679例前S1抗原阳性 ,阳性率 86.61 % ;2 76例HBsAg( )、抗HBc( )标本中 ,有 1 97例前S1抗原阳性 ,阳性率 71 .38% ;1 0 1 2例HBsAg( )、抗Hbe( )、抗HBc( )标本中 ,有 468例前S1抗原阳性 ,阳性率 46.2 5 %。结论 :前S1抗原作为病毒复制的指标与HBeAg具有很好的一致性 ,又具有其独立的检测价值 ,可弥补HBV血清标志物检测的不足。     

免疫—PCR技术进展

免疫－ＰＣＲ结合了抗原抗体反应的特异性和ＰＣＲ的高敏感性,是一种极为敏感的抗原检测技术,并适合于各种微量抗原的检测。免疫－ＰＣＲ的关键在于形成抗体－标记ＤＮＡ偶联物,作为桥梁连接免疫反应的特异和ＰＣＲ的高扩增能力。本文简述了－ＰＣＲ的基流程以及与标ＤＮＡ相偶联,ＰＣＲ产物检测方法的进展。     

葡萄糖-6-磷酸-异构酶抗原对老年人类风湿性关节炎的诊断价值

目的:探讨葡萄糖-6-磷酸-异构酶抗原(GPI抗原)及类风湿因子(PF)的检测对老年人类风湿性关节炎(EORA)的诊断价值.方法:分别用ELISA法、速率散射比浊法检测49例RA患者和49例非RA的老年健康对照者血清GPI抗原和RF.运用四格表和受试者工作特征曲线评估两者对EORA诊断效能.结果:GPI抗原对EORA的敏感性、特异性和准确性分别为81.63%、93.87%及87.75%,阳性和阴性拟然比分别为13.3和0.19.RF诊断EORA的敏感性、特异性和准确性分别为73.46%、79.59%、76.53%,阳性和阴性拟然比分别为3.16和0.35.GPI抗原诊断准确性高于RF(P=0.013).GPI抗原诊断EORA的ROC曲线下面积(AUC)为0.913(95%CI,0.852-0.975),优于RF(P<0.001)结论:GPI抗原对EORA具有较好的敏感性和很高的特异性,在诊断EORA时较RF有更高的价值.